Tspan1通过诱导细胞自...利铂诱导的结直肠癌细胞凋亡_李孝平.pdf

实用医学杂志2023年第39卷第9期The Journal of Practical Medicine2023 Vol.39 No.9doi：10.3969/j.issn.10065725.2023.09.002项目基金：武汉市医学科研项目（编号：WX20D26）通信作者：李伟Email：Tspan1通过诱导细胞自噬拮抗奥沙利铂诱导的结直肠癌细胞凋亡李孝平周红见高芳芳李伟武汉市第三医院肝胆胰甲状腺胃肠外科（武汉 430047）【摘要】目的探讨四次跨膜蛋白 1（Tspan1）过表达对奥沙利铂（OXA）诱导的人结直肠癌细胞系HCT116细胞凋亡的影响并分析其可能作用机制。方法将Tspan1过表达质粒及其阴性对照空载质粒分别转染至 HCT116 细胞中，qRTPCR 和 Western blot 法检测胞中 Tspan1 mRNA 及其蛋白表达水平。采用14.15 g/mL OXA或联合5 mmol/L自噬抑制剂3MA干预转染后HCT116细胞，MTT检测细胞增殖活性；流式细胞术检测细胞凋亡水平；免疫荧光检测细胞中LC3B蛋白表达情况；Western blot法检测细胞中自噬相关蛋白 LC3、Beclin1 和 p62 蛋白表达水平。结果Tspan1 过表达可显著上调 HCT116 细胞中 Tspan1mRNA和蛋白表达水平，降低HCT116细胞对OXA的敏感性，抑制OXA诱导的HCT116细胞凋亡，并增强细胞中LC3B蛋白荧光强度，上调细胞中LC3II/LC3I比值及Beclin1蛋白表达水平，下调p62蛋白表达水平。然而，联合3MA处理可逆转Tspan1过表达对OXA诱导HCT116细胞凋亡的抑制作用，提高细胞对OXA的敏感性。结论Tspan1过表达可拮抗OXA诱导的HCT116细胞凋亡，其机制可能是通过诱导细胞自噬来实现的。【关键词】结直肠癌；四次跨膜蛋白1；奥沙利铂；自噬；凋亡【中图分类号】R735.34Tspan1 antagonizes oxaliplatininduced apoptosis in colorectal cancer cells by inducing cellular autophagyLI Xiaoping，ZHOU Hongjian，GAO Fangfang，LI Wei.Department of Hepatobiliary Pancreatic Thyroid Gastrointestinal Surgery，Wuhan 430074，ChinaCorresponding author：LI WeiEmail：【Abstract】ObjectiveTo investigate the effect of tetraspanin 1（Tspan1）overexpression on oxaliplatin（OXA）induced apoptosis in human colorectal cancer cell line HCT116 and to analyze its possible mechanism ofaction.MethodsHCT116 cells were transfected with Tspan1 overexpression plasmid and its negative control vector plasmid.The expression levels of Tspan1 mRNA and protein were detected by qRTPCR and Western blot.Thetransfected HCT116 cells were treated with 14.15 g/mL OXA or combined with 5 mmol/L autophagy inhibitor 3MA.MTT assay was used to detect cell proliferation.Flow cytometry was used to detect cell apoptosis.The expression of LC3B protein was detected by immunofluorescence.The expression levels of autophagyrelated proteins LC3，Beclin1 and P62 were detected by Western blot.ResultsOverexpression of Tspan1 significantly upregulatedTspan1 mRNA and protein expression levels in HCT116 cells，reduced the sensitivity of HCT116 cells to OXA，inhibited OXAinduced apoptosis of HCT116 cells，and enhanced the fluorescence intensity of LC3B protein，upregulated the protein expression level of Beclin1 and the ratio of LC3II/LC3I，downregulated the protein expressionlevel of p62，and antagonized the induction of apoptosis by OXA.However，combined treatment with 3MA reversed the inhibitory effect of Tspan1 overexpression on OXAinduced apoptosis of HCT116 cells，and increasedthe sensitivity of cells to OXA.ConclusionOverexpression of Tspan1 antagonizes OXAinduced apoptosis inHCT116 cells by a mechanism that may be mediated through the induction of cellular autophagy.【Key words】colorectal cancer；tetraspanin 1；oxaliplatin；autophagy；apoptosis基 础 研 究结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是全球最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和病死率逐年增加，目前已成为我国患病率第二高的恶性肿瘤，对我国居民的生命健康造成了日益严重的影响13。目前，奥沙利铂（oxaliplatin，OXA）作为铂类化疗药的一种，常用于临床治疗CRC，但同时OXA的长期使用会导致肿瘤产生耐药性4。因此，研究肿瘤化疗耐药的机制意义重大。肿瘤耐药性的产生是一个复杂的过程，往往与细胞功能异常有关，如细胞自噬5。细胞自噬水平的变化不仅影响着肿瘤增1072实用医学杂志2023年第39卷第9期The Journal of Practical Medicine2023 Vol.39 No.9殖、转移以及凋亡等进程67，而且自噬水平升高可增强肿瘤细胞对化疗药物的耐受性，从而降低化疗药物的药效89。四次跨膜蛋白1（Tetraspanin1，Tspan1）属于四聚体蛋白，其表达水平与多种肿瘤发生发展关系密切1011。WU 等12研究发现，Tspan1 在乳腺癌组织和细胞系中均高度表达，敲低Tspan1表达可抑制乳腺癌细胞生长和转移。此外，已有研究表明，Tspan1在CRC组织中高表达，并与患者远端转移、淋巴结转移、血管浸润、TNM分期等病理特征显著相关13。然而，Tspan1 表达水平与CRC细胞自噬以及化疗耐药的关系目前尚未见报道。因此，为探讨Tspan1对CRC细胞自噬和化疗耐药的影响，本研究以化疗药物OXA联合自噬抑制剂3甲基腺嘌呤（3methyladenine，3MA）体外干预转染Tspan1过表达质粒后的人结直肠癌HCT116细胞，探究Tspan1高表达水平在化疗药物OXA 干预下对细胞自噬和凋亡的影响，以期为CRC的治疗提供新的方向。1材料与方法1.1材料人结直肠癌细胞系HCT116购自中国典型培养物保藏中心细胞库。McCOYs 5A培养基、Opti MEM培养基、优质胎牛血清、胰蛋白酶购自美国Gibco公司；Tspan1基因过表达质粒（oeTspan1）及其阴性对照空载质粒（Vector）由上海和元生物技术有限公司提供；LipofectamineTM3000转染试剂购自美国 Thermo 公司；OXA、3MA 购自美国 MCE公司；Cell Counting Kit8（CCK8试剂盒）、AnnexinVFITC细胞凋亡检测试剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；LC3B抗体购自美国CST公司；LC3抗体、Beclin1抗体、p62抗体和GAPDH抗体购自美国Affinity 公司；异硫氰酸荧光素（fluoresceinisothiocyanate，FITC）标记的山羊抗小鼠 IgG 二抗、辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP）标记的山羊抗兔或小鼠IgG二抗购自武汉三鹰生物技术有限公司。1.2方法1.2.1细胞培养HCT116 细胞使用含 10%胎牛血清的 McCOYs 5A 培养基培养，置于 37、5%CO2恒温恒湿培养箱中，细胞密度生长至80%以上时，弃培养基，加入 PBS 清洗，使用胰蛋白酶消化传代，待细胞扩增完成，收集对数期细胞用于实验。1.2.2细胞转染收集对数期HCT116细胞，用新鲜完全培养基重悬细胞并调整细胞浓度至2 105个/mL，细胞悬液以2 mL/孔接种至6孔板中，置于培养箱中过夜。实验分为 3 组：空白对照（blank）组，不作任何处理；空载（Vector）组，转染阴性对照空载质粒；Tspan1 过表达（oeTspan1）组，转染Tspan1过表达质粒。oeTspan1和Vector质粒使用LipofectamineTM3000 联合 Opti MEM 培养基转入细胞，4 h后更换新鲜培养基，48 h后收集细胞，采用下述qRTPCR和Western blot法检测Tspan1 mRNA和蛋白表达水平。1.2.3MTT 检测细胞增殖活性取对数生长期各组转染后的HCT116细胞，用新鲜完全培养基重悬细胞并调整细胞浓度至2 104个/mL，细胞悬液以 100 L/孔接种至 96 孔板中，置于培养箱中过夜，加入不同浓度（0、7.81、15.62、31.24、62.5、125、250 g/mL）OXA，另设空白调零组（不接种细胞），孵育48 h。提前4 h向每孔中加入20 L MTT工作液（5 g/L），置于培养箱中避光继续培养。孵育时间结束后，弃培养液，每孔加入 150 L 二甲基亚砜，置于低速摇床上避光振荡10 min，采用酶标仪检测490 nm处吸光度（OD）值，计算细胞增殖活性和 IC50值。细胞增殖活性=（OD 实验组OD 调零组）/（OD对照组OD调零组）100%。1.2.4实验分组及处理根据实验需要进行如下分组和处理，即（1）Vector组：将Vector质粒转染至HCT116细胞中，不经任何药物干预；（2）oeTspan1组：将oeTspan1质粒转染至HCT116细胞中，不经任何药物干预；（3）Vector+OXA 组：将 Vector 质粒转染至 HCT116 细胞中，并采用 14.15 g/mL OXA处理 48 h；（4）oeTspan1+OXA 组：将 oeTspan1 质粒转染至 HCT116 细胞中，并采用 14.15 g/mLOXA处理48 h；（5）Vector+3MA+OXA组：将Vector质粒转染至 HCT116 细胞中，先采用 5 mmol/L 3MA预处理2 h，再采用14.15 g/mL OXA处理48 h；（6）oeTspan1+3MA+OXA 组：将oeTspan1质粒转染至 HCT116 细胞中，先采用 5 mmol/L 3MA 预处理2 h，再采用14.15 g/mL OXA处理48 h。1.2.5流式细胞术检测细胞凋亡水平按照1.2.4中进行实验分组和药物干预，采用0.25%胰酶消化细胞 1 min，收集细胞，加入 500 L PBS 重悬细胞并调整细胞浓度至2 105个/mL，加入5 L Annexin VFITC工作液和5 L 碘化丙啶工作液，避光孵育15 min，采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。1.2.6免疫荧光检测细胞中LC3B表达情况按1.2.4 进行实验分组和药物干预，弃培养液，加入4%多聚甲醛溶液室温固定10 min，PBS洗3次，加入 0.2%Triton X100 室温孵育 10 min，PBS 洗 3次，加入5%山羊血清室温孵育1 h，加入LC3B一抗（1200稀释），4 过夜，PBS洗3次，加入FITC标记的山羊抗兔IgG二抗，室温避光孵育1 h，PBS1073实用医学杂志2023年第39卷第9期The Journal of Practical Medicine2023 Vol.39 No.9洗3次，加入含DPAI的抗荧光衰减封片剂，室温避光孵育10 min，用荧光显微镜观察并拍照记录LC3B表达情况，并使用软件Imagepro plus分析照片光密度值并计算荧光强度。荧光强度=光密度值/荧光面积。1.2.7qRTPCR 检测细胞中Tspan1 mRNA 表达水平收集 1.2.2 中经转染后的各组 HCT116 细胞，加入裂解液提取总 RNA，酶标仪鉴定 RNA 纯度，采用逆转录试剂盒将RNA逆转录成cDNA，采用 PCR 检测试剂盒进行 qRTPCR 反应。以 GAPDH 为内参，采用 2-Ct法检测转染后各组细胞中Tspan1 mRNA表达水平，引物序列见表1。1.2.8Western blot 检测细胞中 Tspan1、LC3、Beclin1 和 p62 蛋白表达水平按 1.2.2 和 1.2.4 项下实验分组处理细胞，处理结束后离心收集细胞，加入含蛋白酶抑制剂的 RIPA 裂解液提取总蛋白。采用BCA蛋白浓度检测试剂盒测定总蛋白含量，取40 g蛋白溶液按4 1的比例加入5还原型蛋白上样缓冲液，沸水浴变性 15 min，进行 SDSPAGE电泳，转膜至提前用甲醇活化后的PVDF膜上，5%脱脂奶粉封闭 1 h。加入 Tspan1 抗体（11 000稀释）、LC3抗体（1 1 000稀释）、Beclin1抗体（1 1 000 稀释）、p62 抗体（1 1 000 稀释）和GAPDH 抗体（1 5 000 稀释），4 孵育过夜，使用PBST清洗3次，加入HPR标记的山羊抗兔或小鼠IgG二抗（1 2 000稀释），室温孵育1 h，PBST清洗3次，加入ECL显影液，化学发光成像仪曝光显影，使用Image J 软件分析蛋白条带值。以GAPDH 为内参，计算 Tspan1、LC3、Beclin1 和 p62 蛋白相对表达水平。目的蛋白表达水平=目的蛋白条带值/GAPDH条带值。1.3统计学方法采用 SPSS 26.0 软件进行统计分析，计量数据以（xs）表示。两组间比较采用独立样本t检验；多组间比较采用单因素方差分析，事后组内两两比较采用LSDt检验。以P 0.05）；与 Vector 组比较，oeTspan1 组细胞中 Tspan1 表达水平显著升高（P 0.05）；与Vector组比较，oeTspan1组细胞中Tspan1表达水平显著升高（P 0.05）。表1引物序列Tab.1Primer sequences项目Tspan1GAPDH序列（53）F：ACCAAAAAGTAGAGGGTTGCTR：GTGCCTCTTCACAGTTCCCAF：ATGGGCAGCCGTTAGGAAAGR：AGGAAAAGCATCACCCGGAG注：A，qRTPCR检测HCT116细胞中Tspan1 mRNA表达水平；B，Western blot 检测HCT116细胞中Tspan1蛋白表达水平。与blank组或Vector组比较，*P 0.05）；与 Vector 组比较，e1074实用医学杂志2023年第39卷第9期The Journal of Practical Medicine2023 Vol.39 No.9Tspan1组细胞增殖活性显著升高（P 0.05），提示Tspan1 过表达可促进 HCT116 细胞增殖。不同浓度（0、7.81、15.62、31.24、62.5、125、250 g/mL）OXA 处理细胞 48 h 后，blank 组、Vector 组和 oeTspan1 组细胞增殖活性均显著降低（P 0.05），IC50值分别为（19.760.58）、（19.740.63）、（52.562.21）g/mL；与 blank 组比较，Vector 组细胞 IC50值无显著变化；与Vector组比较，eTspan1组细胞IC50值显著升高，提示 Tspan1 过表达可拮抗 OXA 对HCT116 细胞的增殖抑制作用，选择 blank 组细胞IC40值14.15 g/mL作为后续实验干预浓度。2.3Tspan1 过表达对 OXA 诱导 HCT116 细胞凋亡的影响流式凋亡结果（图3）显示，与Vector组比较，oeTspan1 组细胞凋亡率显著降低（P 0.05），Vector+OXA 组细胞凋亡率显著升高（P 0.05）；与Vector+OXA组比较，oeTspan1+OXA组细胞凋亡率降低（P 0.05）。注：与Vector组比较，*P 0.05图2OXA对Tspan1过表达后HCT116细胞增殖活性的影响Fig.2Effect of OXA on proliferation activity of HCT116 cellsafter Tspan1 overexpression07.8115.6231.2462.5125250OXA（g/mL）1.51.00.50.0OD值blank组Vector组oeTspan1组*注：与Vector 组比较，*P 0.05；与Vector+OXA组比较，#P 0.05图3OXA对Tspan1过表达后HCT116细胞凋亡的影响Fig.3Effect of OXA on apoptosis of HCT116 cells after Tspan1 overexpressionoeTspan1+OXA组Vector+OXA组oeTspan1组Vector组*#50403020100凋亡率/%oeTspan1组Vector组oeTspan1+OXA组Vector+OXA组102.4104105106.5FITCH106.2105104103102101.1PIH102.4104105106.5FITCH106.2105104103102101.1PIH102.4104105106.5FITCH106.2105104103102101.1PIH102.4104105106.5FITCH106.2105104103102101.1PIHFITCPI2.4Tspan1 过表达对 OXA 暴露下 HCT116 细胞中自噬相关蛋白表达的影响免疫荧光结果（图4A）显示，与 Vector 组比较，oeTspan1 组、Vector+OXA组细胞中LC3B蛋白荧光强度显著增强（P 0.05）；与Vector+OXA组比较，oeTspan1+OXA组细胞 LC3B 蛋白荧光强度也显著增强（P 0.05）。Western blot结果（图4B）显示，与Vector组比较，oeTspan1组、Vector+OXA组细胞中LC3/LC3蛋白比值和 Beclin1 蛋白表达水平显著升高（P 0.05），p62 蛋白表达水平显著降低（P 0.05）；与Vector+OXA组比较，oeTspan1+OXA组细胞中LC3/LC3蛋白比值和 Beclin1 蛋白表达水平显著升高（P 0.05），p62 蛋白表达水平显著降低（P 0.05）。提示 Tspan1 过表达能提高 OXA 暴露下HCT116细胞自噬水平。2.53MA联合OXA对Tspan1过表达后HCT116细胞自噬和凋亡的影响流式凋亡结果（图5）所示，与Vector+OXA组比较，oeTspan1+OXA组细胞凋亡率显著降低（P 0.05），Vector+3MA+OXA组细胞凋亡率显著升高（P 0.05）；与 oeTspan1+OXA组比较，oeTspan1+3MA+OXA组细胞凋亡率显著升高。免疫荧光结果（图6A）显示，与Vector+OXA组比较，oeTspan1+OXA组细胞中LC3B荧光强度显著增强（P 0.05），Vector+3MA+OXA组细胞中 LC3B 荧光强度显著减弱（P 0.05）；与 oeTspan1+OXA 组比较，oeTspan1+3MA+OXA 组细胞中 LC3B 荧光强度显著减弱（P 0.05）。Western blot结果（图6B）显示，与Vector+OXA 组比较，1075实用医学杂志2023年第39卷第9期The Journal of Practical Medicine2023 Vol.39 No.9oeTspan1+OXA组细胞中LC3/LC3蛋白比值和Beclin1蛋白表达水平显著升高（P 0.05），p62蛋白表达水平显著降低（P 0.05）；Vector+3MA+OXA 组细胞中 LC3/LC3蛋白比值和 Beclin1蛋白表达水平显著降低（P 0.05），p62蛋白表达水平显著升高（P 0.05）。与oeTspan1+OXA组比较，oeTspan1+3MA+OXA组细胞中LC3/LC3蛋白比值和 Beclin1 蛋白表达水平显著降低（P 0.05），p62蛋白表达水平显著升高（P 0.05）。提示 3MA 可降低 HCT116 细胞自噬水平，并增强OXA对Tspan1过表达细胞的敏感性。3讨论目前临床多采用化疗药物治疗 CRC，但耐药性的产生使得治疗效果不够理想。近年来研究表明，部分基因的异常表达是肿瘤发生化疗耐药的根本原因1415。因此，明确肿瘤的耐药性分子机制十分重要。Tspan1是跨膜区域蛋白超家族的成员之一，其表达异常与肿瘤细胞免疫逃避、增殖异常、易转移等生理进程密切相关，并且其已经作为一种新的肿瘤标记物被报道1617。此外，Tspan1是自噬体成熟的一个新型正向调控因子，通过两个保守的LIR序列与LC3直接结合，促进自噬小体的成熟，提高自噬流水平。ZHOU 等18研究表明，Tspan1 在胰腺癌中表达上调，靶向抑制其表达可降低癌细胞自噬水平和增殖能力。本研究实验结果发现，OXA 可促进 HCT116 细胞自噬和凋亡；Tspan1 过表达可促进 HCT116 细胞增殖和自噬并抑制细胞凋亡，降低其对 OXA 的敏感性。提示Tspan1可能参与HCT116细胞对OXA的耐药过程，其耐药性是否因Tspan1诱导细胞自噬导致值得进一步研究。细胞自噬是真核生物中进化保守的对细胞内物质进行周转的重要过程。自噬是一个紧密协调的过程，一方面可为细胞清除和回收错误折叠的蛋白质、受损或老化的细胞器以及不再需要的大分子等，为细胞代谢提供能量并维持细胞稳态；另一方面当细胞处于应激（如内质网应激、氧化应激和药物干预等）过剩状态时，细胞通过自噬方式“自杀”诱导细胞凋亡1920。研究发现，自噬与癌症发展关系密切，在肿瘤发展初期，自噬可以通过消除受损细胞器和回收正常细胞中的降解产物来oeTspan1+OXA组Vector+OXA组oeTspan1组Vector组*#6040200平均荧光强度oeTspan1+OXA组Vector+OXA组oeTspan1组Vector组DAPILC3BMergeoeTspan1+OXA组Vector+OXA组oeTspan1组Vector组LC3LC3Beclin1p62GAPDHoeTspan1+OXA组Vector+OXA组oeTspan1组Vector组*#2.52.01.51.00.50.0蛋白相对表达水平*#*#LC3/LC3Beclin1p62AB注：A，免疫荧光检测细胞中LC3B表达；B，Western blot检测细胞中自噬相关蛋白表达。与Vector 组比较，*P 0.05；与Vector+OXA组比较，#P 0.05图4OXA对Tspan1过表达后HCT116细胞中自噬相关蛋白表达的影响Fig.4Effect of OXA on the expression of autophagy related proteins in HCT116 cells after Tspan1 overexpression1076实用医学杂志2023年第39卷第9期The Journal of Practical Medicine2023 Vol.39 No.9注：A，免疫荧光检测细胞中LC3表达；B，Western blot检测细胞中自噬相关蛋白表达。与Vector+OXA组比较，*P 0.05；与oeTspan1+OXA组比较，#P 0.05图63MA联合OXA对Tspan1过表达后HCT116细胞自噬的影响Fig.6Effect of 3MA combined with OXA on autophagy of HCT116 cells after Tspan1 overexpressionoeTspan1+3-MA+OXA组LC3LC3GAPDH2.52.01.51.00.50.0LC3/LC3比值Vector+3-MA+OXA组oeTspan1+OXA组Vector+OXA组#*oeTspan1+3-MA+OXA组Vector+3-MA+OXA组oeTspan1+OXA组Vector+OXA组oeTspan1+3-MA+OXA组6040200平均荧光强度Vector+3-MA+OXA组oeTspan1+OXA组Vector+OXA组#*oeTspan1+3-MA+OXA组Vector+3-MA+OXA组oeTspan1+OXA组Vector+OXA组DAPILC3BMergeAB注：与Vector+OXA 组比较，*P 0.05；与oeTspan1+OXA组比较，#P 0.05图53MA联合OXA对Tspan1过表达后HCT116细胞凋亡的影响Fig.5Effect of 3MA combined with OXA on apoptosis of HCT116 cells after Tspan1 overexpressionoeTspan1+3-MA+OXA组oeTspan1+OXA组*#6040200凋亡率（%）oeTspan1+OXA组Vector+OXA组oeTspan1+3-MA+OXA组Vector+3-MA+OXA组102.4104105106.5FITCH106.2105104103102101.1PIH102.4104105106.5FITCH106.2105104103102101.1PIH102.4104105106.5FITCH106.2105104103102101.1PIH102.4104105106.5FITCH106.2105104103102101.1PIHFITCPIVector+3-MA+OXA组Vector+OXA组1077实用医学杂志2023年第39卷第9期The Journal of Practical Medicine2023 Vol.39 No.9发挥抗癌作用；在肿瘤发展阶段，过度的自噬将会抑制损伤细胞凋亡，同时为肿瘤细胞提供丰富的营养和能量，促进肿瘤细胞生存及耐药；并且肿瘤细胞在受到化疗药物刺激时，自噬相关的信号通路会被激活，提高自噬水平，促进药物分子分解，使得肿瘤细胞的药物耐受性和生存能力得到增强21。因此，自噬与肿瘤治疗的复杂关系值得进一步研究。本研究就证明降低化疗药物 OXA 诱导的HCT116 细胞自噬水平，可以促进细胞凋亡，而Tspan1 过表达导致的细胞自噬水平升高会拮抗OXA对细胞凋亡的促进作用，降低HCT116细胞对OXA的敏感性。实验结果发现，OXA处理可抑制HCT116 细胞增殖，促进细胞自噬和凋亡；Tspan1过表达可进一步提高HCT116细胞自噬水平，但可拮抗OXA对细胞增殖抑制和凋亡促进的作用，提示细胞过度自噬后能提升其对化疗药物的敏感性，促进细胞存活。进一步研究结果发现，联合自噬抑制剂 3MA 处理后，Tspan1 过表达的 HCT116细胞凋亡水平显著升高，自噬相关蛋白LC3、Beclin1表达水平显著上调，p62表达水平显著下调，提示降低Tspan1过表达诱导的自噬水平可促进细胞凋亡，增强OXA对细胞的敏感性；Tspan1过表达可拮抗 OXA 诱导的 HCT116 细胞凋亡，其机制可能是通过诱导细胞自噬来实现的。由此可见，通过调节 Tspan1 表达水平能够调控 HCT116 细胞自噬水平，进而影响其对化疗药物的敏感性，这对CRC的治疗会提供较大的帮助。综上所述，Tspan1 可促进 HCT116 细胞存活、自噬并抑制细胞凋亡，并可通过调控细胞自噬水平拮抗OXA诱导的CRC细胞凋亡作用，降低其对OXA的敏感性，进而促进CRC化疗耐药。本研究结果可为CRC临床治疗提供新的思路，但仍需更多的研究进行探讨和验证。【Author contributions】LI Xiaoping performed the experimentsand wrote the article.ZHOU Jianhong performed the experiments.GAOFangfang revised the article.LI Wei designed the study and reviewedthe article.All authors read and approved the final manuscript as submitted.参考文献1LI N，LU B，LUO C，et al.Incidence，mortality，survival，riskfactor and screening of colorectal cancer：A comparison amongChina，Europe，and northern America J.Cancer Lett，2021，522：255268.2FENG R M，ZONG Y N，CAO S M，et al.Current cancer situation in China：good or bad news from the 2018 Global CancerStatistics？J.Cancer Commun（Lond），2019，39（1）：22.3马静，滕圣敏，李苓.miR1283p靶向调控ZEB1表达对结肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响 J.实用医学杂志，2021，37（17）：21872193.4延飞飞，李宏武.miR1405p通过调节自噬影响结直肠癌细胞对奥沙利铂的敏感性 J.实用医学杂志，2021，37（23）：29842988.5聂微，严芝强，成兴真，等.奥沙利铂通过自噬诱导胃癌细胞耐药的机制 J.实用医学杂志，2022，38（7）：828835.6LI X，HE S，MA 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