液质联用操作专项规程.docx

液质联用仪操作规程第1页 共8 页SOPI-Xevo-TQSFSIDC1适用范围本设备配置ACQUITY UPLC液相色谱仪、TQS MS/MS 质谱仪，适适用于食品、药品中多种有机物定性、定量分析，是一个含有高灵敏度检测仪器，仪器由主机、计算机和数据处理软件等组成。2. 职责2.1 操作人员根据本规程操作仪器，认真填写试验使用统计。2.2 保管人员负责对仪器进行定时维护和保养。2.3 科室责任人负责监督检验规程实施。3操作程序日常操作步骤：准备UPLC 设置样品表 运行样品定量打印汇报。 注：假如一个星期内不运行样品请不要关质谱仪，使其保持真空。 建立新方法和project操作步骤： 准备UPLC 建立新project 用标准品调谐编辑质谱方法编辑UPLC方法设置样品表运行样品定量 打印汇报。3.1开机： 3.1.1 根本开机次序（仪器已关闭） 确定MS及其它仪器电源电缆已连接 ，开氮气发生器、开氩气，小表 等候windows正常开启 电脑界面右下角网络图标红叉。打开UPLC自动进样器电源，等到电脑界面右下角网络图标出现感叹号！。 打开UPLC泵电源，等约30s或是有响声。打开质谱电源 ，等候5min，离子源透视镜里面亮。 打开Masslynx软件，masslynx主界面 -左侧instrument-Mass tune-界面菜单栏vacuum-pump 一样界面左侧偏上diagnostics-vacuum-analyser MS1 turbo speed%要在5分钟内升到80。最少抽真空4个小时 查看真空状态主界面mass console-界面左侧xevo tq ms detector加号展开-ms display 碰撞室真空度 达液质联用仪操作规程第2页 共 8页SOPI-Xevo-TQSFSIDC到 7.x e-5mbar 。3.1.2 日常开机次序（仪器未关闭） 开氮气发生器、开氩气，小表 准备样品 灌注二元泵 灌注自动进样器 建立液相方法 平衡液相3.3.1. 准备流动相 用0.22um膜过滤缓冲液，全部缓冲液和超纯水全部要新配制，超纯水和缓冲液使用不得超出二天，缓冲盐一定要是可挥发，而且浓度不要大于10mM。3.3.2.样品要求 全部样品全部要用流动相初始梯度百分比溶剂来溶解，并用0.22um膜过滤。 3.3.3灌注二元泵在Masslynx 主界面，单击MS Console,进入UPLC交互显示界面， 点击左栏Acquity UPLC System Control Start Up System ，单击QSM，选择需要用到流动相位置，如A 和B，选择seal wash，时间设为3分钟。单击SM，选择 Strong Wash 5 cycles , Sample syringe 20单击 Equilibrate to Method，将流速设为0 ,单击 Start 开始灌注. 时间大约为9min 左右。设定流速，平衡液相 在Masslynx主界面，单击Inlet Method 图标 ，打开液相方法编辑窗口，单击status ACQUITY Additional Status ，进入液相控制台，单击A 或B或流速位置，出现流速、百分比设定对话框, 设定液相流速和百分比，单击对勾，开始平衡液相，假如后面要做调谐，可设定流速0.2ml/min,有机相和水相百分比为50:50。液质联用仪操作规程第3页 共 8页SOPI-Xevo-TQSFSIDC3.4 准备质谱 3.4.1. 计算化合物单同位素质量数 Masslynx主界面 单击Tools Molecular Weight Calculator, 输入化合物分子式（大写-注意Cl、Br等正确输入方法） ,注意选单同位素Monoiso ,Ion Mode:离子化模式，+ve 正离子，-ve 负离子 ,单击Calculate。3.4.2 用Intellistart进行自动调谐 在Masslynx 主界面单击MS Tune图标，打开调谐窗口， 单击 Ion Mode ES+ 或 ES- ，单击 API Gas 图标 打开氮气， 单击 打开高压 选择MS Mode 图标 ，设定液相流速0.2ml/min, 水：乙腈百分比为50:50。 把标准品调谐液放入质谱仪塑料瓶位置处A（或B或C）号位(注:浓度在200ppb左右)单击Fluidics ,选择Reservoir为A ,Flow State 为LC 模式，点击Purge 图标。Purge 结束后，将Flow State 改为Combine 模式，设定Function 为MS1 scan， Mass为计算出化合物质量数，span 为5，点击进样 ，开始进样，直到离子响应比较稳定。保留调谐文件：File Save As至已建项目下。在Masslynx主界面，选择Ms Console Xevo TQ MS Detector 选择Intellistart ，选择 Sample Tune and Develop Method ，ES+ 单击 Start 图标 ，出现Intellistart 自动调谐编辑窗口，选择Switch to Advancedmode ，输入Compound name (化合物名称) ，Molecular Mass/Formula (分子量或分子式) Adduct A+（ M+H +， 选择 Load Existing Sample Tune ,在Sample Tune Name 方框后“。”处调用开始保留调谐文件，在Develop MRM Method 前方框打钩，并在方框出输入MRM 方法文件名 ，路径为已建项目下。在Print Report 前方框打钩，Cone Voltage ，Collision Energy 处为默认值，Fluidics 下Flow Path 选择Combined 模式，Sample Reservoir 和Sample Flow Rate 参数和Fuldics 下Combined 模式下进样参数保持一致。单击右边Start 开始自动调谐。调谐成功，会有绿勾出现 ，查看intellistart 汇报液质联用仪操作规程第4页 共 8页SOPI-Xevo-TQSFSIDC3.4.3 查看intellistart 中自动生成质谱方法： 从MassLynx 主窗口，单击 MS Method，出现MS Method 编辑对话框 , 选择File open, 选择Intellistart 中保留质谱方法文件，双击方法,如发觉自动调谐生产质谱方法中部分参数有误，则能够在Channels 窗口手动修改参数，填写 relentinon window 中end时间 ，此时间必需和液相色谱方法运行时间保持一致，选择Auto Dwell,单击OK，点击File Save As, 保留质谱方法文件。3.5建立液相方法 3.5.1编辑液相方法在液相方法编辑窗口，单击Inle t ，输入溶剂名称，run time 及梯度洗脱程序，梯度洗脱程序中最终阶段时间必需和run time 符合，单击OK, 选择File Save As 保留方法 ，单击 Load Method ，平衡液相。3.5.2 建立样品列表 在Masslynx 主窗口，选择 File New 建立一个空白表samplelist。输入文件名File Name ，样品信息 File Text ，双击 MS File ，选择质谱方法 ，双击Inlet File, 选择液相方法 ，在Bottle 中输入样品瓶位置 ，在 Inject Volume 中输入进样体积，可右键 Add, 增加样品表行数，保留样品表：File Save As 。3.6数据采集和处理 3.6.1. 选中要采集样品，单击Run Start ,选择Acquire Sample Data only,，单击OK 开始进样并采集 。3.6.2在采集过程中，可查看色谱图，点击Chromatogram窗口 ，点击Real-timeUpdate icon . 假如不能见整个TIC图，单击 Default Range 图标。 假如方法中包含多个通道，可经过Display Mass 查看假如方法中包含多个检测器或多个Function,可经过Display TIC 查看 3.6.3处理多个Function数据 假如质谱方法中有多个Function，如有三个Function，如想看第二个Function，MS Scan 数据。 液质联用仪操作规程第5页 共 8 页SOPI-Xevo-TQSFSIDC3.6.3.1 在色谱图窗口，点击 Display TIC，选中MS Scan ，选择 Add trace ，单击 OK。3.6.3.2如想查第二个Function, Daughter Scan 质谱图 ，在色谱图中，选择 Display TIC, 选择 ScanWaveDS Add trace ，单击 OK。3.6.3.3. 选择 Process Combine spectra. 分别用右键输入信号和本底噪音. 单击 OK. 得到 Daughter Scan质谱图，单击 Process Smooth ，单击 OK。3.7 数据处理-外标定量法 3.7.1在Masslynx 主页面单击Targetlynx/Edit method，出现定量方法编辑对话框，单击新建方法图标，新建一个定量方法。3.7.2单击Add new compound (添加新化合物)图标，添加一个新化合物。3.7.3单击菜单栏update,选中Quantitation Ion 和Compound Name（前面打勾）在Masslynx 主页面，打开中等偏下低浓度标准品色谱图，Display/Mass chromatogram选出要定量化合物离子对，通常强度高化合物用来做为定量离子，另一个离子对则作为确证离子，用鼠标右键在定量离子对色谱图上拉一下，则compound name, Acquisition Function Number, Quantification Trace, Predicted Retention Time和Retention Time window 将自动输入到定量方法中。注意：在色谱图上拉时候，要遵照两个标准，拉位置要以色谱峰峰尖左右对称，拉宽度要超出峰起点和终点。3.7.4单击工作曲线图标，在工作曲线设置页面，填入 Concentration Units:浓度单位，比如ng/ml, ug/kg，ppb, ppm等。 Concentration of Standard: Level 选择Conc.A。 Polynomial Type 选择 Linear. （可依据自己行业要求） Calibration Origin_选择exclude(排除原点)，include(包含原点)，force(强制过原点) Weithting Function(权重)_1/x （依据自己行业要求） Propagate Calibration Parameters_假如全部化合物均用相同工作曲线参数，选Yes 液质联用仪操作规程第6页 共 8 页SOPI-Xevo-TQSFSIDC3.7.5打开积分参数列表，选中Apex Track Enabled （打勾，YES），Integration Window Extent 输入2，选中Propagate Integration Parameters (打勾)，假如色谱峰并不是很对称色谱图，可先在色谱图上先设定参数，积分，好积分参数满意以后，process/integrate/copy ,在Targetlynx 方法中Edit/Past 就可将其粘贴到Targetlynx 方法中。提议用Apex Track 积分方法，Smooth 方法提议用smooth iteration 1,smooth width 2。反复上面过程，把其它多个化合物信息全部加入 ，保留方法：File/Save As, 保留到目前项目标MethDB 文件夹中，正确samplelist 表格模板，除了前面进样时选项之外，还要有sample type, ConA, 等选中要处理样品，单击Process Samples，出现下图对话框，确保选中,Integrate 、sample ，calibrate Standard， Quantify Sample,选择刚才编辑Targetlynx 方法，单击OK后，出现定量结果对话框。可依据自己需要，用鼠标右键，Chang Column Order 来增加或降低Summary中选项。 3.8关机程序 3.8.1日常关机： 3.8.1.1假如流动相中有缓冲盐必需先将缓冲盐换成水，灌注2分钟，流速设为0.2ml/min，80%水相，冲洗最少30分钟，换成80%有机相，冲洗最少20分钟，停流速，水相，冲洗最少30分钟，换成80%有机相，冲洗最少20分钟，停流速，柱温为室温。 3.8.1.2关质谱：主界面mass tune或电脑下面仪器图标-界面左侧偏上fluidics-flow state选择为waste、关氩气，mass tune界面或电脑下面仪器图标工具栏第6个 关高压mass tune界面右下角 等候去溶剂气温度降低至100度以下mass tune界面或电脑下面仪器图标左侧偏上。ES+source-temperature-desolvation 关氮气 ，点击氮气发生器开启开关。3.8.2根本关机 3.8.2.1 先完成日常关机 液质联用仪操作规程第7页 共 8 页SOPI-Xevo-TQSFSIDC3.8.2.2泄真空: tune page vacuum vent-yes 等候涡轮分子泵转速降到10以下 ，masslynx主界面 -左侧instrument-Mass tune-界面左侧偏上diagnostics-vacuum-source turbo speed%3.8.2.3退出软件，其它界面先退出，主界面最终退出 3.8.2.4关质谱电源 关全部UPLC电源，计算机电源 ，仪器三个电源次序无所谓，关氮气发生器，氩气。3.8.2.5 假如有UPS，关闭UPS电源，计算机电源。4 日常维护、保养及注意事项4.1 仪器室要保持整齐、洁净、无尘；配套设施布局合理。 4.2 仪器室温度应相对稳定，通常应控制在20-25，保持恒温；相对湿度最好为50-70%，室内应备有温度计和湿度计，通常采取空调和吸湿机调整温度和湿度。 4.3 气压过滤机械泵油 ，停止样品采集、停止流动相、关闭高压、关闭全部气流，关闭离子源内真空隔离阀。用一字镙丝刀顺时针方向拧开机械泵上Gas Ballast 阀四分之一圈，运行 30 分钟后再把 Gas Ballast 阀旋转到原来关闭位置。对于 ESI源，最少每星期做一次，对于APCI源，天天做一次。4.4 开高压之前一定要先开氮气，关氮气之前一定要先关高压。 4.5 ESI 离子化和溶剂亲密相关，在使用一些溶剂和添加物需要注意以下多个方面：三氟乙酸（TFA）多用于蛋白质和多肽分析，但对ESI离子化有抑制效应；三乙胺（TEA）在m/z 102处有较强M+H+峰，有可能会抑制一些碱性化合物在正离子ESI条件下离子化，也有可能会增强一些碱性化合物在负离子ESI条件下响应； 4.6 要避免使用非挥发性盐 (phosphate, borate, citrate, etc.)；表面活性剂、清洁剂和去污剂 (会抑制离子化)；和无机酸 (sulphuric acid, phosphoric acid etc.)等。 4.7 连接UPLC泵、色谱柱、注射泵和ESI探头时，要将仪器置于standby状液质联用仪操作规程第8页 共8页SOPI-Xevo-TQSFSIDC态。 4.8.当改变分辨率时候，仪器质量数也会有轻微偏移，所以在不一样分辨率条件下，应该做质量数校正。 4.9样品贮存在塑料离心管中，其中添加剂很轻易混入，尤其是被有机溶剂浸泡时间较长时，会产生干扰物信号。4.10工作站计算机不要安装和仪器操作无关软件，要常常清理计算机磁盘碎片，定时查杀病毒，定时备份试验数据。 4.11 仪器应定时检验，并有专员管理，负责维护保养及清洁。 4.12试验完成要清洗进样针、进样阀等，用过含酸流动相后，色谱柱、离子源全部要用甲醇/水冲洗，延长仪器寿命。 4.13 定时清洗样品锥孔：关闭隔断阀，取下样品锥孔，先用甲醇：水：甲酸（45：45：10）溶液超声清洗10分钟，然后在分别用超纯水和甲醇各溶液超声清洗10分钟，待晾干后再安装到仪器上。当灵敏度下降时，需要清洗Source、二级锥孔和六级杆。 4.14 定时（每星期）检验机械泵油状态，假如发觉浑浊、缺油等情况，或已经累积运行超出3000小时，要立即更换机械泵油。 5 支持性文件Waters Xevo-TQS液质联用仪使用手册。