一轮复习选修生物技术实践模块省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx

考纲解读考纲解读n1.微生物试验室培养n2.土壤中分解尿素细菌分离与计数n3.分解纤维素微生物分离n4.细菌结构和繁殖n5.病毒结构和增殖n6.微生物需要营养物质及功效n7.培养基配制标准n8.培养基种类 考点考点1 1 微生物利用微生物利用第1页一、微生物试验室培养一、微生物试验室培养（一一）培养基培养基人们按照微生物对营养物质不一样需求，配置出供其人们按照微生物对营养物质不一样需求，配置出供其生长繁殖营养基质称生长繁殖营养基质称培养基培养基普通培养基均需要碳源、氮源、普通培养基均需要碳源、氮源、无机盐和水等无机盐和水等培养基基本成份培养基基本成份 液体培养基（普通用锥形瓶盛装）液体培养基（普通用锥形瓶盛装）固体培养基（普通用试管或培养皿盛装），在液体固体培养基（普通用试管或培养皿盛装），在液体培养基基础上再添加琼脂。培养基基础上再添加琼脂。培养基种类培养基种类第2页2、了解培养基种类及应用（适当补充）按物理状态不一样划按物理状态不一样划分分固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基按化学组成不一样划分：合成培养基按化学组成不一样划分：合成培养基/天然培养基天然培养基按用途不一样划按用途不一样划分分判别培养基判别培养基选择培养基选择培养基第3页加入青霉素培养基加入青霉素培养基 分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐培养基加入高浓度食盐培养基 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌只有尿素作为惟一氮源培养基只有尿素作为惟一氮源培养基 分离出分解尿素细菌分离出分解尿素细菌不加氮源无氮培养基不加氮源无氮培养基 分离固氮菌分离固氮菌只有纤维只有纤维素素作为惟一碳源培养基作为惟一碳源培养基 分离分解纤维素细菌分离分解纤维素细菌加入青霉素等抗生素培养基加入青霉素等抗生素培养基 分离导入了目标基因受体细胞分离导入了目标基因受体细胞选择培养基做一些适当补充第4页（二二）无菌技术无菌技术 无菌操作泛指在培养微生物操作中，全无菌操作泛指在培养微生物操作中，全部预防杂菌污染方法技术。部预防杂菌污染方法技术。取得纯净培养物关键是预防外来杂菌入侵，无取得纯净培养物关键是预防外来杂菌入侵，无菌技术就是预防杂菌污染操作技术。菌技术就是预防杂菌污染操作技术。灭菌方法灭菌方法适用对象适用对象所需条件所需条件灭菌时间灭菌时间灼烧灭菌灼烧灭菌接种金属用具、试管接种金属用具、试管口、瓶口口、瓶口n在酒精灯火焰充分燃烧层灼烧直至烧红直至烧红干热灭菌干热灭菌n能耐高温并需要保持干燥玻璃器皿、金属用具等干热灭菌箱内，干热灭菌箱内，160170OC中中12h高压蒸汽高压蒸汽灭菌灭菌n培养基、试验器具等100kPa，121OC1530min第5页消毒消毒 无菌技术种类无菌技术种类灭菌灭菌 使用较为温和方法（酒精、紫外线）来杀死使用较为温和方法（酒精、紫外线）来杀死部分对人体有害微生物。部分对人体有害微生物。对试验操作空间、操作者衣着和手进行清洁对试验操作空间、操作者衣着和手进行清洁消毒；消毒；将培养皿、接种用具进行灭菌；将培养皿、接种用具进行灭菌；接种过程要在酒精灯附近进行。接种过程要在酒精灯附近进行。使用较为强烈理化原因杀死物体内外全部微使用较为强烈理化原因杀死物体内外全部微生物（包含芽孢和孢子）。生物（包含芽孢和孢子）。第6页二、实二、实验验操操作作（一一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏蛋白胨固体培养基配方物质物质牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨NaClNaCl琼脂琼脂水水重量重量5g5g10g10g5g5g20g20g定溶至定溶至100mL100mL2.2.基本过程：称量基本过程：称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板 高压锅灭菌高压锅灭菌冷却到冷却到50OC左右时倒左右时倒第7页基本过程：称量基本过程：称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板分离分解尿素细菌：培养基中加入尿素为唯分离分解尿素细菌：培养基中加入尿素为唯一氮源一氮源分离分解纤维素微生物：培养基中加入纤维分离分解纤维素微生物：培养基中加入纤维素为唯一碳源素为唯一碳源第8页第9页第10页（二二）纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌 微生物接种方法常见有平板划线法和稀释涂布平板法。微生物接种方法常见有平板划线法和稀释涂布平板法。1.1.平板划线法平板划线法 经过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线操作，经过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线操作，将聚集菌种逐步稀释分散到培养基表面（操作如教材将聚集菌种逐步稀释分散到培养基表面（操作如教材1818页图示）。页图示）。在数次划线后能够分离到由一个细胞繁殖而来肉眼在数次划线后能够分离到由一个细胞繁殖而来肉眼可见子细胞群体称可见子细胞群体称菌落菌落。优点：能够观察菌落特征，对混合菌进行分离优点：能够观察菌落特征，对混合菌进行分离缺点：不能计数缺点：不能计数普通用于分离微生物纯种普通用于分离微生物纯种第13页 2.2.稀释涂布平板法稀释涂布平板法 将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不一样稀释度将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不一样稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面进行培养。菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面进行培养。在稀释度足够高菌液里，聚集在一起微生物将分散成在稀释度足够高菌液里，聚集在一起微生物将分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操作和涂布平板操作。作和涂布平板操作。优点：能够计数，能够观察菌落特征。优点：能够计数，能够观察菌落特征。缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，轻易蔓延。效果不好，轻易蔓延。普通用于平板培养基回收率计数普通用于平板培养基回收率计数第16页系列稀释操作系列稀释操作101102103104105106(1)(1)将分别盛有将分别盛有9mL9mL水试管灭菌并编号。水试管灭菌并编号。(2)(2)用移液管吸收用移液管吸收1mL1mL培养菌液，注入第二支试管中，轻培养菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。(3)(3)从从10101 1倍稀释试管中吸收倍稀释试管中吸收1mL1mL稀释液，注入第三支试管稀释液，注入第三支试管中，重复步骤中，重复步骤2 2，直至到第六支试管。，直至到第六支试管。第17页涂布平板操作涂布平板操作(1)(1)将涂布器浸在盛有将涂布器浸在盛有7070酒精烧杯中。酒精烧杯中。(2)(2)取少许菌液（不超取少许菌液（不超0.1mL0.1mL），滴加到培养基表），滴加到培养基表面。面。(3)(3)将沾有酒精涂布器在火焰上引燃，火熄后冷却将沾有酒精涂布器在火焰上引燃，火熄后冷却8 810s10s。(4)(4)用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。第18页四、课题延伸菌种保留 1.1.试管低温暂时保留试管低温暂时保留 将菌种接种到试管固体斜面培养基上，培养成菌落后，将菌种接种到试管固体斜面培养基上，培养成菌落后，置于置于4 4OC C冰箱中保留（每隔冰箱中保留（每隔3 36 6个月要重新接种培养后再个月要重新接种培养后再保留）。保留）。2.2.甘油管长久保留甘油管长久保留 在在3mL3mL甘油瓶中加入甘油瓶中加入1mL1mL甘油，高压灭菌。将甘油，高压灭菌。将1mL1mL培养培养菌液转移到甘油瓶中，充分混合后，置于菌液转移到甘油瓶中，充分混合后，置于2020OC C冷冻箱中冷冻箱中保留。保留。第22页土壤中分解尿素细菌分离与计数土壤中分解尿素细菌分离与计数（一一）筛筛选选菌菌株株原理原理人为提供有利于目标菌株条件（包含营养、温度、人为提供有利于目标菌株条件（包含营养、温度、pHpH等），同时抑制或阻止其它微生物生长。等），同时抑制或阻止其它微生物生长。在微生物学中，将允许特定种类微生物生长，同时抑在微生物学中，将允许特定种类微生物生长，同时抑制或阻止其它种类微生物生长培养基，称做制或阻止其它种类微生物生长培养基，称做选择培养基。选择培养基。第23页 1.1.在培养基配方中，为微生物生长提供碳源和氮源在培养基配方中，为微生物生长提供碳源和氮源分别是是什么物质？分别是是什么物质？碳源是葡萄糖，氮源是尿素。碳源是葡萄糖，氮源是尿素。2.2.分析该配方培养基对微生物是否含有筛选作用？分析该配方培养基对微生物是否含有筛选作用？假如有，又是怎样进行筛选？假如有，又是怎样进行筛选？能分解尿素细菌筛选能分解尿素细菌筛选阅读教材阅读教材2222页第一大段相关内容，并思索回答以下页第一大段相关内容，并思索回答以下问题：问题：有筛选作用，它氮源只含有尿素，只有能合成份解有筛选作用，它氮源只含有尿素，只有能合成份解尿素脲酶细菌才能生长。尿素脲酶细菌才能生长。第24页（二二）统计菌落数目统计菌落数目原理原理利用稀释涂布平板法来统计样品中活菌数。利用稀释涂布平板法来统计样品中活菌数。统计菌落数目标理论依据是：当样品稀释度足够高时，统计菌落数目标理论依据是：当样品稀释度足够高时，培养基表面生长一个菌落，起源于样品稀释液中一个活菌。培养基表面生长一个菌落，起源于样品稀释液中一个活菌。所以，恰当稀释度是成功地统计菌落数目标关键。为了确所以，恰当稀释度是成功地统计菌落数目标关键。为了确保结果准确，通常将几个稀释度下菌液都涂布在平板上，保结果准确，通常将几个稀释度下菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在培养后再选择菌落数在30 30 300300平板进行计数。平板进行计数。第25页 第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，所以结果第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，所以结果不含有说服力。第二位同学设置了重复组，涂布了不含有说服力。第二位同学设置了重复组，涂布了3 3个平板，不过，个平板，不过，其中其中1 1个平板计数结果与另个平板计数结果与另 2 2个相差太远，说明在操作过程中可能个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，所以，不能简单地将出现了错误，所以，不能简单地将3 3个平板计数值用来求平均值。个平板计数值用来求平均值。在设计试验时，一定要涂布最少在设计试验时，一定要涂布最少3 3个平板，作为重个平板，作为重 复组，才复组，才能增强试验说服力与准确性。在分析试验结果时，一定要考虑所设能增强试验说服力与准确性。在分析试验结果时，一定要考虑所设置重复组结果是否基本一致，结果不一致，意味着操作有误，需要置重复组结果是否基本一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新试验。重新试验。阅读教材阅读教材2222页页“（二）统计菌落数目（二）统计菌落数目”一段，并讨一段，并讨论教材中提出问题。论教材中提出问题。第26页（三三）设设置置对对照照 A A同学结果与其它同学不一样，可能解释有两种。一是因为土同学结果与其它同学不一样，可能解释有两种。一是因为土样不一样，二是因为培养基污染或培养基混有其它氮源。终究是哪样不一样，二是因为培养基污染或培养基混有其它氮源。终究是哪个原因，能够经过试验来证实。试验方案有两种。一个方案是能够个原因，能够经过试验来证实。试验方案有两种。一个方案是能够接种其它菌种，看是否有菌落出现，验证培养基是否混有其它氮源。接种其它菌种，看是否有菌落出现，验证培养基是否混有其它氮源。另一个方案是将另一个方案是将A A同学配制培养基在不加土样情况下进行培养，作同学配制培养基在不加土样情况下进行培养，作为空白对照，以证实培养基是否受到污染。为空白对照，以证实培养基是否受到污染。所以，在试验中普通都应设置对照组，使试验更有说服力。所以，在试验中普通都应设置对照组，使试验更有说服力。阅读教材阅读教材22222323页页“（三）设置对照（三）设置对照”一段，并讨论一段，并讨论教材中提出问题。教材中提出问题。第27页一、实 验 设 计 阅读教材阅读教材23232525页页“试验设计试验设计”和和“操作提醒操作提醒”等两个内容，请依据教材提供三个资料、样品稀等两个内容，请依据教材提供三个资料、样品稀释和稀释液取样培养流程示意图及释和稀释液取样培养流程示意图及“操作提醒操作提醒”相相关问题，自行设计一个土壤中分解尿素细菌分离关问题，自行设计一个土壤中分解尿素细菌分离与计数这么一个试验。与计数这么一个试验。第28页试验设计试验设计1.1.试验名称试验名称土壤中某样品细菌分离与计数2.实验目（略）3.3.材料用具（略）材料用具（略）4.4.操作步骤操作步骤 从肥沃、湿润土壤中取样。先铲去（铲已经过消毒从肥沃、湿润土壤中取样。先铲去（铲已经过消毒处理）表层土处理）表层土3cm3cm左右，再取样，将样品装入事先消毒过左右，再取样，将样品装入事先消毒过信封中。信封中。（1 1）土壤取样）土壤取样第29页 准备牛肉膏蛋白胨培养基（作为对照组）和选择培养准备牛肉膏蛋白胨培养基（作为对照组）和选择培养基。将菌液稀释相同倍数（见教材基。将菌液稀释相同倍数（见教材2323页页“样品稀释流程示样品稀释流程示意图意图”）。稀释倍数为）。稀释倍数为 10 103 3 10107 7。每个稀释度均用。每个稀释度均用3 3个选个选择培养基，择培养基，1 1个牛肉膏蛋白胨培养基，共需要个牛肉膏蛋白胨培养基，共需要1515个选择培个选择培养基，养基，5 5个牛肉膏蛋白胨培养基（都作好标识）。个牛肉膏蛋白胨培养基（都作好标识）。（2 2）制备培养基）制备培养基（3 3）高温消毒）高温消毒 将准备好培养基和将准备好培养基和8 8支试管、一支移液管（用纸包好）支试管、一支移液管（用纸包好）放到高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌处理。放到高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌处理。第30页 将将10 g10 g土样加入盛有土样加入盛有90 mL90 mL无菌生理盐水锥形瓶中无菌生理盐水锥形瓶中（锥形瓶体积为（锥形瓶体积为250 mL250 mL），充分摇匀，吸收上清液），充分摇匀，吸收上清液1mL1mL，转移至盛有转移至盛有9 mL9 mL生理盐水无菌大试管中，依次等比稀释生理盐水无菌大试管中，依次等比稀释至至10107 7稀释度，并按照由稀释度，并按照由10107 710103 3稀释度次序分别吸收稀释度次序分别吸收0.1mL0.1mL进行平板涂布操作。按照浓度从低到高次序涂布平进行平板涂布操作。按照浓度从低到高次序涂布平板。板。（4 4）微生物培养与观察）微生物培养与观察 将涂布好培养皿放在将涂布好培养皿放在3030温度下培养。伴随培养时间温度下培养。伴随培养时间延长，会有不一样菌落产生。比较牛肉膏培养基和选择培延长，会有不一样菌落产生。比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落数量、形态等，并做好统计。养基中菌落数量、形态等，并做好统计。第31页 挑选选择培养基中不一样形态菌落接入含酚红培养挑选选择培养基中不一样形态菌落接入含酚红培养基斜面中，观察能否产生如书本中图基斜面中，观察能否产生如书本中图2-102-10颜色反应。颜色反应。（5 5）细菌计数）细菌计数 选取菌落数在选取菌落数在3030300300平板进行计数。在同一稀释度下，平板进行计数。在同一稀释度下，最少对最少对3 3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并依据个平板进行重复计数，然后求出平均值，并依据平板所对应稀释度计算出样品中细菌数目。平板所对应稀释度计算出样品中细菌数目。第32页二、结果分析与评价 1.1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落否筛选出菌落对照培养皿在培养过程中没有菌落生长，说对照培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基菌落数目明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基菌落数目显著大于选择培养基数目，说明选择培养基已筛选显著大于选择培养基数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。出一些菌落。第33页 2.2.样品稀释操作是否成功样品稀释操作是否成功 假如得到了假如得到了2 2个或个或2 2个以上菌落数目在个以上菌落数目在3030300300平平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落计板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落计数。数。3.3.重复组结果是否一致重复组结果是否一致 假如各位同学选取是同一个土样，统计结果应假如各位同学选取是同一个土样，统计结果应该靠近。假如结果相差太远，则需要从各项操作过该靠近。假如结果相差太远，则需要从各项操作过程中去分析、寻找可能原因。程中去分析、寻找可能原因。第34页三、课 题 延 伸 能分解尿素细菌判定能分解尿素细菌判定判定原理：判定原理：细菌合成脲酶将尿素分解成氨，会使培养基细菌合成脲酶将尿素分解成氨，会使培养基pHpH升高。升高。判定方法：判定方法：在以尿素为唯一氮源培养基中加入酚红指示剂，利用在以尿素为唯一氮源培养基中加入酚红指示剂，利用此培养基进行细菌培养，观察培养基颜色改变。此培养基进行细菌培养，观察培养基颜色改变。第35页分解纤维素微生物分离分解纤维素微生物分离（一一）纤维素与纤维素酶纤维素与纤维素酶纤维素纤维素：一个由葡萄糖首尾相连而成高分子化合物，广一个由葡萄糖首尾相连而成高分子化合物，广泛地存在于植物根、茎、叶等器官中。泛地存在于植物根、茎、叶等器官中。纤维素酶纤维素酶：由微生物分泌一个复合酶，包含由微生物分泌一个复合酶，包含C C1 1酶酶、C Cx x酶酶和葡萄糖苷酶，因为它们协同作用，最终将纤维素分解成和葡萄糖苷酶，因为它们协同作用，最终将纤维素分解成葡萄糖。葡萄糖。纤维素纤维素C C1 1酶酶C Cx x酶酶纤维二糖纤维二糖葡萄糖葡萄糖苷苷酶酶葡萄糖葡萄糖第36页取二支取二支20mL20mL试管试管试验：试验：纤维素酶分解纤维素试验纤维素酶分解纤维素试验各加入一张滤纸条各加入一张滤纸条各加入各加入10mL0.1mol/L10mL0.1mol/L醋酸醋酸 醋酸钠缓冲液醋酸钠缓冲液甲甲 乙乙在甲试管中加入在甲试管中加入1mL1mL蒸馏水，蒸馏水，乙试管加入乙试管加入1mL1mL纤维素酶纤维素酶将试管放在将试管放在140r/min140r/min摇床上振荡摇床上振荡1h1h结果：乙试管滤纸条消失结果：乙试管滤纸条消失 讨论讨论：乙试管滤纸条为何会消失？甲试管作用是什么？乙试管滤纸条为何会消失？甲试管作用是什么？第37页刚果红染色法刚果红染色法刚果红能与纤维素形成红色复合物，而不与刚果红能与纤维素形成红色复合物，而不与水解后纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。水解后纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。（二二）纤维素分解菌筛选纤维素分解菌筛选用加入刚果红纤维素培养基去培养微生物时，用加入刚果红纤维素培养基去培养微生物时，假如培养基中出现以菌落为中心透明圈时，可说明假如培养基中出现以菌落为中心透明圈时，可说明该菌落是纤维素分解菌，因为它已将被刚该菌落是纤维素分解菌，因为它已将被刚果红果红染染成红色纤维素分解了。成红色纤维素分解了。第38页一、实一、实 验验 设设 计计 请你依据试验流程图和提供三个资料以及请你依据试验流程图和提供三个资料以及“操作提操作提醒醒”，在思索相关问题基础上，设计出一个详细试验方，在思索相关问题基础上，设计出一个详细试验方案。案。土壤取样土壤取样选择培养选择培养梯度稀释梯度稀释 将样品涂布在判别纤将样品涂布在判别纤 维素分解菌培养基上维素分解菌培养基上 筛选产生透筛选产生透 明圈菌落明圈菌落第39页阅读与思索阅读与思索阅读教材阅读教材28282929页页“资料一资料一”“资料三资料三”，并思索相关问题。，并思索相关问题。问题一问题一：是液体培养基，因为没有添加琼脂。是液体培养基，因为没有添加琼脂。问题二问题二：含有筛选作用，因为培养基中碳源是纤维素，含有筛选作用，因为培养基中碳源是纤维素，该培养基只有能分泌纤维素酶纤维素分解菌才能生长。该培养基只有能分泌纤维素酶纤维素分解菌才能生长。问题三问题三：“资料三资料三”中两种方法各有哪些优点和不足，中两种方法各有哪些优点和不足，你打算选哪一个？你打算选哪一个？第40页土壤中纤维素分解菌分离土壤中纤维素分解菌分离 1.1.土样采集土样采集：土样采集方法与本专题课题土样采集方法与本专题课题 2 2类似。类似。土样采集要选择富含纤维素环境，这是因为在纤维素含量土样采集要选择富含纤维素环境，这是因为在纤维素含量丰富环境，通常会聚集较多分解纤维素微生物。假如找不丰富环境，通常会聚集较多分解纤维素微生物。假如找不到适当环境，能够将滤纸埋在土壤中，过一个月左右也会到适当环境，能够将滤纸埋在土壤中，过一个月左右也会有能分解纤维素微生物生长。有能分解纤维素微生物生长。二、实二、实 验验 案案 例例第41页 2.2.选择培养选择培养：选择培养需要仪器有：选择培养需要仪器有：250 mL250 mL锥形瓶、锥形瓶、无菌称量瓶、药匙、无菌称量瓶、药匙、1 mL1 mL和和10 mL10 mL移液管、天平、摇床、移液管、天平、摇床、温度计等。温度计等。在在250 mL250 mL锥形瓶中装入锥形瓶中装入30 mL30 mL选择培养基，用选择培养基，用8 8层纱层纱布做成瓶塞，将瓶口塞紧，再在瓶塞外包裹两层包装纸，布做成瓶塞，将瓶口塞紧，再在瓶塞外包裹两层包装纸，用线绳扎紧，在用线绳扎紧，在121 121 下高压蒸汽灭菌下高压蒸汽灭菌20 min20 min。选择培养操作：称取土样选择培养操作：称取土样20 g20 g，在无菌条件下加入，在无菌条件下加入装有装有30 mL30 mL培养基摇瓶中。将摇瓶置于摇床上，在培养基摇瓶中。将摇瓶置于摇床上，在30 30 下下振荡培养振荡培养1 12 d2 d，至培养基变混浊，重复上述方法再培养，至培养基变混浊，重复上述方法再培养一次，然后再进行梯度稀释和涂布平板。一次，然后再进行梯度稀释和涂布平板。高考总复习高考总复习生物生物第42页 3.3.刚果红染色法分离：刚果红染色法分离：纤维素分解菌这一步所需要仪纤维素分解菌这一步所需要仪器有：无菌培养皿、涂布器、器有：无菌培养皿、涂布器、1 mL1 mL移液管，装有移液管，装有9mL9mL无菌无菌水水20 mL20 mL大试管，温箱等。大试管，温箱等。培养基制备参考书本旁栏中百分比配制。在培养基制备参考书本旁栏中百分比配制。在500 mL500 mL三角瓶中装入三角瓶中装入200 mL200 mL培养基，在培养基，在121 121 下高压蒸汽灭菌下高压蒸汽灭菌20 20 minmin。倒平板操作：将灭菌后固体培养基熔化，按无菌操倒平板操作：将灭菌后固体培养基熔化，按无菌操作要求，在无菌培养皿中倒入作要求，在无菌培养皿中倒入151520 mL20 mL培养基，凝固后培养基，凝固后待用。待用。第43页 涂布平板：涂布平板：将稀释度为将稀释度为104104106106菌悬液各取菌悬液各取0.1 mL0.1 mL，滴加在平板培养基上，用涂布器将菌液，滴加在平板培养基上，用涂布器将菌液涂布均匀，在涂布均匀，在3030倒置培养，至菌落长出。每个倒置培养，至菌落长出。每个稀释度下需涂布稀释度下需涂布3 3个平板，并注意设置对照。刚果个平板，并注意设置对照。刚果红染色详细操作步骤参考书本资料三。红染色详细操作步骤参考书本资料三。制备菌悬液：制备菌悬液：按照本专题课题按照本专题课题1 1稀释操作方法，稀释操作方法，将选择培养后培养基进行等比稀释，稀释最大倍数将选择培养后培养基进行等比稀释，稀释最大倍数至至106106。第44页三、结果分析与评价三、结果分析与评价1.培养基制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落培养基制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落对照培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合对照培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。假如观察到产生透明圈菌落，则说明可能取得了分解纤维素微格。假如观察到产生透明圈菌落，则说明可能取得了分解纤维素微生物。生物。2.分离结果是否一致分离结果是否一致因为在土壤中细菌数量远远高于真菌和放线菌数量，所以最因为在土壤中细菌数量远远高于真菌和放线菌数量，所以最轻易分离得到是细菌。但因为所取土样环境不一样，不一样同学也轻易分离得到是细菌。但因为所取土样环境不一样，不一样同学也可能得到真菌和放线菌等不一样分离结果。可能得到真菌和放线菌等不一样分离结果。第45页n1、微生物试验室培养n2、土壤中分解尿素细菌分离与计数n3、分解纤维素微生物分离第46页第47页DNA重组技术重组技术以下不属于微生物是 ()A蓝藻和蘑菇 B葫芦藓和铁线蕨 C噬菌体和黄曲霉 D放线菌和变形虫【解析】病毒、原核生物(比如细菌、放线菌、支原体、蓝藻)、真核类藻类和真菌及原生动物都是微生物。而普通多细胞植物与动物不属于微生物，如葫芦藓是苔藓植物，铁线蕨是蕨类植物，都属于多细胞高等植物。【答案】B第48页微生物营养物质微生物营养物质相关微生物营养物质叙述中，正确是（）A是碳源物质不可能同时是氮源 B凡碳源都提供能量C除水以外无机物只提供无机盐 D无机氮源也能提供能量【解析】不一样微生物，所需营养物质有较大差异，要针对微生物详细情况详细分析。对于A、B选项，它表述是不完整。有碳源只能是碳源，如CO2；有碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有碳源同时是能源，如葡萄糖；有碳源同时是氮源，还是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外无机物种类繁多，功效也多样。如CO2可作自养型微生物碳源；NaHCO3可作自养型微生物碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量情况还是存在，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。【答案】D第49页微生物与病毒关系微生物与病毒关系关于病毒增殖叙述中，正确是（）A病毒侵入宿主细胞后，合成一个蛋白质 B病毒繁殖只在宿主活细胞中进行C病毒繁殖以核衣壳为单位 D在普通培养基上能培养病毒【解析】解答此题需从以下几方面入手分析：首先，病毒是营寄生方式生活，必须生活在活细胞内，不能独立生活，所以在普通培养基上不能生活。第二，繁殖时，病毒核酸进入宿主细胞，利用宿生成份合成子代个体，除了核衣壳，还应包含该病毒其它结构。合成蛋白质不只是一个，应该是各种，包含各种结构蛋白质及物质合成时所需各种酶。【答案】B第50页培养基种类培养基种类要从各种细菌中分离某种细菌，培养基要用（）A加入青霉素培养基 B加入高浓度食盐培养基 C固体培养基 D液体培养基【解析】微生物分离需使用固体培养基，因为某种细菌种类不明，所以难以使用选择培养基，如加入青霉素培养基能够分离到酵母菌和霉菌，加入高浓度食盐培养基能够分离到金黄色葡萄球菌。【答案】C第51页微生物计数微生物计数产生标准菌落细菌最初数目和培养基分别是（）A一个细菌，液体培养基 B许多细菌，液体培养基C一个细菌，固体培养基 D许多细菌，固体培养基【解析】菌落是一个或几个细菌子细胞群体，在固体培养基上，有一定形态结构，肉眼可见，菌落可作为菌种判别主要依据，而各种细菌形成菌落，就不可能有比较标准形态。【答案】C第52页 考点考点2 2 植物组织培养与酶研究植物组织培养与酶研究第53页第54页考纲解读考纲解读n1.植物组织培养技术n2.菊花组织培养n3.月季花药培养n4.酶活力测定普通原理和方法n5.酶在食品制造和洗涤等方面应用n6.制备和应用固定化酶，了解固定化酶和固定化 细胞原理和方法n7.测定酶活力简单方法n8.能够研究酶活性原因n9.酶在生产生活中应用第55页考向指南考向指南n本讲内容主要考查植物组织培养技术和生产过程中应用果胶酶原理，重视事项及最适用量探究；固定化酶、固定化细胞制备及在生产中应用。（1）植物组织培养原理是细胞全能性；（2）酶已广泛应用于食品、环境保护和化工等各个行业，取得了良好经济效益。在必修课基础上，经过试验研究影响酶活性原因以及酶在日常生活和工业生产上应用。考查相关酶特征、酶作用条件等。如广东卷、天津卷、江苏卷、海南卷都有相关考题出现。第56页第57页基础知识基础知识（一）植物组织培养基本过程一）植物组织培养基本过程植物组织培养技术植物组织培养技术第58页n不一样植物组织不一样植物组织n同一植物不一样材料同一植物不一样材料n营养、环境条件营养、环境条件n植物激素植物激素（二）影响植物组织培养原因（二）影响植物组织培养原因第59页n制备制备MS固体培养基固体培养基 1 1、配制母液、配制母液 2 2、配制培养基、配制培养基 3 3、灭菌、灭菌n外植体消毒外植体消毒n接种接种n培养培养n移栽移栽n栽培栽培试验操作试验操作第60页结果分析与评价结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况分析（一）对接种操作中污染情况分析（二）是否完成了对植物组织脱分化和再（二）是否完成了对植物组织脱分化和再 分化分化（三）是否进行了统计、对照与统计（三）是否进行了统计、对照与统计（四）生根苗移栽是否合格（四）生根苗移栽是否合格第61页基础知识基础知识（一）被子植物花粉发育（一）被子植物花粉发育1、被子植物花结构是怎样？、被子植物花结构是怎样？2、观察下列图，和减数分裂比较，你能指出对应时期吗、观察下列图，和减数分裂比较，你能指出对应时期吗？又有何特点？又有何特点？月季花药培养月季花药培养第62页（二）产生花粉植株两种路径（二）产生花粉植株两种路径有哪两种路径？原因是什么？有哪两种路径？原因是什么？花药中花药中花粉花粉花药中花药中花粉花粉胚状体胚状体愈伤组织愈伤组织丛芽丛芽丛芽丛芽生根生根移栽移栽花药培养产生花粉植株两种路径花药培养产生花粉植株两种路径第63页（三）影响花药培养原因（三）影响花药培养原因1 1、材料选择、材料选择 不一样植物不一样植物 同一植物不一样生理情况同一植物不一样生理情况（花期早期初花期）（花期早期初花期）适当花粉发育期适当花粉发育期（单核居中期与靠边期之间）（单核居中期与靠边期之间）另外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密另外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等度等2 2、培养基组成、培养基组成第64页为何花瓣松动会给材料消毒带为何花瓣松动会给材料消毒带来困难？来困难？答：花瓣松动后，微生物就可答：花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料消毒能侵入到花药，给材料消毒带来困难。带来困难。第65页试验操作试验操作（一）材料选取（一）材料选取染色镜检染色镜检（二）材料消毒（二）材料消毒酒精、氯化汞、次氯酸钙酒精、氯化汞、次氯酸钙（三）接种和培养（三）接种和培养结果分析与评价结果分析与评价第66页细胞壁结构及作用：细胞壁结构及作用：1、作用是什么？、作用是什么？2、特点？、特点？3、结构组成？、结构组成？保护植物细胞；支撑植物细胞。弹性小；全透性。纤维素、果胶。果胶酶在果汁生产中作用果胶酶在果汁生产中作用第67页 植物细胞壁以及胞间层主要组成成份之一，它是植物细胞壁以及胞间层主要组成成份之一，它是由由半乳糖醛酸半乳糖醛酸聚合而成一个聚合而成一个高分子化合物高分子化合物，不溶于水。，不溶于水。1 1、果果胶胶第68页 在果汁加工中，果胶不但会影响出汁率，还会使果在果汁加工中，果胶不但会影响出汁率，还会使果汁浑浊。果胶酶能够分解汁浑浊。果胶酶能够分解果胶果胶，瓦解植物细胞，瓦解植物细胞细胞壁细胞壁及及胞间层胞间层，使榨取果汁更轻易，而果胶分解成可溶性，使榨取果汁更轻易，而果胶分解成可溶性半乳半乳糖醛酸糖醛酸，也使得浑浊果汁变得澄清。，也使得浑浊果汁变得澄清。果胶酶果胶酶 果胶酶并不特指某一个酶，而是分解果胶一类酶总果胶酶并不特指某一个酶，而是分解果胶一类酶总称，包含称，包含多聚多聚半乳糖醛酸酶半乳糖醛酸酶、果胶分解酶果胶分解酶和和果胶脂酶果胶脂酶等。等。第69页 指酶催化一定化学反应能力。酶反应速度用指酶催化一定化学反应能力。酶反应速度用单位单位时间时间内内单位体积单位体积中中反应物降低许反应物降低许或或生成物增加量生成物增加量来表来表示。示。(1)(1)酶活性酶活性2 2、酶活性与影响酶活性原因酶活性与影响酶活性原因.果胶酶用量果胶酶用量(2)(2)影响酶活性原因影响酶活性原因 a.a.温度温度b.pHb.pH c.c.酶抑制剂酶抑制剂第70页1、探究温度和、探究温度和pH对酶活性影响对酶活性影响（1）设计试验方案设计试验方案 A A、确定温度、确定温度/PH/PH梯度（梯度（5C5C0 0/10C/10C0 0）/PH5/PH5、6 6、7 7、8 8 探究控制温度探究控制温度/PH/PH方法和办法。方法和办法。你试验变量是什么？怎样设定？你试验变量是什么？怎样设定？B B、确定水果种类、确定水果种类确定制备果汁方法确定制备果汁方法 确定试验确定试验用水果用量用水果用量 确定果胶酶用量确定果胶酶用量控制测定果胶酶活性方控制测定果胶酶活性方法。法。4、试验设计、试验设计第71页 （2 2）试验操作步骤：）试验操作步骤：制备水果泥；制备水果泥；配制果胶酶；配制果胶酶；水果泥与果胶酶分别水果泥与果胶酶分别水浴保温；水浴保温；将水果泥和果胶酶混合保温；将水果泥和果胶酶混合保温；过滤出果过滤出果汁；汁；统计果汁量；统计果汁量；改变不一样温度改变不一样温度/PH/PH后重复以上后重复以上试验试验 （3 3）设计统计数据表格）设计统计数据表格 （4 4）得出结论与分析：）得出结论与分析：画曲线图；最适温度画曲线图；最适温度/PH/PH是是温度温度/PH/PH果汁果汁量量/ml/ml第72页在实际操作过程中，还需要注意以下事项：在实际操作过程中，还需要注意以下事项：1 1与其它工业用酶基本相同，果胶酶适宜温度范围与其它工业用酶基本相同，果胶酶适宜温度范围也比较宽泛，所以，能够选取也比较宽泛，所以，能够选取10 10 作为温度梯度，设置作为温度梯度，设置详细温度为详细温度为10 10、20 20、30 30、40 40、50 50 和和60 60 等，也能够尝试以等，也能够尝试以5 5 作为温度梯度。作为温度梯度。2 2苹果、橙子和葡萄等水果都能够作为反应物，水苹果、橙子和葡萄等水果都能够作为反应物，水果不用去皮。如用苹果为原材料，普通可按每个中等大果不用去皮。如用苹果为原材料，普通可按每个中等大小苹果加水小苹果加水100100200 mL200 mL百分比进行搅拌，取得稀苹果泥。百分比进行搅拌，取得稀苹果泥。第73页3果泥用量可以采取5 mL左右，果胶酶用量可采取质量浓度为2%果胶酶溶液2 mL。4水浴时间可认为2030 min。5过滤果汁时，漏斗中应放置滤纸。6探究pH对果胶酶活性影响，只须将温度梯度改成pH梯度，并选定一个适宜温度进行水浴加热。反应液中pH可以经过体积分数为0.1%氢氧化钠或盐酸溶液进行调节。第74页、探究果胶酶用量、探究果胶酶用量 探究果胶酶用量是建立在探究最适温度和探究果胶酶用量是建立在探究最适温度和pHpH对对果胶酶活性影响基础之上。此时，研究变量是果胶酶活性影响基础之上。此时，研究变量是 ，其它原因都应，其它原因都应 。果胶酶用量果胶酶用量保持不变保持不变 方案：方案：能够配制不一样浓度果胶酶溶液，也能够能够配制不一样浓度果胶酶溶液，也能够只配制一个浓度果胶酶溶液，然后使用不一样体积只配制一个浓度果胶酶溶液，然后使用不一样体积即可。需要注意是，反应液即可。需要注意是，反应液pHpH必须相同，不然将影必须相同，不然将影响试验结果准确性。响试验结果准确性。第75页 依据试验数据绘制出温度和依据试验数据绘制出温度和pHpH对果胶酶活对果胶酶活性影响曲线图；性影响曲线图；不一样果胶酶用量对出汁量影响曲线图不一样果胶酶用量对出汁量影响曲线图（在浓度和体积相同条件下）；（在浓度和体积相同条件下）；果胶酶最适温度、果胶酶最适温度、pHpH以及果胶酶最适用以及果胶酶最适用量。量。5、结果分析与评价、结果分析与评价第76页（一）普通洗衣粉（一）普通洗衣粉一、基础知识一、基础知识 表面活性剂，水软化剂，碱剂，漂白剂等表面活性剂，水软化剂，碱剂，漂白剂等成份成份，有洗衣粉中还含有增白剂，香精和色素，有洗衣粉中还含有增白剂，香精和色素，以及填充剂等。以及填充剂等。1 1、洗衣粉主要成份：、洗衣粉主要成份：