三宝护童羹对变应性鼻炎幼鼠模型细胞免疫机制的影响研究.pdf

2024年第45卷第1期云南中医中药杂志85三宝护童羹对变应性鼻炎幼鼠模型细胞免疫机制的影响研究阳成琳，陈利，冯乔芳，冉志玲3（1.西南医科大学，四川泸州6 46 0 0 0；2 长宁县中医院，四川长宁6 4430 0；3.西南医科大学附属中医医院，四川泸州6 46 0 0 0)摘要：目的为通过免疫因子及蛋白表达水平变化探讨三宝护童羹制剂(SBHTG)对卵蛋白(OVA)致SD幼鼠过敏性鼻炎（AR)肺脾气虚型模型的治疗作用及机制研究。方法将32 只2-3周龄SPF级SD大鼠分为A组：空白组,B组：模型组,C组：西药组,D组：中药组,每组各8 只。适应性喂养5d后,除A组给予生理盐水模拟造模外，其余各组给予全身致敏+局部致敏法共计2 1d，自第15d起开始给药物干预，14d后处理。通过HE染色法评价鼻黏膜的病理形态学,以ELISA检测鼻炎相关细胞因子水平变化,取脾脏运用 Western blot法检测炎症相关蛋白水平变化。结果与A组比较,B组幼鼠鼻部症状评分、血清IL-4及IgE含量显著升高(P0.01),三宝护童羹制剂及氯雷他定干预后显著回调;血清中INF-含量及脾脏中Foxp3蛋白表达显著降低(P0.01),三宝护童羹制剂及氯雷他定干预后显著上升。C、D 组幼鼠鼻部症状评分、血清IgE及IL-4水平下降明显(P0.01);C、D 组幼鼠血清 INF-含量显著降低(P0.01);C、D 组脾脏组织中Foxp3蛋白表达显著升高(P0.01);C、D 组鼻黏膜上皮纤毛较模型组整齐连续，上皮水肿情况、杯状细胞及EOS浸润较B组减轻。结论推断三宝护童羹可有效调控变应性鼻炎模型幼鼠免疫功能,这可能与上调INF-水平及Foxp3蛋白表达水平，下调IL-4、I g E水平有关。关键词：变应性鼻炎；三宝护童羹;Foxp3蛋白；干扰素；白细胞介素4;免疫球蛋白E中图分类号：R765.21文献标志码：A文章编号：10 0 7-2 349(2 0 2 4)0 1-0 0 8 5-0 8Effect of Sanbao Hutong Decoction on Cellular Immune Mechanismof Allergic Rhinitis In Young Rat ModelYANG Cheng-lin,CHEN Li?,FENG Qiao-fang,RAN Zhi-ling(1.Southwest Medical University,Luzhou 646000,Sichuan,China;2.Changning Hospital of Traditional Chinese Medicine,Changning 644300,China;3.The Afiliated Hospital of Traditional Chinese Medicine,Southwest Medical University,Luzhou 646000,China)AbstractObjective:To study the therapeutic effect and mechanism of Sanbao Hutong Decoction(SBHTG)onallergic rhinitis(AR)model of qi deficiency of lung and spleen in SD young mice induced by OVA through the chan-ges of immune factors and protein expression levels.Methods:32 SPF SD rats aged 2-3 weeks were divided intoblank group A,model group B,western medicine group C and Chinese medicine group D,8 rats each group.After 5days of adaptive feeding,except for group A,the other groups were given systemic sensitization+local sensitizationmethod for 21 days,drug intervention began on the 15th day,and the treatment was given 14 days later.The pathologi-cal morphology of nasal mucosa was evaluated by HE staining,the changes of rhinitis related cytokines were detected byELISA,and the changes of inflammatory related proteins were detected by Western blot.Results:Compared with thoseof group A,the nasal symptom score,serum IL-4 and IgE contents were significantly increased in group B(P 0.01),and significantly decreased after intervention with Sanbao Hutong Decoction and loratadine.INF-content inserum and Foxp3 protein expression in spleen were significantly decreased(P 0.01),and were significantly in-*基金项目：四川省中医药管理局课题（2 0 2 3MS464）第一作者简介：阳成琳（1996），女，硕士研究生，研究方向：中西医结合儿科呼吸、消化系统疾病。通信作者：冉志玲,E-mail:86creased after intervention with Sanbao Hutong Decoction and loratadine.Nasal symptom scores,serum IgE and IL-4levels of the rats in groups C and D were significantly decreased(P0.01).Serum INF-content in groups C andD was significantly decreased(P0.01).The expression of Foxp3 protein in spleen tissues of groups C and D wassignificantly increased(P0.O1).The nasal mucosal cilia in groups C and D were more orderly and continuous thanthose in the model group,and the epithelial edema,goblet cells and EOS infiltration were less severe than those ingroup B.Conclusion:It is concluded that Sanbao Hutong Decoction can effectively regulate the immune function ofyoung mice with allergic rhinitis model,which may be related to up-regulating INF-level and Foxp3 protein ex-pression level,and down-regulating IL-4 and IgE level.Key wordsAllergic Rhinitis;Sanbao Hutong Decoction;Foxp3 Protein;Interferon;Interleukin 4;Immuno-globulin E云南中医中药杂志2024年第45卷第1期儿童变应性鼻炎（allergic rhinitis,AR）以鼻痒、流涕、喷嚏为主要症状，常在接触变应原后发作,具有高发病率及高复发率的特点。儿童AR是由免疫球蛋白E（i m m u n o g l o b u l i n E，I g E）介导免疫细胞释放化学介质诱发的I型变态反应炎性疾病 2 。随着分子免疫学的发展,现已证实AR发病机制与Th1/Th2免疫失衡及Treg 细胞分化下调密切相关 3。目前世界范围内AR患者已超过5亿，我国华中地区儿童患病率最高（17.2 0%），华东地区患病率最低为（13.94%）4。目前临床治疗儿童AR多用鼻内激素及组胺药物,虽起效快速但无法降低复发概率 5。相关文献 表明儿童AR降低了患儿的生活质量,亦可诱发一系列变态反应性疾病,因此尽快探寻长效、经济、温和的儿童AR的治疗方法至关重要。有研究表明 7 ,较于西药来说,中药治疗儿童 AR毒副作用更小、远期疗效稳定。临床小儿鼻以脾肺两虚证最为常见，导师在参苓白术散基础上进行加减化裁，得出治疗小儿鼻临床疗效显著、具备良好的社会效益的三宝护童羹（SBHTG),其具有培土生金、肺脾同治之效 8 。因此致力于开展关于调控Th1/Th2 细胞失衡及上调Treg细胞分化的免疫学研究,从中医药入手，积极寻找治疗儿童AR的药物关键靶点，为三宝护童有效治疗儿童AR提供科学依据。1材料与方法1.1实验动物SPF级SD雌性大鼠的2 3周幼鼠（50 g 5）g,32 只,购于西南医科大学动物实验中心，动物许可编号：SYXK（川）2 0 18 0 6 5；饲养于西南医科大学动物房，饲养环境：温度2 0 2 6，湿度40%70%，饲养期间正常进食、饮水。1.2实验药品1.2.1中药三宝护童羹（山药10 g，黄精10 g,茯苓10 g，白扁豆10 g，薏苡仁10 g，陈皮6 g，莲子6 g，大枣6 g)免煎颗粒剂型购于西南医科大学附属中医医院中药房。将三宝护童羹制备为生药量浓度10.12 g/mL。1.2.2?西药氯雷他定片,购自西南医科大学附属中医院第一西药房,5mg/袋,海南普利制药股份有限公司（批号：H20110018）。使用蒸馏水溶解后稀释为浓度 0.1 mg/mL。1.3实验试剂见表1。表1实验主要试剂表试剂批号卵清蛋白A8040氢氧化铝A713010%水合氯醛cysj00374%多聚甲醛BL539APBS磷酸盐缓冲液ZLI-9062无水乙醇(AR级)20180511二甲苯(AR级)20180425切片石蜡YA0012苏木素(AR级)LM10N13伊红染色液G1100中性树胶20180329一抗 AQP5bs-1554RAQP5 酶测试剂盒JYM0359RaPCR引物XY-TE-0840INF-ELISA 试剂盒 SEKR-0008-48TIgE ELISA 试剂盒SEKR-0019-48T1.4实验仪器见表2。厂家Solarbio有限公司Solarbio有限公司大茂有限公司biosharp有限公司北京中杉金桥生物技术有限公司成都科龙化工试剂厂成都科龙化工试剂厂国药集团化学试剂有限公司北京百灵威科技有限公司Solarbio有限公司中国上海懿洋仪器有限公司北京博奥森生物科技有限公司武汉基因美生物科技有限公司上海炬雅生物科技有限公司Solarbio有限公司Solarbio有限公司2024年第45卷第1期表2 实验主要仪器表仪器名称规格型号移液器711111090000智能型超速离心机XPN-100组织研磨仪器HF-48酶标仪RT-6100洗板机ZMX-988B组织包埋盒31050102W包埋机BMJ-II转轮式切片机徕卡-2 0 16数码三目摄像显微镜竞BA400Digital病理组织漂烘仪PHY-II1.5方法1.5.1幼鼠AR造模采用全身致敏+局部致敏法 建立变应性鼻炎模型后将卵白蛋白(OAV)30 mg、AL(OH)33g和10 0 mL0.9%生理盐水混合后注释计量为0.0 1mLgl,腹腔注射初次免疫,第15d双侧鼻孔给予4%OVA200g(50L)滴鼻加强免疫。1.5.2肺脾气虚造模肺气虚模型：参考实用中医证候动物模型学,购置8 0 cm40cm40cmPVC材料收纳盒，一双孔艾灸盒，每次点燃2 根香烟固定在艾灸盒内，将艾灸盒放置于收纳盒中，进行烟熏，每次烟熏30 min,每次8 只,共14 d。脾气虚模型：参考实用中医证候动物模型学，给予大黄苦寒泄下法建立，西南医科大学附属中医医院制剂室熬制浓度15%大黄液，以0.1mL/10g进行灌胃，每天1次，共7 d。1.5.3分组及给药选取32 只雌性幼鼠随机成4组,每组8 只,分别为A组：空白组,B组：模型组,C组:西药组,D组:中药组。C 组予地氯雷他定干混悬剂0.52 5gkg=1,D组予三宝护童羹制剂7.14gkg。A 组与B组同期给予等量生理盐水。1.5.4检测步骤1.5.4.1行为学观察AR造模评价 9：鼻部症状激发后观察10 min,采用叠加量化积分法见表3，总分5分则为造模成功。1.5.4.2肺脾气虚造模评价观察幼鼠出现便、脱肛、饮食减少、体重增加较空白组减慢、倦卧、萎靡等脾气虚及行动迟缓、蜷伏不动等气虚症状则视为成功。1.5.4.3标本采集及处理在末次灌胃给药2 4h后取材。将大鼠麻醉成功后采集腹主动脉血液约5mL,静置2 h,3500r/min离心15min后-8 0 冰箱保存。云南中医中药杂志剥离大鼠脾脏，装人冻存管中置于8 0 冰箱保存。厂家表3AR鼻部症状评分表大龙有限公司鼻部症状Optima有限公司流鼻沸0 分：无鼻沸；1分：流至前鼻孔；2 分：超过前上海净帆有限公司鼻递Rayto有限公司鼻孔；3分：沸流满面Tianshi有限公司喷嚏0 分：无喷嚏;1分：1 3个；2 分：4 10 个；3喷嚏江苏世泰实验器材有限公司分：10 个以上常州郊区中威电子仪器厂挠鼻0 分：无挠鼻；1分：轻度挠鼻（5次以下）；2 分：德国徕卡有限公司抓鼻频繁挠鼻（5 10 次）；3分：挠鼻不止（10 次以上）麦克奥迪实业集团有限公司常州市中威电子仪器有限公司87激发后观察10 分钟，采用叠加法积分取大鼠鼻黏膜，4%多聚甲醛固定,脱水石蜡包埋,切片，苏木精一伊红染色后观察。1.5.4.4鼻组织形态学测定HE染色，显微镜下观察鼻黏膜组织病理学改变。1.5.4.5细胞免疫因子测定参照ELISA试剂盒说明书,按步骤检测大鼠血清 IL-4、I NF-、I g E 水平。1.6Westernblot法检测大鼠脾脏Foxp3蛋白表达水平取大鼠脾脏组织,提取总蛋白,BCA法测定蛋白浓度,进行SDS-PAGE电泳，转膜后脱脂奶粉封闭1h,加人一抗Foxp3（1:10 0 0）,4孵育过夜，二抗室温孵育1h,TBST洗膜,二抗室温孵育 1h,TBST洗膜，加入ECL发光显色液，放人暗室，置入凝胶成像系统(bio-rad)成像拍照,用凝胶成像系统分析蛋白及内参-actin表达条带的灰度值。1.7统计学方法运用SPSS27.0统计学软件进行统计学分析,本实验数据为计量资料,样本量 50,故选择夏皮洛威尔克（Shapirow i lk，SW）进行正态性检验,符合正态分布以（s）表示,若方差齐则2组数据采用独立样本t检验，多组数据采用单因素方差分析；若方差不齐，采用t检验；不服从正态分布者,采用非参数Kruskal-wallis 检验。P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1各组大鼠鼻部症状评分结果A组、B组、C组、D组鼻部症状评分分别为（0.40.5）分、（6.9 0.6)分、(3.0 0.8)分、(3.10.8)分,B组、C组、D组评分差异显著（P0.05）,可以说明D组及C组均可明显减轻鼻部症状,见表4、图 1。C组及D组与B组之间评分差异显著(P0.05）,可以说明D组及C组均可明显减轻鼻部症状。表4幼鼠鼻部症状评分表标号A组1号12号03号04号15号06号07号08号12.2HE染色形态学观察主要表现为鼻黏膜局部的组织重塑。本实验结果显示,变应性鼻炎动物模型组鼻黏膜上皮结构紊乱且不完整,纤毛粗细不一,出现上皮细胞固缩、坏死甚至脱落现象,可见明显腺体增生、肿胀、出血及嗜酸性粒A云南中医中药杂志1078B组C组6373748463727273变应性鼻炎的炎症损伤2024年第45卷第1期D组6-344423324O2-0图1幼鼠鼻部症状评分细胞等炎性细胞浸润，显示出鼻黏膜组织重塑特征；空白组大鼠鼻黏膜组织结构完整、平滑且排列整齐，腺体大小正常，未见明显炎性细胞浸润、上皮坏死脱落及明显血管扩张或充血现象；与模型组相比,中药、西药组纤毛脱落现象减少，仍有少许腺体增生，血管稍扩张,组织水肿较模型组明显好转，而上皮细胞排列较整齐,其组织重塑现象减轻，见图2。BACDD图2 鼻黏膜HE染色（x400倍）A:空白组B：模型组C:中药组D:西药组2.3?干预后各组 IL-4、I NF-Y、I g E水平比较C组与 D组IgE水平较B组水平显著降低(P0.05)。说明地氯雷他定可有效降低IgE水平；地氯雷他定较三宝护童羹降低IgE水平效果明显。见图3。与A组相比，B组血清中INF-含量显著降低(P0.05),IL-4含量显著升高(P0.05);与B组相比,C、D 组血清中INF-含量显著升高(P0.05),D 组与 C 组 IFN-水平差异无统计学意义（P0.05);与B组相比,C、D组血清中 IL-4 含量降低(P0.05),且 D 组变化显著于C组(P0.05),两者差异显著(P0.001);说明地氯雷他定及三宝护童羹均可有效降低IL-4水平、提高IFN-水平，三宝护童羹降低IL4水平明显于地氯雷他定，地氯雷他定提高IFN水平明显于三宝护童2024年第45卷第1期羹。见表5、图4、图5。2.071.5-1.0-0.50.0表5干预后各组 IL-4,IFN-,IgE水平比较(xs,pg/mL)组别IL-4A组66.19 10.63B组99.34 17.90C组97.40 16.37D组92.69 12.961507100-7150-00.570.4-0.30.2-0.10.02.5各组大鼠幼鼠脾脏中Foxp3蛋白表达水平比较结果由图6、表6 所示，Foxp3蛋白表达水平云南中医中药杂志H=25.636,P0.001,说明四组数据之间存在统计学差异,以中位数（P25,P75）做表。B组 Foxp3蛋白表达水平较空白组明显下降（P0.001）,C 组及D组Foxp3蛋白表达水平均模型组上升（P0.01)。A组B组C组OD组AB图3IgE水平IFN-621.02 79.99395.05 199.99457.69 114.10447.34 65.08 AB图4各组IL-4水平AB图5INF-水平89CD6.48 0.857.98 2.148.66 1.558.41 1.21 00088CDCDGAPDH图6 Westernblot法检测各组幼鼠脾脏中Foxp3蛋白表达水平表6 Foxp3蛋白表达水平IgEFoxp3 中位数(P25,P75)A组(n=8)33.32(32.11,33.69)B组(n=8)14.78(8.04,16.34)C 组(n=8)27.17(25.37,29.05)*D 组(n=8)27.03(25.87,28.53)*注：与模型组比较，*P0.053讨论文献研究表明 10 1AR已经成为儿童主要的呼吸道炎性疾病,且常伴发或继发多种并发症或疾病。近年来研究表明，中医在治疗AR方面具有长效、安全、毒副作用小、价格低廉等西医治疗无法兼顾的优势。我们的前期研究已证实，三宝护童羹制剂对于机体的减少呼吸系统疾病发生、肠道免疫及细胞免疫功能都具有正向调节作用。多种炎症及免疫细胞因子参与了在 AR的发病过程,当前 Th1/Th2免疫失衡及Treg 分化是AR发病的研究热点 12 。因此本研究继承了前期研究的基础,运用三宝护童羹治疗AR幼鼠(肺脾气虚型)并观察治疗前后Th1/Th2免疫失衡的下游细胞因子INF-、I L-4及Treg细胞的上游转录因子Foxp3蛋白水平的变化情况,进一步明确了三宝护童羹治疗儿童AR与纠正Th1/Th2免疫失衡及上调Treg细胞分化有关，为三宝护童羹治疗儿童AR提供免疫学相关依据。儿童变应性鼻炎在中医属于“鼻”范畴,是内外因共同作用的结果,外因责之于外感邪气，内因责于小儿肺、脾、肾不足的生理特点密切相关 14。导师冉志玲教授依据“百病皆由脾胃生”的观点提出本病90由肺脾肾三脏所致,其中以脾虚为核心。小儿脏腑娇弱、脾本不足,加之生长发育旺盛、脾胃负担繁重，每当饮食、用药稍有不慎，脾胃受损，百病遂生；小儿肺本不足，脾肺为母子之脏，脾气不足导致肺气更虚、抗邪能力进一步减弱；肾为先天之本，决定先天赋，赋不足则体质虚弱不耐邪侵。凡表虚不能卫外者，当先建立中气,以脾旺荫护五脏,表自固而邪不干。导师冉志玲教授总结多年临证经验：小儿鼻由肺脾气虚为主,故治疗上以培土生金，健脾益肺为主，使脾胃健而邪自去，同时正气存内，可减少复发；以“健脾益气,补肺益肾”为法自拟药膳方三宝护童羹治疗过敏性鼻炎患儿，并在临床上取得满意疗效，且因其药食同源，味道甘美，简便价廉，为广大患儿及家属广泛接受。三宝护童羹组成为山药10 g，黄精10 g，茯苓10g，白扁豆10 g，薏苡仁10 g，陈皮6 g，莲子6 g，大枣6 g。据研究显示 13,山药的主要成分为山药多糖，山药蛋白及皂苷类：其中山药多糖可有效减少炎症因子分泌，阻断炎症信号通路以抗炎；还能促进脾淋巴细胞增殖及分化从而强化T淋巴细胞的增殖,提高优势细胞因子分泌水平，最终能使机体免疫力增强。黄精中多糖及皂苷是起作用的主要成分,其中黄精多糖可正向调节B淋巴细胞的免疫球蛋白分泌能力 14。茯苓中有效成分：茯苓多糖能增加血清中免疫球蛋白水平,从而增强免疫；茯苓多糖和茯苓三枯亦可通过抑制伤处肉芽肿的形成而起到抗炎作用 15。薏苡仁多糖能促进NK细胞活性及增殖功能，增强免疫、降低血管通透性及炎症因子分泌水平起到抗炎作用 16 。有研究 17 指出了陈皮“走窜 之性,，故其能起到运脾之效,其主要成分为陈皮苷,其中陈皮挥发油可解平喘，抗组胺。莲子多酚具有抗氧化、抑制沙门氏菌及大肠杆菌的作用 18 。体外实验 19 表明大枣多糖能抑制促炎因子的释放、增强体液免疫和细胞免疫。IgE即是免疫球蛋白E,是免疫球蛋白类型中的一种主要,其介导I型变态反应的发生，与变态反应、寄生虫感染及皮肤过敏等有关 2 0 。IgE在AR发病机制：变应原进人机体后，被抗原呈递细胞吞并激活B淋巴细胞,导致变应原特异性IgE的产生,IgE 附着于肥大细胞和嗜酸性粒细胞表面，当再次接触变应原云南中医中药杂志后,IgE与受体结合交联,激活肥大细胞、EOS释放组胺和白三烯等炎症递质，进而刺激鼻黏膜引发鼻痒、喷嚏、流涕等症状 2 1。本文实验表明，与模型组比较,西药、中药组血清中IgE含量显著降低,且中药组比西药组IgE含量降低变化显著，表明三宝护童羹能够通过减少变应原特异性IgE的产生,抑制了IgE介导的免疫反应,从而有效阻止AR发生。IL4主要是由CD4*T或活化的肥大细胞产生，其能促进 T、B 细胞增殖和诱导黏附分子表达 2 。IL-4能增强B细胞对细胞的抗原递呈作用,抑制嗜酸粒细胞调亡,促进体液免疫应答,特别是促进IgE介导的免疫反应 2 3。研究表明,IL-4为 IgE的正性调节因子,IL-4 的过度分泌,可导致 AR患者血清中IgE 合成过多 2 4。有实验证明 2 5 IL-4、Ig E 均参与AR的免疫发病机制,所以降低 IL-4 含量,可减少IgE合成,成为了防治 AR 的重要途径之_ 2 6 。INF-又称免疫干扰素或型干扰素,是抗原或有丝分裂原等刺激T细胞而产生的具有免疫调节、抗病毒及抗肿瘤活性的糖蛋白,它能广泛地使各种类型的细胞表达,放大免疫应答的识别阶段，促进T和B淋巴细胞分化,促进细胞毒性T细胞成熟并刺激B细胞分泌抗体,激活中性粒细胞,除此之外它还是单核吞噬细胞、NK 细胞、血管内皮细胞的激活因子及 IgE 的拮抗因子 2 7 。它可以阻止IL4过度分泌而介人的IgE的生成，从而压制机体内IgE的产生，减少AR发生概率或缓解AR症状 2 8 。INF-和IL-4分别是Th1 和 Th2 细胞分泌的标志因子,在正常机体中,INF-主要由 Thl 细胞产生,调节细胞免疫;IL-4主要由Th2细胞产生,调节体液免疫 2 。Th2型细胞的一个重要作用机制是生成IgE和形成以IgE为基础的嗜酸性粒细胞（eosinophil,EOS)与肥大细胞介导的免疫反应,如:变应性鼻炎,Th2 细胞因子在 AR 的免疫病因学中起着重要的作用 30 1。Th1/Th2 细胞因子分泌失调也是多种免疫炎症疾病的发病基础,如反复上呼吸道感染。前期孙玮研究表明研究表明 1三宝护童羹可有效的提高反复呼吸道感染患儿的免疫力,降低呼吸道感染的发生率；吕茂林研究表明 31 三宝护童羹可捕过调节肠道菌群及免疫功能防治反复呼吸道感染。同样刘慧霞研究表明 32 患儿免疫力的提升与变应性鼻炎治疗呈正相关。本文实验表明，与2024年第45卷第1期2024年第45卷第1期模型组比较,西药、中药组血清中 INF-含量显著升高,IL-4及 IgE含量显著降低,且中药组比西药组 IL-4含量降低变化显著,这说明三宝护童羹能够逆转变应性鼻炎幼鼠血清中 Th2 细胞因子相对 Th1 细胞因子的免疫反应优势，使二者趋于正常。表明三宝护童羹能够通过抑制 Th2细胞因子,上调 Th1 细胞因子表达,从而纠正Th1/Th2免疫失衡，有效的增加抗炎细胞因子分泌、抑制炎性介质,抑制了过度免疫反应，最终一定程度上阻断 AR发病途径、减轻AR发病症状、降低 AR发病概率。Foxp3是 Treg 细胞的特征性转录因子,是Treg 细胞发育和功能维持的关键性调节基因,对其生长发育和健康的生理功能有着决定性的作用 3。而Treg 细胞作为T细胞亚群的一种承担了维持机体免疫稳态和限制过度免疫反应的重任,Foxp3的过表达最终可促进机体免疫耐受 34。就AR来说Foxp3是Treg上游的特异性转录因子,可促进Treg分化和成熟，发挥炎症和免疫负向调控作用,维持免疫稳态 35。有研究证实Foxp3的数量减少和功能减弱都可以刺激AR的发病 36 。近期的动物实验证实,采用提取物干预AR模型小鼠后,Foxp3的表达增加,发现Treg分化也随之增加,结果提示小鼠AR相关症状明显缓解,并由此推断Foxp3表达增加促进 Treg分化,从而抑制 AR 过度的炎症反应 37 。Zhu X 等 3 有关哮喘的研究提示存在Treg和Foxp3mRNA表达在哮喘机体中比例降低的现象,因此该团队提出哮喘的发病概率和严重程度与Foxp3、T r e g 成负相关。有研究 38 发现Foxp3蛋白表达下调竞样出现在AR发病过程中,因此从发病机制角度来说,AR与支气管哮喘相似度极高。由此推断,AR炎症反应的加剧,可能与 Foxp3表达下调而导致Treg的分化减少呈正相关。本文经动物实验研究发现,与模型组比较,西药、中药组脾脏组织中 Foxp3 蛋白表达显著升高,且西药组与中药组无差别，这说明三宝护童羹和氯雷他定均可有效上调AR幼鼠脾脏中Foxp3蛋白表达。因此,综合文献报道 34-39 和我们的实验结果，我们合理推测AR幼鼠在经三宝护童羹治疗后上调Foxp3蛋白表达，使得Treg细胞表达增强,最终下调Th2 细胞因子从而抑制了AR的发生；变应性鼻炎幼鼠经三宝护童羹治疗后Foxp3蛋白表达显著上升,提示三宝护童羹对Treg细云南中医中药杂志胞具有直接或者间接的调节作用,其具体机制有待于进一步研究。综上所述，三宝护童羹可有效减轻变应性鼻炎幼鼠症状,其机制可能与调控Th1/Th2 细胞免疫失衡和上调Treg细胞表达有关。参考文献：1孙涟玮,冉志玲，杜渊,等三宝护婴羹治疗儿童反复呼吸道感染缓解期（肺脾气虚证）临床观察J.家庭医药，2019(3):15-16.2 WU WW,CHIA TS,LU J,et al.IL-2R-biased agonist en-hances antitumor immunity by invigorating tumor-infiltratingCD25+CD8+T cells J.Nature cancer,2023.3胡情,苏嘉琪,楼金成，等针刺对穴“迎香合谷”对变应性鼻炎大鼠 Thl、T h 2 细胞因子及转录因子 T-bet/GATA-3J.海南医学院学报,2 0 2 3（15vo29)：1135-1143.4罗向前,刘大波：儿童过敏性鼻炎的流行病学 J.中国实用儿科杂志,2 0 19,34(3）：19 7-19 9.5ZHANG X,ZHANG M,SUI H,et al.Prevalence and risk fac-tors of allergic rhinitis among Chinese adults:A nationwiderepresentative cross-sectional study J.The World AllergyOrganization journal,2023(3 vo 16):12-14.6郑晓骏,陈旭青,蒋中秋,等。中西医结合中西医结合治疗过敏性鼻炎的临床研究进展 J.医学综述,2 0 2 2,10（2 8）：1983 1987.7陈茜,杨一民。中医药治疗儿童变应性鼻炎临床研究综述 J.中医儿科杂志,2 0 2 3,19（4)：9 6-10 0.【8 姚百会，冉志玲，杜渊冉志玲教授食疗经验方三宝护婴羹方药分析之我见 J.世界最新医学信息文摘，2 0 2 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