超高效合相色谱法快速筛查卤化丁基橡胶塞中14种抗氧剂.pdf

超高效合相色谱法快速筛查卤化丁基橡胶塞中 种抗氧剂付蒙陈晓莉陈雷霖曹运姣胡敏赵霞(.湖北省药品监督检验研究院湖北省药品质量检测与控制工程技术研究中心国家药品监督管理局中药质量控制重点实验室武汉.湖北中医药大学武汉.中国食品药品检定研究院北京)摘 要 目的 建立一种快速检测卤化丁基胶塞中 种抗氧剂的方法 方法 采用超高效合相色谱法色谱柱为(.)主要以超临界二氧化碳流体作为流动相同时以甲醇乙腈()为流动相改性剂进行梯度洗脱流速.系统背压.柱温 进样体积 检测器为二极管阵列检测器()检测波长 结果 种抗氧剂可以在 内实现分离检测 在 范围内 种抗氧剂的质量浓度分别与各自峰面积呈现出良好的线性关系相关系数()均.平均加标回收率为.相对标准偏差()为.()对 批次卤化丁基胶塞样品进行检测主要检测到了 种抗氧剂分别为抗氧剂、抗氧剂、抗氧剂 及抗氧剂 结论 该方法简便高效选择性非常强能够准确快速地分析卤化丁基胶塞中的抗氧剂关键词 卤化丁基橡胶塞抗氧剂超高效合相色谱法二极管阵列检测器中图分类号.文献标识码 文章编号()./.开放科学(资源服务)标识码()(.).(.)/().().().().卤化丁基橡胶塞具有极低的吸湿性、良好的气密性、优良的化学稳定性以及无生理毒副作用等特点从而被广泛应用于粉针剂、注射液等药物的包装 为了延缓材料老化卤化丁基橡胶塞配方中会添加一定量的抗氧剂如受阻酚类抗氧剂 二叔丁基对甲基苯酚()、抗氧剂、抗氧剂)及亚磷酸酯类(抗氧剂)等其一般为人工合成具有一定的毒性在与药品接触的过程中会以渗透、迁移等形式进入药品从而改变药物的理化性质甚至影响药理作用如抗氧剂 可能会使头孢菌素类抗生素注射粉针剂的溶液澄清度超标给患者安全用药带来一定的隐患因此在评估卤化丁基橡胶塞与药品相容性时必须特别重视抗氧剂的检测目前抗氧剂的检测技术方法主要有傅里叶变换红外光谱法、气相色谱质谱法、高效液相色谱法以及液相色谱质谱法 然而这些方法都存在某种程度的局限性抗氧剂涉及种类较少样品的 预处理过程复杂且耗时所需的有机溶剂用量大不符合分析技术方法绿色环保的发展趋势 而超高效合相色谱法()是以单独超临界二氧化碳或二氧化碳与少量有机溶剂混合作为流动相是一种新型环保分析方法相较于气相色谱法不受物质沸点和挥发性的限制可以分离挥发性或非挥发性的组分相较于高效液相色谱法它的选择性更强分析速度更快极性调节的范围也较广既可以分析极性化合物也可以分析非极性化合物特别适用于检测包装材料中的抗氧剂笔者选择了在包装材料中常用的 种抗氧剂包括受阻酚类、亚磷酸酯类以及胺类抗氧化剂作为检测目标这些目标化合物分子质量跨度大大部分都包含极性基团 采用 二极管阵列检测器()技术进行分离和检测并且通过优化色谱参数建立了一种具有快速分析、峰形佳、高分离效果的方法 仪器与试药.仪器 型超高效合相色谱仪(美国 公司)型超声波清洗仪(鼎泰恒盛科技有限公司功率 )电子分析天平(美国梅特勒公司感量:.)色谱柱(.).试药高纯二氧化碳(含量:.)抗氧剂、(上海麦克林公司)性质见表 甲醇、乙腈均为色谱纯(德国默克公司)三氯甲烷为分析纯(国药集团化学试剂)卤化丁基橡胶塞样品信息表见表 方法与结果.色谱条件色谱柱为 (.)流速.柱温 进样体积 系统背压为.收稿日期 修回日期 基金项目湖北省药品监督检验研究院中青年科研基金资助项目()作者简介 付蒙()女湖北武汉人主管药师硕士研究方向:药包材辅料质量:电话:通信作者 胡敏()女湖北荆州人主任药师硕士研究方向:药物质量分析 电话:通信作者 赵霞()女山东潍坊人主任药师博士研究方向:药包材检测及质量控制:电话:检测波长 为 为 流动相 为超临界二氧化碳流动相 为甲醇乙腈()混合液梯度洗脱程序见表.溶液的制备混合对照品溶液:精密称取 种抗氧剂各约 分别放入 量瓶中加入三氯甲烷溶解并稀释至刻度即得到各标准储备液 然后精密量取各标准储备液.放入 量瓶中加入三氯甲烷稀释至刻度摇匀后即得到混合对照品溶液 供试品溶液:精密称取剪碎样品.置于具塞锥形瓶中加入三氯甲烷 超声提取 后将提取液氮吹近干时用三氯甲烷定容至.方法的优化.色谱柱的选择 考察 种不同的色谱柱见图 色谱柱对目标化合物的分离效果最好 种抗氧剂色谱峰均能实现较好的基线分离峰形尖锐且对称目标化合物在.内出峰.流动相中改性剂的选择 考察 种不同的改性剂见图 在采用甲醇乙腈()为改性剂的条件下 种抗氧剂能够实现基线分离并且峰形得到改善.柱温的影响 考察 种不同的柱温见图 随柱温的变化抗氧剂保留时间有不同程度的缩短与延长且部分组分的峰无法实现基线分离因此最终选择柱温为 .系统背压的优化 本实验比较了 组系统背压下抗氧剂的分离效果见图 当系统背压为.时抗氧剂 与抗氧剂 峰重叠当系统背压升高至.时 种抗氧剂色谱峰的分离度明显提高且峰形良好继续增大系统背压至.时抗氧剂 与抗氧剂 无法实现基线分离 因此本实验将系统背压设置为.提取方法的考察 考虑到操作的简便性实验选择了超声波提取技术 通过对 种提取溶剂(三氯甲烷、正己烷、甲醇)进行考察发现三氯甲烷与正己烷对胶塞的溶胀作用超过了甲醇三氯甲烷和甲醇对 种抗氧剂的溶解能力明显优于正己烷 然而在 系统中一般选用非极性溶剂作为样品溶剂以减弱溶剂本身的影响 因此选择三氯甲烷作为提取溶剂其保留时间为.既避免了溶剂效应又对试样的分离无干扰 本实验对超声提取的时间进行考察见图 超声、时提取效率差异较小但均优于超声 故采用 作为超声时间.方法学考察.线性关系考察精密量取上述标准储备液各、分别置于 医药导报 年 月第 卷第 期表 种抗氧剂的性质.编号抗氧剂化学名化学物质登录号分子式二叔丁基对甲基苯酚三(二叔丁基)亚磷酸苯酯(二叔丁基羟基苯基)丙酸正十八烷醇酯硫代二乙撑双(二叔丁基羟基苯基)丙酸酯二(苯基异丙基)二苯胺亚甲基双(甲基叔丁基苯酚)(二辛硫基三嗪基)氨基二叔丁基苯酚三甲基三(二叔丁基羟基苄基)苯三(二叔丁基羟基苄基)异氰尿酸四(二叔丁基羟基)苯丙酸季戊四醇酯双(二叔丁基羟基苯基)丙酰肼三乙二醇醚二(叔丁基羟基甲基苯基)丙酸酯双(二叔丁基羟基苯基)丙酰基)己二胺异氰脲酸三(叔丁基羟基二甲苯基)酯表 卤化丁基橡胶塞样品信息.编号样品厂家批号 注射液用氯化丁基橡胶塞厂家 注射用无菌粉末用氯化丁基橡胶塞厂家 注射用冷冻干燥用氯化丁基橡胶塞厂家 注射液用溴化丁基橡胶塞厂家 注射用无菌粉末用溴化丁基橡胶塞厂家 冷冻干燥注射用无菌粉末用溴化丁基橡胶塞厂家 注射用冷冻干燥用氯化丁基橡胶塞厂家 注射用无菌粉末用溴化丁基橡胶塞厂家 注射用无菌粉末用氯化丁基橡胶塞厂家 注射用冷冻干燥用溴化丁基橡胶塞厂家 表 梯度洗脱程序.时间/流动相 流动相.量瓶中加入三氯甲烷稀释至刻度然后摇匀得到线性溶液按“.节”的色谱条件进行分析 以浓度()作为横坐标峰面积()作为纵坐标进行线性回归结果见表 在 的浓度范围内 种抗氧剂的线性相关系数()均.说明线性关系良好.检测限与定量限 将线性溶液用三氯甲烷逐级稀释进样测定 结果当信噪比约为 时测得检测下限当信噪比约为 时测得定量下限见表 种抗氧剂的检测下限为.定量下限范围为.图 色谱柱对 种抗氧剂的分离效果.精密度实验精密量取线性溶液 按“.节”的色谱条件连续进样 次并记录色谱图及峰面积值 实验结果表明 种抗氧剂峰面积的相对标准偏差()()为.说明仪器进样精密度良好 图 有机溶剂对 种抗氧剂的分离效果.图 柱温对 种抗氧剂分离效果的影响.稳定性实验精密量取线性溶液 按“.节”的色谱条件分别在、进样测定并记录色谱图及峰面积值 实验结果表明在 内 种抗氧剂峰面积的 为.说明其溶液在 内基本保持稳定.加标回收率实验取未检出 种抗氧剂的卤化丁基胶塞样品(样品)精密称取剪碎样品.置于具塞锥形瓶中作为空白基质样品分别精密加入标准储备液各、按“.节”的供试品溶液制备方法处理得到 个水平的模拟样品考察回收率每个浓度制备 份平行样品 结果见表 种抗氧剂的平均回收率为.()范围为.说明该方法具有良好的准确度图 系统背压对 种抗氧剂分离效果的影响.图 提取时间优化.样品测定 取次样品 批次制备供试品溶液并按“.节”的色谱条件进样测定典型的卤化丁基橡胶塞 色谱图见图 测定结果见表 批卤化丁基橡胶塞样品主要检出了抗氧剂、抗氧剂、抗氧剂 以及抗氧剂 其他 种抗氧剂均未检出 讨论.色谱条件的选择 色谱柱:、色谱柱具有不同的填料其中 色谱柱的固定相为表面键合了 乙基吡啶的亚乙基桥杂化颗粒其对于抗氧剂这种具极性官能团的化合物具有更强的选择性改性剂:在 系统中流动相主要为超临界二氧化碳通常会添加适量的改性剂这样可以增强对目标物的洗脱能力和选择性 常用的改性剂包括质子给予型的醇类(例如甲醇、乙醇等)和质子接受型的乙腈医药导报 年 月第 卷第 期表 方法学考察结果.抗氧剂线性方程定量下限检测下限()重复性稳定性回收率.图 卤化丁基胶塞 色谱图(样品).()表 批样品中抗氧剂测定结果.样品编号总量.:未检出:.通过研究发现甲醇的洗脱能力较强仅对部分抗氧剂的分离效果较好而乙腈的洗脱能力较弱部分抗氧剂峰形展宽并出现拖尾 在采用甲醇乙腈()为改性剂的条件下 种抗氧剂能很好地分离柱温:在 系统中控制柱温可以显著地影响待测化合物的保留行为和选择性 柱温的改变会直接影响二氧化碳的密度和黏度进而对色谱分离的效果和灵敏度产生影响 随着柱温升高二氧化碳的密度会相应降低黏度亦会下降导致其对待测物的洗脱效力降低并使保留时间延长相反随着柱温下降二氧化碳的密度和黏度就会有所上升从而增加洗脱待测物的能力并缩短保留时间 通常柱温的设定范围为 本实验确定 为抗氧剂分离的最佳柱温系统背压:当系统背压降低二氧化碳的密度与黏性会随之下降从而导致对样品的洗脱能力减弱致使其保留时间延长反之当系统背压增大二氧化碳的密度与黏性会相对增大从而导致对样品的洗脱能力增强致使其保留时间缩短 因此系统背压是通过影响流动相密度来实现分离目标化合物.测定结果分析本研究采用 法对卤化丁基胶塞中的 种抗氧剂进行了分析和检测方法学验证结果表明该法操作简便、重复性好、准确度高 批次样品中抗氧剂 和抗氧剂 均有检出含量分别为.和.批次样品中抗氧剂 和 抗 氧 剂 均 有 检 出 含 量 分 别 为.和.批次样品仅检出抗氧剂 含量为.批次样品仅检出抗氧剂含量为.种抗氧剂的总量为.食品接触材料及制品用添加剂使用标准明确规定了食品接触材料及制品允许使用塑料抗氧剂的类型、使用范围、最大使用量、特定迁移量以及最大残留量等限制要求欧洲药典.规定塑料包装材料中抗氧剂、均不得超过.不得超过.且总量不得超过.胶塞中暂无规定若按此限度计算 批样品中抗氧剂均符合上述要求.展望 本研究实现了在.内分析卤化丁基胶塞中 种抗氧剂与传统液相色谱法相比分析时间明显缩短 同时使用超临界二氧化碳作为主要流动相减少了有机溶剂的消耗不仅可以降低分析成本更能满足环境保护标准的要求 该技术简便且快速满足实际样本中抗氧剂分析的要求对国内外市场在卤化丁基胶塞中的抗氧剂筛查和研究具有实用参考价值参考文献 饶艳春左军凤熊马建等.胶塞中抗氧剂测定及其在药品中的迁移研究.中国药物评价():.张锡云王爱秀许艳等.药用胶塞中抗氧化剂的测定及其向药品中的迁移研究.现代医药卫生():.邹宇刘杨刘亚威等.醋酸钠林格注射液与包材中抗氧剂的相容性研究.中南药学():.韩程佳刘浩王彦等.药用丁基胶塞与注射用氨曲南相容性研究.现代生物医学进展():.刘贞郑双双钟振华等.分析 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