MAGLUMI X8全自动化学发光免疫分析仪检测肿瘤标志物的性能验证.pdf

临床研究MAG L UM IX 全自动化学发光免疫分析仪检测肿瘤标志物的性能验证李萌程世亮郑文吴冰庄学伟(山东省立第三医院检验科,山东济南 )摘要【目的】探讨并验证MA G L UM IX 全自动化学发光免疫分析仪检测肿瘤标志物的性能.【方法】对甲胎蛋白(A F P)、癌胚抗原(C E A)、糖类抗原 (C A )、糖类抗原 (C A )、前列腺特异性抗原(P S A)和游离前列腺特异性抗原(f P S A)进行精密度、正确度、线性范围、参考范围和相关性分析;另外用西格玛()质量管理规则评价上述项目的分析性能水平,设计最优室内质控方案.【结果】A F P、C E A、C A 、C A 、P S A和f P S A中重复精密度变异系数(C V)在 范围内,中间精密度C V在 范围内;相对偏倚在 范围内,均符合要求;线性范围斜率b在 范围内,相关系数r在 范围内,参考范围验证均在厂家标注的参考范围内,符合要求;C A 和P S A项目值,A F P、C E A、C A 、f P S A项目值.【结论】MAG L UM IX 检测系统的精密度、正确度、线性范围、参考区间和相关分析性能指标均通过相关标准,完全符合医学实验室的性能要求,上述项目分析性能水平均达到优秀,可对临床诊断和预后提供检验依据.关键词肿瘤标记,生物学;免疫测定;化学发光测定法 中图分类号R 文献标识码Ad o i:/j i s s n 文章编号 ()临床上,肿瘤标志物主要用于肿瘤的早期筛查、辅助诊断预后及复发转移的评估,化学发光法是目前临床上最常用的定量检测肿瘤标志物的方法,由于检测项目的特殊性,医学实验室要为临床提供准确可靠的检验结果.医学实验室在引进新的检测系统后,必须按照I S O 认可要求,根据C NA S G L ,即 临 床 化 学 定 量 检 验 程 序 性 能 验 证 指南和C NA S C L ,即 医学实验室质量和能力认可准则在临床化学检验领域的应用说明等相关要求进行性能验证,包括精密度、正确度、线性范围、参考区间和相关性分析,同时通过西格玛()质量管理规则评价项目的分析性能水平,从而指导实验室室内质控规则的选择.本实验室针对新产业生物MAG L UM IX 仪器及其配套试剂甲胎蛋白(A F P)、癌 胚 抗 原(C E A)、糖 类 抗 原 (C A )、糖类抗原 (C A )、前列腺特异性抗原(P S A)和游离前列腺特异性抗原(f P S A)进行性能验证,用于检验该检测系统性能是否符合临床要求,以优化质量控制规则,指导选择最佳室内质控方案,保证检验项目质量,结果报道如下.材料与方法实验样本选取 年 至 月山东省立第三医院健康体检者的新鲜血清样本,使用厂家提供的材料用于参考区间验证.健康体检者早晨空腹抽血后(抽血管使用惰性分离胶管),以 r/m i n离心 m i n,然后上机按照标准操作流程进行检测.按照文献的要求进行性能验证,并要求血清外观清亮,无溶血和脂血等情况.仪器与试剂使用MAG L UM IX 全自动化学发光分析仪,采用其配套试剂、校准品、质控品和耗 材 等 产 品 进 行 性 能 验 证,其 中A F P、C E A、C A 、C A 、P S A和f P S A试剂批号和有效期见表.试剂的质控品批号和试剂批号一致,耗材包括T i p头、激发底物、清洗液等,均在效期内.验证方法精密度验证按照C NA S G L 的要求进行重复精密度和中间精密度验证.重复精密度验医学临床研究 年月第 卷第期JC l i nR e s,J a n ,V o l ,N o 通讯作者,E m a i l:z h u a n g x u e w e i s d u e d u c n证要求使用配套的个浓度水平质控品,按规定的操作方法,在较短得时间内及稳定的条件下各做 次重复测定.计算其均值和变异系数(C V).中间精密度要求使用配套的个浓度水平质控品,每天随标本测定,每个项目每个样本测定两批,两批间隔时间不短于h,每批重复次,每天上午 点进行第一批精密度测试,每天下午点完成第二批精密度测试,共测定个工作日.验证结束时共有对,即 次测试结果,按数据模板进行记录.根据数据记录结果并计算xs和C V.重复精密度要/以能力验证/室间质评评价界限作为允许总误差(T E a,)即为通过;中间精密度要/T E a()即为通过.表相关试剂的批号和有效期试剂名称产品批号有效期A F P C E A C A C A P S A F P S A 正确度验证按照C NA S G L 正确度验证要求,实验室可采用偏倚评估、回收试验、与参考方法比对等方式进行正确度的验证.A F P、C E A、C A 、C A 、P S A和f P S A均涵盖在国家卫建委临床检验中心/山东省临床检验中心的室间质量评价的项目,比较回报靶值和实验室检测结果,计算绝对偏差和相对偏倚.每个项目均选取个不同浓度水平的样品进行正确度验证,以室间质评成绩反馈中给定的靶值作为参考靶值,每个浓度水平的标准物质样本至少每天重复测定次,连续测定d,记录检测结果,计算全部检测结果的均值,并按公式相对偏倚(测量值参考靶值)/参考靶值 ,计算相对偏倚.相对偏倚应/T E a(),以上的数据符合以上要求即为通过 .线性范围验证挑选近期收集检测值最高的临床血清标本,稀释至接近线性范围上限的浓度作为某项目高值浓度(H),接近线性范围下限的浓度作为某项目低值浓度(L)(厂家标注的线性范围).以 L为一个体积单位,将高值标本H与低值标本L以、的体积比例混合,加上高、低值标本共个标本,浓度范围遍布整个线性范围.并且每个浓度随机、重复测定次,共得到 个数据,记录并统计结果,计算线性回归方程yb xa及相关系数(r).对不同浓度样本的理论值和测定浓度的平均值进行线性回归计算,r 且斜率b在 范围内,则认为线性范围通过验证.生物参考范围验证按照WS/T 参考区间验证要求,选择小样本验证,实验室从本地健康体检人群中筛选少量参考个体(n),并满足排除和分组标准,测定值提出离群值之后若不满 例需补足.建议选择男性 名、女性 名(部分项目除外),年龄 岁,均匀分布.规定小于或等于份样本结果超出参考范围,即为验证通过.或R测定结果在参考范围内的例数/总测定例数 即为合格.两系统相关性验证选取新鲜样本 例,与不同实验室同一品牌仪器进行相关性验证,选取样本结果尽量覆盖整个线性范围,计算两系统结果的相关系数r.要求r 为验证通过.分析性能水平通过对本科室 年至 月的A F P、C E A、C A 、C A 、P S A和f P S A检测水平室内质控累积在控数据得到的C V,计算其平均C V.然后通过平均C V、正确度验证计算得到的相对偏倚和卫健委临床检验中心室间质量评价总误差T E a计算各项目的西格玛值(值).计算公式(T E a相对偏倚)/C V.表示世界一流,表示优秀,表示良好,表示临界,表示欠佳,表示不可接受.统计学方法和处理采用S P S S 统计学软件进行数据处理.计量资料采用(xs)表示,相关性检验采用线性分析和回归分析.P 为差异有统计学意义.结果精密度验证结果对肿瘤标志物A F P、C E A、C A 、C A 、P S A和f P S A共个指标,验证其重复精 密 度 和 中 间 精 密 度,其 中 重 复 精 密 度 在 范围内,为验证合格;中间精密度在 范围内,为验证合格,见表.正确度验证以山东省临床检验中心室间质量评价控制品作为正确度验证样本,以相对偏倚/T E a作为合格标准,验证正确度.经验证,相对偏倚在 范围内,均为超过/T E a,为验证合格,见表.医学临床研究 年月第 卷第期JC l i nR e s,J a n ,V o l ,N o 表精密度验证结果评价项目质控水平重复精密度xsC V()中间精密度xsC V()/T E a()/T E a()验证结果A F P水平 可接受水平 可接受C E A水平 可接受水平 可接受C A 水平 可接受水平 可接受C A 水平 可接受水平 可接受P S A水平 可接受水平 可接受F P S A水平 可接受水平 可接受表 使用山东省室间质量评价控制品进行正确度验证结果评价项目参考物质水平参考物质定值允许范围实测均值相对偏倚()/T E a()评价A F P水平 可接受水平 可接受水平 可接受水平 可接受水平 可接受C E A水平 可接受水平 可接受水平 可接受水平 可接受水平 可接受C A 水平 可接受水平 可接受水平 可接受水平 可接受水平 可接受C A 水平 可接受水平 可接受水平 可接受水平 可接受水平 可接受P S A水平 可接受水平 可接受水平 可接受水平 可接受水平 可接受F P S A水平 可接受水平 可接受水平 可接受水平 可接受水平 可接受线性范围验证使用接近检测上限的临床高值样本与接近检测下限的低值样本进行相应比例稀释验证线性范围,经验证,该项目均为验证合格,见表.参考范围验证按照要求选取 例合格样本进行参考范围验证.经验证,例样本全部落到厂家声明的参考范围内,均为验证合格,见表.表线性范围验证结果评价项目回归方程r系数b判断标准rb评价A F Py x 可接受C E Ay x 可接受C A y x 可接受C A y x 可接受P S Ay x 可接受f P S Ay x 可接受表参考范围验证结果评价项目参考区间标本个数不符合标本数标本符合率()评价A F P n g/mL 可接受C E A n g/mL 可接受C A I U/m L 可接受C A I U/m L 可接受P S An g/mL 可接受f P S An g/m 可接受相关性验证 例新鲜血样分离血清后,采用实验室间同型号仪器进行结果相关性比较,对数据做相关性回归分析,得出回归方程,计算r.经验证,两实验室间各评价项目r均,为验证合格,见表.表实验室间相关性验证结果评价项目回归方程相关系数r判断标准评价A F Py x 可接受C E Ay x 可接受C A y x 可接受C A y x 可接受P S Ay x 可接受f P S Ay x 可接受性能水平分析经验证,各评价项目的分析性能水平结果见表.表分析性能水平结果项目名称T E a()C V()相对偏倚()水平性能水平室内质控规则建议A F P 优秀n,s/s/R sC E A 优秀n,s/s/R sC A 优秀n,s/s/R sC A 世界一流n,sP S A 世界一流n,sf P S A 优秀n,s/s/R s医学临床研究 年月第 卷第期JC l i nR e s,J a n ,V o l ,N o 通过本实验室室内质控累积的平均C V、正确度验证计算得到的相对偏倚和卫健委临床检验中心室间质量评价总误差T E a计算各项目的值,验证该检测系统的分析性能水平.讨论目前,根据 医疗机构临床实验管理方法 和I S O ,即 医学实验室质量和能力认可准则 的要求,医学实验室在引入新的检测系统时为了保证检验质量,需严格按照N C C L S的相关要求,必须对新的检测系统进行全面性能评价,只有通过严格的性能验证评价后才可进行实验.质量管理是W e s t g a r d目前提出的一种新的室内质控方法 .实验室可根据各检测项目不同的值来选择不同的质量控制规则,从而优化设计质控方案,提高检测质量.临床化学定量检验程序的分析性能参数一般包括测量正确度、测量精密度(含测量重复性和测量中间精密度)、参考范围、线性范围区间和检出限等.实验室应根据不同检验项目的预期用途,选择对检验结果质量有重要影响的参数进行验证.本实验室验证了新产业生物MAG L UM IX 仪器和配套试剂的性能指标,包括精密度、正确度、线性范围区间、参考范围和相关性分析,另外根据 质量管理选择最优室内质控方案.精密度主要用于反映检测系统的随机误差,包括重 复 精 密 度 和 中 间 精 密 度 等,常 用C V来 表示.本研究结果显示,本实验室评价项目重复性和中间精密度的C V分别/T E a()和/T E a(),评价可接受.正确度是指多次检测同一样本的均值与“真值”的一致程度,主要用来反映检测系统的系统误差,一般用偏倚或相对偏倚来表示.本实验室选定能力验证样本给定的靶值作为“真值”,计算与“真值”的相对偏倚.结果显示,本实验室评价项目的相对偏倚,评价可接受.线性范围指在给定的测量范围内,使测定结果与样本中分析物的量直接成比例的范围,评价标准为r 且b值在 范围,认为评价可接受.结果显示,本实验室评价项目均在上述范围内,评价可接受.根据评价项目的说明书给定的参考范围,选取 例健康者样本进行验证,用标本符合率来表示.结果显示,本实验室评价项目标本符合率均为 ,高于 的评价标准,评价可接受.选取 份新鲜血样,其结果分布在整个线性区间内,在不同实验室相同型号仪器进行相关性验证,结果显示本实验室所有评价项目的相关系数r,评价可接受.使用 质量管理,通过平均C V、正确度验证计算得到的相对偏倚和卫健委临床检验中心室间质量评价总误差T E a计算本实验室评价项目的值,结果显示,C A 和P S A项目值,分析性能为世界一流,选择每批个浓度水平的质控品(n,R)以单规则 s进行室内质量控制;A F P、C E A、C A 、f P S A项目值,显示分析性能优秀,选择每批个浓度水平的质控品(n,R)以多规则 s/s/R s,进行室内质量控制.综上所述,MAG L UM IX 仪器及其配套试剂A F P、C E A、C A 、C A 、P S A和f P S A测定试剂盒(化 学 发 光 免 疫 分 析 法),经 验 证 其 性 能 符 合I S 实验室认可及临床检测的质量要求,同时 质量管理分析性能评估,评价项目均达到优秀或世界一流,可指导医学实验室选择最优室内质控方案,提高检验项目检测质量.本方法试剂成本较低、仪器操作简便,可实现自动化检测,建议作为进口试剂的替代方案,有助于降低医疗检测费用.参考文献中国合格评审国家认可委员会临床化学定量检验程序性能验证指南S 中国合格评审国家认可委员会医学实验室质量和能力认可准则在临床化学检验领域的应用说明S 姚爱荣罗氏电化学发光项目试剂盒分析性能验证J新疆医学,():张秀明浅析定量检验程序分析性能验证实验方案设计S中华检验医学杂志,():中华人民共和国卫生部发布 WS/T 临床实验室检验项目参考区间制定S中华人民共和国卫生部,叶斌华,胡杰群,周晓,等罗氏自动化学发光仪测促甲状腺激素性能验证J江西医药,():张莉,蒙立业,杨培,等临床检验室内质量控制策略设计新工具分析批长度W e s t g a r d西格玛规则J现代检验医学杂志,():WE S T GA R DS,B AYA T H,WE S T GA R DJO A n a l y t i c a ls i g m am e t r i c s:a r e v i e wo f s i xs i g m a i m p l e m e n t a t i o n t o o l s f o rm e d i c a l l a b o r a t o r i e sJB i o c h e m M e d,():WE S T GA R DJO,WE S T GA R DSA S i xs i g m aq u a l i t ym a n a g e m e n ts y s t e m a n dd e s i g no fr i s k b a s e ds t a t i s t i c a lq u a l i t yc o n t r o lJC l i nL a b oM e d,():谢菊红,何沛,郭炫迈瑞C L I化学发光免疫分析仪检测系统性能验证J中国卫生产业,():(本文编辑:王沪湘)收稿日期 医学临床研究 年月第 卷第期JC l i nR e s,J a n ,V o l ,N o