药典沉降菌检测操作作业规程.doc

题目：干净区（室）沉降菌监测原则操作规程
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颁发部门：质量部
起草： 日期： 月 日
修订日期： 年 月 日
审核： 日期： 月 日
生效日期： 月 日
批准： 日期： 月 日
发放份数：
版次：第1版
分发部门：质量部、中心化验室
1.目：阐述干净室空气中沉降菌检测操作规程，保证药物质量，防止生产环境对产品污染。
2.范畴：合用于我司干净区(室)沉降菌监测。
3.责任：沉降菌检测员。
4.内容：
4.1基本概念：
4.1.1菌落:细菌培养后,由一种或几种细菌繁殖而形成一细菌集落,简称CFU.通惯用个数表达。
4.1.2沉降菌：用GB/T16292-提及办法收集空气中活性微生物粒子，通过专门培养基在适当生长条件下繁殖到可见菌落数。
4.1.3沉降菌菌落数:规定期间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌数目，以个/皿表达。
4.2测试原理:本测试办法运用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适当条件下让其繁殖到可见菌落数，以平板培养皿中菌落数来评估干净环境内活微生物数，并以此来评估干净区干净度。
4.3测试办法：
4.3.1使用仪器设备和培养基:
高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱:必要定期对培养箱温度计进行检定。
培养皿:普通采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。
培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72
小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好培养基平皿应在2-8℃坏境中存储。
4.3.2测试时间:
对单向流，如A级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运营不少于10分钟后开始。
对非单向流，如B级、C级、D级以上净化房间，测试应在净化空调系统正常运营不少于30分钟开始。
4.3.3采样点数目及其布置:
至少采样点数目:沉降菌至少采样点数可按表1拟定。在满足至少测点数同步，不适当满足至少培养皿数，见表2
表1 至少采样点数目
面积（m2）
干净度级别
A、B级
C级
D级
＜10
2-3
2
2
≥10-＜20
4
2
2
≥20-＜40
8
2
2
≥40-＜100
16
4
2
≥100-＜200
40
10
3
注：表中面积，对于单向流干净室，指是送风面积，对于非单向流干净室，指是房间面积。

表2 至少培养皿数
干净度级别
所需φ90mm培养皿数（以沉降4h计）
A
14
B
2
C
2
D
2
采样点布置:
除受干净区设备限制外，取样点应在整个干净区均匀布置。
在寻常监控时，那些与产品相邻近区域，以及也许与产品直接接触空气及设备附近应考虑增长取样点和取样次数(与产品非接触区相比，这些区域应视为核心区):人员活动频繁或人员较集中区域也应视为核心区，需加强监控。
取样点一股布置在趾离地面0.8-1.0m之间或操作平台高度。
取样时，取样没备会对气流产生干扰，取样时应避免也许对气流组织干扰。
尽量避免在回风口附近取样(距离lm以上)，且测试人员应在取样口下风侧，并尽量少走动。

4.3.4测试环节：
4.3.4.1采样办法:
用无菌容器(如不锈钢储槽)将预先培养培养皿(无菌平皿)带至待测区，将培养皿取出，放置在预先拟定取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上，盖后倒置。检测时记下培养皿打开起始时间和结束时间。
4.3.4.2培养：
所有采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。32℃培养，时间为72小时。
每批培养基应有对照实验，检查培养基自身与否污染，可每批选定三个培养皿做对照培养。
4.3.4.3菌落计数:
用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，与否有漏掉。若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可辨别时仍以2个或2个以上计数。
4.3.5注意事项：
测试用品要做灭菌解决，以保证测试可靠性、对的性。
采用一切办法防止人为对样本污染。
对培养基、培养条件及其她参数作详细记录。
由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时普通用透射光于培养皿背面或正面仔细观测，不要漏计培养皿边沿生长菌落，必要时用显微镜鉴别。
采样前应仔细检查每个培养皿质量，如发现变质、破损或污染应剔除。
测试状态:
沉降菌测试前，被测试干净区温湿度须达到规定规定，静压差必要控制在规定值内。
沉降菌测试前，被测试干净区己通过消毒。
测试状态有静态和动态两种，在空调系统验流时、长期停产恢复生产前、设施设备大修复产迈进行静态测试，在寻常监测时进行动态监测。
测试人员:测试人员必要穿戴符合环境级别工作服。静态测试时，室内测试人员不得多于2个人。
成果计算:
用计数办法得出各个培养皿菌落数。
平均菌落数汁算见下式:
计算公式：
ΣMi
M=
n
式中M为平均菌落数（CFU）
Mi表达1，2，3，……n号平皿菌落数；n表达平皿总数。
6．原则：
干净度级别
沉降菌平均菌落数（CFU/皿）以4h计
A
＜1
B
5
C
50
D
100
7. 成果评估:
用平均菌落数判断干净室空气中微生物。
干净区内平均菌落数必要符合所选定评估原则。
若某干净区菌落数超过评估原则，则必要对此区域先行消毒，然后重新测试两次，测试成果必要合格。
8.偏差纠正
一旦发现空气微生物监测成果超标，普通可以采用如下行动进行调查和评估:
回顾近来一次悬浮粒了数检测成果;
回顾近来一次表面微生物检测成果;
检查人员更衣程序与否对的;
检查空调系统运营状况;
检查操作人员行为对的性;
必要时空调系统需要重新验证。

采样点布置图：