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医学研究杂志2 0 2 4年2 月第53卷第2 期论著ncRNA介导的EphB4上调与低级别胶质瘤不良预后及肿瘤免疫浸润的相关性吴铮任志伟高润石孙张国君摘要目的探讨促红细胞生成素生成人肝细胞受体B4（e r y t h r o p o i e t i n-p r o d u c i n g h u ma n h e p a t o c e l l u l a r r e c e p t o r s B4，EphB4)在低级别胶质瘤(lower-grade glioma,LGG)组织中的表达、其上游靶点以及与患者预后及肿瘤免疫浸润的相关性,分析其作为治疗靶点的潜在作用。方法首先应用癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库胶质瘤数据分析EphB4在胶质瘤与正常脑组织中的表达差异，并用基因表达谱交互分析（Gene Expression Profiling Interactive Analysis，G EPIA）数据库分析EphB4对不同癌症生存期的影响。用R语言和starBase数据库分析EphB4可能上游调节非编码RNA（n o n-c o d i n g RNA，ncRNA）。用肿瘤免疫评估资源（TumorImmune EstimationResource,TIMER）数据库进行EphB4表达与肿瘤免疫细胞浸润、免疫细胞生物学标志物和免疫检查点相关性分析。结果UBA6-AS1/hsa-miR-346轴是最有潜力影响LGG中EphB4表达的上游ncRNA相关通路。同时,EphB4水平与LGG肿瘤免疫细胞浸润、免疫细胞生物学标志物、免疫检查点表达均呈显著正相关。结论ncRNA介导的EphB4上调与LCC的不良预后和肿瘤免疫浸润相关。关键词低级别胶质瘤促红细胞生成素生成人肝细胞受体B4非编码RNA免疫浸润不良预后中图分类号IR739.41Correlation of ncRNA-mediated Up-regulation of EphB4 with Poor Prognosis and Tumor Immunoinfiltration in Low-grade Glioma.WU Zheng,REN Zhiwei,GAO Runshi,et al.Department of Functional Neurosurgery,Xuanwu Hospital,Capital Medical University,Bei-jing100053,ChinaAbstract Objective To investigate the expression of erythropoietin-producing human hepatocellular receptors B4(EphB4)andits upstream targets as well as correlation with prognosis in low-grade glioma(LGG),for analyzing its potential role as a therapeutic tar-get.Methods Firstly analyzed the expression of EphB4 in glioma and normal brain tissue by The Cancer Genome Atlas(TCGA)data-base.Then,Gene Expression Profiling Interactive Analysis(GEPIA)database was used to analyze the effects of EphB4 on various cancersurvival.The possible upstream regulatory non-coding RNA(ncRNA)of EphB4 were analyzed by R and starBase database.The correla-tion of EphB4 with tumor immune cell infiltration,biomarkers of immune cells and immune checkpoint expression were analyzed using theTumor Immune Estimation Resource(TIMER)database.Results UBA6-AS1/hsa-miR-346 axis was the most potential upstreamnon-coding RNA(ncRNA)related pathway to influence expression of EphB4 in LGG.At the same time,the level of EphB4 was posi-tively correlated with the tumor immune cell infiltration,immune cell biomarkers and immune checkpoint in LGG.Conclusion NcRNA-mediated up-regulation of EphB4 is associated with poor prognosis and tumor immunoinfiltration in LGG.Key words Low-grade glioma;Erythropoietin-producing human hepatocellular receptors B4;Non-coding RNA;Immunoinfil-tration;Poor prognosis根据世界卫生组织定义，级和级少突细胞瘤和星形细胞瘤定义为低级别胶质瘤（lower-grade gli-oma,LGG)。尽管目前在临床上LGG 的诊断和治疗方面取得了一些成效，但部分患者仍不可避免地发展为高侵袭性胶质瘤，导致治疗效果降低和疾病预后作者单位：10 0 0 53北京，首都医科大学宣武医院功能神经外科（吴铮、任志伟、高润石）；10 0 0 45国家儿童医学中心、首都医科大学附属北京儿童医院功能神经外科（孙辑、张国君）通信作者：张国君，电子信箱：文献标识码AD0110.11969/j.issn.1673-548X.2024.02.028不理想2 。因此驱需深人研究LCG分子机制或寻找有潜力的预后标志物来寻找新的治疗方案。EphB4属于最大的酪氨酸激酶受体家族Eph,包含A亚型EphA（A 1A 10)和B亚型EphB（B1B6）3。Ep h B4 在许多生物过程中起重要作用,如胚胎发育,包括轴突引导、组织边界形成、骨骼发育、血管和淋巴发育4。研究发现,EphB4受体在人体多种恶性肿瘤细胞中均高表达,包括卵巢癌、胃癌、结肠癌细胞等5 7 。随着EphB4受体对肿瘤生成的影响日143J Med Res,February 2024,Vol.53 No.2论着益突显,其在肿瘤中表达、预后、机制等方面的研究就更值得深人探索。免疫治疗是近些年肿瘤治疗的新方法，是使用生物方法激活患者自身免疫系统加强抗肿瘤应答,从而抑制肿瘤生长8 1。免疫细胞在肿瘤部位的浸润是有效免疫治疗的基础。寻找评价免疫浸润的指标并研究其潜在机制将有助于免疫治疗的进展。目前EphB4对LGG的免疫浸润的影响尚不明确，对于其表达机制仍然缺失。本研究以此为切人点，通过生物信息学方法进行研究，以期为其成为治疗应用的分子靶点提供理论支持。材料与方法1.数据下载、处理和分析：33种癌症（ACC、BLCA、BRCA、CH O L、CESC、CO A D、D LBC、ESCA、GBM、H NSC、K ICH、K IRC、K IRP、LA M L、LIH C、LG G、LUAD、LU SC、O V、M ESO、PA A D、PCPG、PRA D,READ，SK CM、ST A D、SA RC、T G CT、T H CA、T H YM、UCEC、U C S 和UVM)的转录组数据从癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库中下载。2.基因表达谱交互分析（Gene Expression Profi-ling Interactive Analysis，G EPI A）数据库预测：GEPIA数据库是一个癌症组织和正常组织基因表达谱的网络工具9。GEPIA数据库可以用来分析不同癌症中EphB4和lncRNA的表达情况以及EphB4对不同癌症生存期的影响，包括总生存期（overall survival，OS）和无病生存期（disease free survival，D FS）。本研究还利用 GEPIA数据库评估预测的 ncRNA对LGG的预后影响,以及EphB4与LGG的免疫检查点之间表达相关性。3.潜力miRNA预测：通过PITA、RNA 2 2、mi Rma p、microT、m i Ra n d a、Pi c T a r 和 TargetScan 等 7 个靶基因预测程序预测EphB4的上游结合miRNA，用于后续分析。这些预测的miRNA被认为是EphB4的候选miRNA。4.starBase数据库分析：starBase是探究miRNA相关研究的数据库。本研究利用 starBase数据库分析LGG 中miRNA-EphB4 和lncRNA-hsa-miR-346表达的相关性。此外，starBase用于分析hsa一miR-346在LGG和正常组织中的表达情况,以及预测与 hsa-miR-346 相关的 lncRNA。5.miRNA在LGG和非癌人尿液中的表达分析：在基因表达综合（Gene Expression Omnibus,GEO）数据库中检索LGG和非癌人的尿液miRNA相关数据，并下载GSE145510，利用Rstudio软件，选用limma包144等对潜力的miRNA进行差异分析验证。6.肿瘤免疫评估资源（TumorImmuneEstimationResource,TIMER）数据库分析：TIMER数据库是用于分析肿瘤中免疫浸润细胞情况的网络工具。TIMER数据库用于分析LGG中EphB4与免疫细胞浸润水平相关性和免疫检查点表达相关性。7.统计学方法：本研究的统计学分析是由在线数据库自动生成,以 P0.05 或者 Log-rank P0.1和P0.05视为筛选条件。1.EphB4表达的泛癌分析：为了探究EphB4在致癌过程中可能的作用,本研究首先分析了EphB4在33种癌症中的表达情况。结果显示，与正常组织比较,EphB4在16 种癌症中明显上调（BLCA、BRCA、CHOL和THYM等），在11种癌症中明显下调（CESC、K ICH 和KIRC等），详见图1A。接着本研究采用 GEPIA数据库进一步验证EphB4 在癌症中的表达情况。结果显示，与正常组织比较，EphB4在CHOL、CO A D、G BM、LG G、PA A D、REA D、ST A D、TGCT、T H YM 中明显上调；在KICH、LA M L、O V、PCPC、T H CA、U CFC、U CS中明显下调，详见图1B。以上结果说明EphB4有可能是这16 种癌症的关键调节因子。2.EphB4在人癌中的预后评估：本研究通过OS和DFS指标评估EphB4的表达对上述33种癌症患者生存期的影响。在OS 预测结果中发现,EphB4高表达会导致BLCA、BRCA、LG G 和MESO 患者有不良的预后,详见图2 A。在DFS预测结果中发现,EphB4高表达仅会导致LGG、M ESO 和PAAD患者有不良预后，详见图2 B。结合上一结果，本研究在16 种EphB4 表达上调的癌症中发现仅有 LGG患者的 OS和DFS结果均不良。以上结果说明EphB4可能是LGG患者的不良预后的标志物。3.预测EphB4的上游miRNAs:众所周知,ncRNA负责上游调节基因表达情况的因子。为了确定EphB4是否受某些ncRNA调节,本研究首先预测了可能与EphB4结合的上游miRNA，最终发现了42 个miRNA在LGG患者中与EphB4 表达有相关性,详见图3A。基于miRNA调控靶基因表达的作用机制,miRNA 与EphB4之间应该存在负相关。因此,剔除了13个正结果医学研究杂志2024年2 月第53卷第2 期A10F8(I+NdL)o6论著*#*#卓正常肿瘤20B6543num(T)=36;um(N)=965432mum(D-182:mm(N)=-3A.EphB4基因在多种癌症中的表达情况及正常数据；B.CEPIA数据库中。CHOL/COAD/GBM/KICH/LAML/LCG/OV/PAAD/PCPG/READ/STAD/TGCT/THCA/THYM/UCEC/UCS相应TCGA和GTEx正常组织比较。*P0.05,#P0.01,AP0.001。n u m(T).肿瘤组织数;num(N).正常组织数相关的miRNA。之后本研究利用 GEO数据库中的CSE145510进行分析，发现在剩余的2 9 个miRNA中,hsa-miR-107、h s a -m i R-133a -3p、h s a -miR-133b、h s a-m iR-146-5p、h s a -m iR-32 6、hsa-miR-346、h s a-m iR-6 42 a -5p 和 hsa-miR-1249-3p在非癌人尿样中表达高于LGG尿样（图3B）。接着本研究预测8 个潜力的miRNA表达对LCG患者OS影响。如图3JQ 所列,只有hsa-miR-346的高表达与患者预后有显著的正向调节关系。以上结果说明hsam iR-346 可能是LCG 中EphB4最有潜力的调控miRNA。4.预测 hsa-miR346 的上游lncRNA：本研究继续使用starBase数据库预测hsam iR346 的上游长链非编码RNA（l o n g n o n c o d i n g RNA，In-cRNA）,并在GEPIA数据库中验证这些lncRNA在LGG中的表达情况。本研究预测到的6 8 个lncRNA6665432200CHOLCOADnum(-275;um(N)-349760PCPGREADmum(1)92;mum(N)-31885554GBMmum(1)-163;num(N)-2078620STADmm(D=408:mum()-21图1EphB4基因在不同癌症中的表达水平6320KICHLAMLmm(D-66;mum(N)-53mm(D-173;mum(N)-70968574635TGCTmum(D=137;mum(N=165200LGGOVrum(n-518;mum(N)-207mum(T)-426 um(N)-88765e4320THCAmm(T=512:m(N-337筛选出在LGG中表达显著上调的有5个：GAS5、PITPNA AS1、G A BPB1 A S1、U BA 6 A S1 和AP002748.3（图4中AE）。随后，评估了5种ln-cRNA在LGG中的预后价值。由于lncRNA与miR-NA之间应该存在负相关，而只有UBA6A S1高表达会影响LCG患者的OS和DFS(图4中FO）。除此之外,本研究还使用starBase数据库检测了LGG中5种 lncRNA与 hsam i R-346 之间的表达相关性。综合表达分析、生存分析和相关分析,UBA6A S1可能是 LGG 中 hsa-miR-346-EphB4轴的上游 ln-cRNA。5.LGG中EphB4与免疫细胞浸润的相关性：EphB4是Eph的成员之一,Eph受体在抗肿瘤免疫中发挥重要作用,Eph受体是肿瘤相关抗原的来源,可诱导机体发生选择性抗肿瘤免疫。LGG中免疫细胞的浸润水平均受到EphB4不同类型体细胞拷贝数变.145PAADnm(m-179 mm(N)-171765432THYMmm(D=118;mum(N=33965432UCECnum(D=174;um(N)-91UCSmm(D=57;mm(N-78.论着AENSC0000196411L.9(EPHB4)J Med Res,February 2024,Vol.53 No.2IgHR0.20-0.2总生存期1.0LowEPHB4GroupHighEPHB4GrLogrankP-0.0400.8P(HR)-0.0420.6n(high)=201(low=200.40.20BLCA50生存时间（月）BENSG0000196411.9(EPHB4)总生存期1.0LOWEHigh20.80.60.40.20BRCA100150总生存期Grou1.00.80.650.40.20KIRC5010015020025050生存时间（月）生存时间（月）总生存期LowEPHB4Group1.0HighEPiB4GrotLogta1x10PHRn(low100150总生存期HighELOWEPLogran0.8HRPHRfhiga(low250.6存0.40.20LCG50100150200生存时间（月）4Grour1.00.80.60.40.20MESO20406080生存时间（月）LowEPHB4GroupHighEPiLogrankHR(high3.00P(HR)-0.0083nChighn(low-4iIgHR0.40.20-0.20.4无疾病生存期1.0EPHB4GroupHighEPHB4GrouankP-0.0420.8-0.040.60.40.2KIRC020406080100120140生存时间（月）A.GEPIA数据库中EphB4表达分析不同肿瘤的OS;B.CEPIA数据库中EphB4表达分析不同肿瘤的DFS异的影响。此外，本研究评估了EphB4表达水平与免疫细胞浸润水平的相关性。在 LGG 中 EphB4 表达与所有分析的免疫细胞,包括B 细胞、CD4+T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞浸润呈显著正相关(图5 中A、B)。为了进一步探究EphB4 在肿瘤免疫中的作用，本研究利用 GEPIA数据库检测了EphB4与LGG免疫细胞生物学标志物的表达相关性。EphB4与B细胞生物学标志物（CD19和CD79A）,CD 8+T 细胞生物学标志物（CD8B）,CD 4+T 细胞的生物学标志物（CD 4），单核细胞的生物学标志物（CD86和CD115），M 1型巨噬细胞的生物学标志物（NOS2和IRF5），M 2 型巨噬细胞的生物学标志物（CD163、VSIG 4和MS4A4A），中性粒细胞的生物学标志物（CEACAM8、ITGAM和CCR7）,以及树突状细胞的生物学标志物(HLA-DPB1、H LA -D Q B1、H LA-D RA、H LA -DPA1、CD 1C、NRP1和ITGAX）呈显著正相关（表1）。这些发现支持了EphB4与免疫细胞浸润正相关的观点。:146 无疾病生存期1.0High EPHB4CrouRwEPHB4GroupLogrank.P-0.000g0.8HRP(HR)-0.0009n(high)0.6n(low)0.40.2LGG050生存时间（月）图 2 GEPIA中EphB4表达与肿瘤生存预后的相关性了EphB4致癌作用。本研究通过生物信息学方法预测EphB4在LGG中的表达情况,以及其潜在的上游调控ncRNA,以期改进免疫治疗方法,更加精准肿瘤治疗靶标。近年来研究发现,EphB4 对脑肿瘤的发生、发展起重要作用，例如体外实验研究发现EphB4促进成神经细胞瘤的增殖、迁移和浸润10 。但 EphB4表达对胶质瘤的影响尚存一些争议,研究认为,过表达无疾病生存期1.0EPHB4GroupHighEPHB4GrotogrankP=0.0.8IR(hiP(HR)-0.02high0.60.40.2LUAD0100150无疾病生存期1.0OWvEPHB4GroupHighEPHB4GroLogrankP-0.010.8P(HR-0.016nChigh-0.6nlow40.40.2MESO5010015020025020406080生存时间（月）生存时间（月）6.LGG中EphB4与免疫检查点的关系：PD1、PD-L1和CTLA-4是肿瘤免疫逃逸的重要免疫检查点。考虑到EphB4在LGG中的潜在致癌作用,本研究评估了 EphB4 与 PD1、PD-L1或 CTLA-4 的关系。TIMER数据库分析结果显示,LGG中EphB4的表达与 PD1、PD-L1 和 CTLA-4呈显著正相关,这与纯度有关（图5中CE）。与TIMER数据分析类似,GEPIA数据库中也发现，在LGG中EphB4与PD1、PD-L1或CTLA4存在显著的正相关（图5中FH)。这些结果表明,肿瘤免疫逃逸可能参与讨论无疾病生存期1.0EPHB4GrouFHighEPHF0.8P(HR0.003n(high)=0.6n(low0.40.2PAAD020406080生存时间（月）论医学研究杂志2024年2 月第53 卷第2 期A0.200.2-0.4B320NCLGGF0.01806420ENCLGGK1.00hea-miR-107的LCC总生存期0.500.250050100150200生存时间（月）N1.000.750.5040.250050100 150200生存时间（月）A.分析 LGG中预测 miRNA与 EphB4 的表达相关性;BI.hsa-miR-107、h s a -m i R-133a-3p、h s a -m i R-133b、h s a -m i R-146-5p、h s a-m i R-32 6、h s a-m i R-346、h s a-m i R-6 42 a-5p、h s a-m i R-12 49-3p 在LGC和GSE145510对照尿液中的表达;J Q.hsa-miR-107、h s a -m iR-133a -3p、h s a -m iR-133b h s a -m iR-146 -5p、h s a -m iR-32 6、h s a -m iR-346、h s a -m iR-EphB4改变胶质瘤的血管形态发生、周细胞覆盖和细胞凋亡,抵抗其抗血管治疗1;通过对患者脑组织中EphB4表达情况分析，认为EphB4影响胶质瘤患者的预后12.13。然而，另有研究认为，EphB4的配体EFNB2对患者及小鼠胶质瘤的生长有影响,EphB4对胶质瘤患者预后无影响14。本研究通过TCGA数0.0003Log-RankP-6.7x105HazardRatio=2.01HighNum=261LowNum=262hsa-miR-326的LGG总生存期Log-Rank P=0.11LowNum=262Hazard Ratio-0.76HighNum=261642a-5p、h s a-m i R-12 49-3p 在LGG中OS。NC.正常对照组,LGG.低级别胶质组C6F543NCLGGG0.008162oENCLGG1.00ha-miR-133a-3p的LGC总生存期0.750.500.250050100150200生存时间（月）01.000.750.500050100150200生存时间（月）图3验证hsa-miR-346为LGG中EphB4的潜在上游miRNA0.0031Log-Rank P=0.46Hazard Raltio=0.88High.Num=261LowNum=262hsi-miR-346的LGG总生存期Log-Rank P-0.011LowNum=262Hazard Ratio-0.64HighNum=261D6543NCLGGH0.0290642oNCLGGL1.000.750.500.250050100150200生存时间（月）P1.000.750.500.2500据库进行EphB4的泛癌分析及GEPIA数据库观察EphB4表达情况。联合生存分析验证EphB4高表达的LGG患者预后较差。ncRNA包括miRNA、l n c RNA 和circularRNA,可以通过相互作用的ceRNA机制参与调节基因表达。在ceRNA网络中，IncRNA作为内源性分子竞争性地.147:0.0039hsa-miR-133b的LCG总生存期Log-RankP-0.54Hazard Ratio=0.90HighNum=261LowNum=262hsa-miR-642a-5p的LCG总生存期Log-RankP=0.15LowNum=262Hazard Ratio=1.28HighNum=26150100150200生存时间（月）E54.4x10-54320NCLGGI111109876NCLGGM1.000.750.500.250050100150200生存时间（月）Q1.000.750.500.250050100 150200生存时间（月）0.0200ha-miR-146a-5p的LCC总生存期hsa-miR-1249-3p的LGG总生存期组Log-RankP=0.36高Hazard Ratio=l.17High.Num=261LowNum=262Log-RankP-0.086LowNum=262HighNum=261Hazard Ratio-0.74+（高，1)低+（低，1)组一高低（高，1)+（低，）J Med Res,February 2024,Vol.53 No.2论AGAS510864B65432PITPNA-AS1C5432GABPBI-AS1D5432UBA6-AS1E53AP002748.32110(mum(T)=518;num(N)=207)F总生存期1.0LogrankP=0.024HR(bigh)=0.670.8PHR)=0.024n(highl=2570.6n(low/m2570.40.20050100150200生存时间（月）K无病生存期1.0GAS5高表达组GAS5低表达组LogrankP-0.370.8HR(high)=0.87P(HR-0.370.6n(high)-257n(low)=2570.40.200Phaa-miR-346vs.GAS5.525样本(LCC)Data Saurce:starBase v3.0 project.03652+4.6048-0.058.pyalue=1.82c010LGG(mum(T)=518;num(N=207)G总生存期1.0LogrankP=0.73HR(high)=0.940.8PHR)-0.73n(high)=257n(low)=2570.60.4GAS5高表达组0.2PITPNA-ASI高表达组GASS低表达组0050100150200生存时间（月）L无病生存期1.0PITPNA-ASI高表达组PITPNA-ASI低表达组LogrankP=0.880.8HR(high-0.98PHR-0.880.6n(highl-257n(low)-2570.40.2050100生存时间（月）0LGG(mum(T)=518;num(N)=207)H总生存期1.0LogrankP-0.59HR(high)=0.910.8P(HR)-0.59n(high)=2570.6nlow)-2570.40.2GABPB1-AS1高表达组PITPNA-ASI低表达组GABPBI-ASI低表达组050100150200生存时间（月）M无病生存期1.0CABPB1-AS1高表达组GABPBI-ASI低表达组LogrankP=0.960.8HR(high=1P(HR)=0.950.6n(high)=257n(low)-2570.40.201500Qhsa-miR-346vs.PITPNA-AS1,525样本(LCC)Data SaurestarBasev3.0 project-0.0896m+3.04200.172.p=xalus=2.78e050LGG(mum(T)=518;num(N)=207)1总生存期1.0Logrank.P-0.00046HR(highl=1.90.8P(HR)-0.00056n(high-257n(lowl-2570.60.40.200N1.00.80.40.2050100生存时间（月）0LGG(mum(T)=518;num(N)=207)总生存期1.0LogrankP-0.69HR(high)-0.930.8P(HR)-0.69TBAn(high-255n(low)-2560.60.4UBA6-ASI高表达组0.2UBA6-AS1低表达组050100150200生存时间（月）0无病生存期UBA6-AS1高表达组UBA6-AS1低表达组LogrankP-0.011HR(high=1.5PHR)-0.011n(high)=257n(low-2571500RhsamiR-346vs.GABPB1-AS1,525样本(LCC)Data SaurcestarBase 3.0 project0.07422+1.701F0.093.pxalus3.33e02765LGGAP002748.3高表达组APOp2748.3低表达组050100150200生存时间（月）无病生存期1.0AP002748.3高表达组AP002748.3低表达组0.8LogrankP=0.73HR(high)-1.10.6P(HR)=0.72AInsn(high-255n(low/=2560.40.2050100生存时间（月）1500Shsa-miR-346vs.UBA6AS1,525样本(LCC)Data SaurcestarBase v3.0 project006282+1.021g0.177,pxalus=4.34e-05550生存时间（月）1001500Thsa-miR-346vs.AP002748.3,525样本(LCC)Data SaurestarBase v3.0 projeet0.0110+0.7103)0.024.pyalu8=5.79%0150生存时间（月）10015047.55-2.502.5hsa-miR-346表达水平：log2(RPM+0.01)图4LGG中与hsa-miR-346相关的上游IncRNA的表达、生存期及相关性分析A.GAS5在LGG和正常组织中的表达情况;B.PITPNA-AS1在LGG和正常组织中的表达情况;C.GABPB1-AS1在LGG和正常组织中的表达情况;D.UBA6-AS1在LGG和正常组织中的表达情况；E.AP002748.3在LGG和正常组织中的表达情况;F.GAS5在LGG 中的 OS分析;G.PITPNA-AS1在LGG 中的 OS分析;H.GABPB1-AS1在LGG中的 OS 分析;I.UBA6-AS1在LGG中的 OS分析;J.AP002748.3在LGG中的OS分析；K.GAS5在LGG中的DFS分析；L.PITPNA-AS1在LGG中的DFS分析；M.GABPB1-AS1在LGG中的DFS分析;N.UBA6-AS1在LGG中的DFS分析;O.AP002748.3在LGG中的DFS分析;P.GAS5与hsa=miR-346表达的相关性;Q.PITPNA-AS1与hsa-miR-346表达的相关性;R.GABPB1-AS1与hsa-miR-346表达的相关性;S.UBA6-AS1与hsa-miR-346表达的相关性T.AP002748.3与hsa-miR-346表达的相关性。num（T）.肿瘤组织数；num（N）.正常组织数与miRNA结合,间接地调节mRNA的表达水平。大量实验表明，这种miRNA调控的lncRNA 和mRNA网络参与了瘤症的发生、发展和侵袭15.16 。本研究首先预测EphB4 的上游调节miRNA,而后选取了LGG患者尿样的miRNA检测样本，最终发现8 个潜力的miRNA,这些潜力成员均有调节肿瘤的作用。其中hsam i R-10 7 是通过介导CDK14发挥肿瘤抑制剂的作用17 。hsa-miR-133通过靶向FOxC1 抑制胶质瘤细胞U87的生长和侵袭18 。包含hsa-:148 4SV357.5TSV-9V7.5-5-2.502.557.5hsa-miR-346表达水平：og2(RPM+0.0m)55-2.502.557.5hsa-miR-346表达水平：log2(RPM+0.0)miR-146的外泌体降低胶质瘤移植物的生长19OlncRNA可以靶向hsa m i R32 6/s i r t l或hsa-miR-326/SOX9轴抑制肿瘤细胞的生长2 0.2 1hsa-miR-642通过调控SEMA4C和p38MAPK信号通路在肝细胞癌中发挥抑癌作用2 2 。与数据库预测相反,研究发现上调hsa-miR-1249可促进胶质瘤细胞增殖,下调 hsa-miR-1249 可抑制胶质瘤细胞增殖2 3。在综合了表达分析和生存期分析后，本研究认为,hsam iR-346 是最具潜力的上游miRNA7.5-5-2.502.557.5hsa-miR-346表达水平：log2(RPM+0.0)7.55-2.502.557.5hsa-miR-346表达水平：log2(RPM+0.0)医学研究杂志2024年2 月第53卷第2 期A1.51.00.50B54论着LGG*+*B细胞CD8+T细胞CD4+T细胞巨噬细胞中性粒细胞树突状细胞纯度B细胞拷贝数电臂级删除申二倍体/正常丰臂增益申高扩增CD8+T细胞CD4T细胞巨细胞中性粒细胞树突状细胞20.250.500.751.000Cpurity1.000.750.500.25320.10.20.30.10.20.30.40.50.60.10.20.30.40.50EPHB4D1.000.750.50kund0.254320.1 0.20.30.4浸润水平purity0.1EPHB4E1.000.750.500.25320.2purity0.3 0.30.60.9EPHB40F5300.250.500.751.002表达水平(log,TPM)P-2.2x10-9R-0.2603450.250.500.751.00表达水平(log,TPM)GP-1.110-105R-0.28(Nd taHa)so23450.250.500.751.00表达水平(log,TPM)HP=3.810-55R=0.18(Ndltada)so)23422200.51.01.52.02.5log,(PDCD1 TPM)图5LGG中免疫细胞浸润和免疫检查点与EphB4水平的关系A.不同EphB4拷贝数下LGG中各种免疫细胞的浸润水平;B.EphB4表达水平与LGG中B细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞或树突状细胞浸润水平的相关性;CE.TIMER数据库检测EphB4表达与LGG中PD-1、PD-L1和CTLA-4表达的相关性;FH.GEPIA数据库检测LGG中EphB4与PD-1、PD-LI、C T LA-4的表达相关性抑制肿瘤靶向 EphB4。既往研究发现,hsa-miR-346通过靶向NFIB抑制胶质瘤细胞的生长,这些证据更支持了本研究的观点2 4。基于 ceRNA 假说,hsa=miR-346/EphB4轴的潜在lncRNA 是LGG的致癌关键。接下来预测hsa-miR-346/EphB4轴上游lncRNA,发现6 8 个可能的lncRNA。通过表达分析、生存分析和相关分析，本研01log,(CD274 TPM)究发现了1个最有可能的lncRNA-UBA6A S1。据报道,UBA6A S1通过 GCN2A T F4轴增强PARP1活性调节应激反应，促进乳腺癌细胞存活2 5。但是在脑部胶质瘤细胞中的作用尚无研究。推测UBA6-AS1/hsam iR-346/Ep h B4 轴可能为潜在的调控LGG的通路。大量研究证实,肿瘤免疫细胞浸润可影响化疗、14923400.51.01.52.02.5lo