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第十六章第十六章 糖糖类药物物总论 多糖多糖类药物物在抗凝抗凝、降血脂降血脂、提高机体免疫提高机体免疫和抗抗肿瘤瘤、抗抗辐射射面都具有显著药理作用理作用与疗效。多糖是非细胞毒物物质，在细胞内的存在方式有游离型与游离型与结合型合型两种。结合型多糖合型多糖有糖蛋白、糖蛋白、脂多糖脂多糖 1.第一第一节 糖糖类药物制物制备的一般方法的一般方法一：单糖及其衍生物的制备游离游离单糖糖及小分子寡糖易溶于冷水小分子寡糖易溶于冷水及温乙醇温乙醇。可以用水或中性条件下以50%乙醇为提取溶剂，也可以以82%乙醇，在70-80摄氏度下回流提取。二：多糖的分离于纯化多糖多糖可来自动物物、植物植物和微生物。来源不同提取微生物。来源不同提取方法也不同。方法也不同。2.植物体内含有水解水解多糖衍生物的酶，必须抑制或破坏抑制或破坏酶的作用后，才能制取天然存在形式的多糖天然存在形式的多糖。速速冻冷藏冷藏是保存提取多糖材料的有效方法。提取方法依照不同种类的多糖的溶解性质而定。（）多糖的提取（）多糖的提取提取多糖时，一般先需进行脱脂脱脂，以便多糖释放。方法是将材料粉碎，用甲醇甲醇或11乙醇乙乙醇乙醚混合液，加加热搅拌13小时，也可用石油石油醚脱脂脱脂。动物材料可用丙丙酮脱脂脱脂、脱水脱水处理。3.1、难溶于冷水、溶于冷水、热水，可溶于稀碱液者水，可溶于稀碱液者多糖的提取方法主要有以下几种：多糖的提取方法主要有以下几种：这一类多糖主要是不溶性胶胶类，如木聚精木聚精、半乳聚糖半乳聚糖等。用冷水浸冷水浸润材料后用材料后用0.5molL NaOH提取提取，提取液用盐酸中和、浓缩后，加乙醇沉淀得多糖乙醇沉淀得多糖。如在稀碱中仍不易溶出者，可加入硼砂硼砂，对甘露聚糖、半乳聚糖等能形成硼酸硼酸络合物合物的多糖，此法可得相当纯的物质。2、易溶于温水、易溶于温水、难溶于冷水和乙醇者溶于冷水和乙醇者 材料用冷水浸过，用热水水提取，必要时可加热至8090搅拌提取。3、粘多糖、粘多糖 提取液用正丁醇与正丁醇与氯仿仿混合液除去杂蛋白（或用三三氯乙酸乙酸除杂蛋白），离心除去杂蛋白后的清液，透析透析后用乙醇沉淀乙醇沉淀得多糖。有些粘多糖可用水水或盐溶液溶液直接提取，但因大部粘多糖与蛋白质结合于细胞中，因此需用酶解法解法或碱碱解法解法使糖-白质间的结合键断裂，促使多糖多糖释放放4.一般组织中存在多种多种粘多糖。需要对粘多糖进行分离分离纯化化。（1）碱解法）碱解法 多糖与蛋白质结合的糖糖肽键对碱不稳定，故可用碱解法使糖与蛋白质分开。但若硫酸基硫酸基与邻羟基基处于反式反式结构构或硫酸基在C-3或或C-6，此时易发生脱硫作用脱硫作用。这类多糖不宜用碱解法碱解法提取提取。（2）酶解法解法 理想的工具工具酶是专一性低一性低的、具有广泛水解作用的蛋白蛋白酶。鉴于蛋白蛋白酶不能断裂糖糖肽键及其附近附近的的肽键，为除去长肽段，常可与碱解法碱解法合用。常用的酶制剂有胰蛋白胰蛋白酶、木瓜蛋白木瓜蛋白酶和链霉菌蛋白霉菌蛋白酶及枯草杆菌蛋白枯草杆菌蛋白酶。5.（二）多糖的（二）多糖的纯化化试剂和器材和器材一、一、试剂平衡缓冲溶液：0.01mol/L Tris-HCL,PH=7.2。洗脱液：A:0.1mol NaCl,0.01 mol Tris-HCl PH=7.2;B:0.5mol NaCl,0.01 mol Tris-HCl PH=7.2。氯仿、正丁醇、乙醇(95)等，均为分析纯。二、材料二、材料灰树花子实体。三、三、器材器材DEAE Sepharose Fast Flow，旋转真空蒸发仪，摇床，离心机，层析柱：26106.操作方法一、粗多糖的提取将多糖子实体切碎烘干后称量，采用热水浸提法，每次原料和水之比均为1：5，浸提温度为7080，浸提时间35h，共提取4次，合并4次浸提液。真空旋转蒸发浓缩，浓缩一倍体积。对多糖提取液需进行脱色处理，即以1的比例加入活性炭，搅拌均匀15min后过滤即可。在浓缩液中加入3倍体积的乙醇搅拌，沉淀为多糖和蛋白质的混合物，此为粗多糖。它只是一种多糖的混合物，其中可能存在中性多糖、酸性多糖、单糖、低聚糖、蛋白质和无机盐，必须进一步分离纯化。二、粗多糖的纯化粗多糖溶液加入Sevag试剂(氯仿：正丁醇3：1混合摇匀)后，置恒温振荡器中震荡过夜，使蛋白质充分沉淀，离心(3000rmin)分离，去除蛋白质。然后浓缩，透析，加入4倍体积的乙醇沉淀多糖，将沉淀冻干。取样品0.1g溶于10ml 0.01mol/L Tris-HCL,PH=7.2的平衡缓冲液中。上样，用Buffer A:0.1mol NaCl,0.01 mol Tris-HCl PH=7.2;Buffer B:0.5mol NaCl,0.01 mol Tris-HCl PH=7.2 进行线性洗脱，分部收集。各管用硫酸苯酚法检测多糖。合并多糖高峰部分，浓缩后透析，冻干，即得多糖级分。7.第二部分多糖的第二部分多糖的鉴定定实验原理采用薄层层析法分析单糖组分。薄层层析显色后，比较多糖水解所得单糖斑点的颜色和Rf值与不同单糖标样参考斑点的颜色和Rf值，确定样品多糖的单糖组分。多糖的分析鉴定一般借助于气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)、红外光谱(IR)和紫外光谱(UV)等技术，气相(液相)色谱质谱(GCHPLCMS)联用技术成为分析多糖更为有效的手段。本实验利用红外光谱对多糖进行鉴定。多糖类物质的官能团在红外谱图上表现为相应的特征吸收峰，我们可以根据其特征吸收来鉴定糖类物质。0H的吸收峰在36503590cm1，CH的I申缩振动的吸收峰在29622853cm1，CO的振动峰为151016701之间的吸收峰，CH的弯曲振动吸收峰为14851445cm1，毗喃环结构的C0的吸收峰为1090cm1。试剂和器材一、试剂浓硫酸，氢氧化钡。展开剂:正丁醇：乙酸乙酯：异丙醇：醋酸：乙醇：水：吡啶7：20：12：7：6：6。显色剂:1，3二羟基萘硫酸溶液（0.21，3二羟基萘乙醇溶液）：浓硫酸1：0.04（V/V）。单糖标准品。二、器材沸水浴,玻璃板，傅里叶变换红外光谱。操作方法一、单糖组分分析1薄层板制备：称取硅胶5g于50ml烧杯中，加入用 12 mL 0.3molL 磷酸二氢钠水溶，用玻璃棒慢慢搅拌至硅胶分散均匀，铺在玻璃板上(75cm10cm)，110活化1h。即置有干燥剂的干燥箱中备用。2点样：称取少许的多糖(01克)于20mL离心管中，加入1M的硫酸1mL，沸水浴水解2h，然后加氢氧化钡中和至中性，过滤除去硫酸钡沉淀，得多糖水解澄清液。以此水解液和单糖标准品进行点样进行薄层层析展开。用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，点样直径为24mm，点间距离约为1.52.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。3展开：展开室如需预先用展开剂饱和，将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.51.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，等展开至规定距离（一般为1015cm），取出薄层板，晾干。4显色：将展开凉干后的薄板再在100烘箱内烘烤30分钟，将显色剂均匀地喷洒在薄板上，此板在110下烘烤10分钟即可显色。薄层显色后，将样品图谱与标准样图谱进行比较，参考斑点颜色、相对位置及Rf值，确定样品中有哪几种糖。8.试剂和器材一、试剂浓硫酸，氢氧化钡。展开剂:正丁醇：乙酸乙酯：异丙醇：醋酸：乙醇：水：吡啶7：20：12：7：6：6。显色剂:1，3二羟基萘硫酸溶液（0.21，3二羟基萘乙醇溶液）：浓硫酸1：0.04（V/V）。单糖标准品。二、器材沸水浴,玻璃板，傅里叶变换红外光谱。9.操作方法一、单糖组分分析1薄层板制备：称取硅胶5g于50ml烧杯中，加入用 12 mL 0.3molL 磷酸二氢钠水溶，用玻璃棒慢慢搅拌至硅胶分散均匀，铺在玻璃板上(75cm10cm)，110活化1h。即置有干燥剂的干燥箱中备用。2点样：称取少许的多糖(01克)于20mL离心管中，加入1M的硫酸1mL，沸水浴水解2h，然后加氢氧化钡中和至中性，过滤除去硫酸钡沉淀，得多糖水解澄清液。以此水解液和单糖标准品进行点样进行薄层层析展开。用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，点样直径为24mm，点间距离约为1.52.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。10.3展开：展开室如需预先用展开剂饱和，将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.51.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，等展开至规定距离（一般为1015cm），取出薄层板，晾干。4显色：将展开凉干后的薄板再在100烘箱内烘烤30分钟，将显色剂均匀地喷洒在薄板上，此板在110下烘烤10分钟即可显色。薄层显色后，将样品图谱与标准样图谱进行比较，参考斑点颜色、相对位置及Rf值，确定样品中有哪几种糖。11.后面内容直接删除就行资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用12.主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！13.致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求14.感感谢您的您的观看和下看和下载The user can demonstrate on a projector or computer,or print the presentation and make it into a film to be used in a wider field15.