松花粉应用于护肤领域的毒理安全性能研究.pdf

2024 年第 2 期110中国高新科技科技探索|TECHNOLOGY EXPLORATION松花粉应用于护肤领域的毒理安全性能研究李燕杰许立博邹鹏飞刘斯月高学伟国珍健康科技（北京）有限公司，北京 102200摘要：根据化妆品安全技术规范相关要求,对 100%含量的松花粉进行皮肤刺激性/腐蚀性试验、皮肤变态反应试验、皮肤光毒性试验、急性经皮毒性试验等测试，以评价其毒理安全性能。结果表明：100%含量的松花粉，进行皮肤刺激性/腐蚀性试验，多次皮肤刺激性表现为无刺激性；皮肤变态反应试验表现为未见皮肤变态反应；皮肤光毒性试验表现为未见皮肤光毒性；急性经皮毒性试验验证为微毒级物质。松花粉在护肤领域应用具有较高的安全性。通过对松花粉局部毒理进行评价，为其在护肤领域应用的安全性提供科学依据。关键词：松花粉；毒理学评价；安全性文献标识码：A中图分类号：R473文章编号：2096-4137（2024）02-110-03DOI：10.13535/ki.10-1507/n.2024.02.33Research on the toxicological and safety performance of pine pollen applied in the field of skincareLI Yanjie,XU Libo,ZOU Pengfei,LIU Siyue,GAO XueweiGuozhen Health Technology(Beijing)Co.,Ltd.,Beijing 102200,ChinaAbstract:According to the relevant requirements of“Technical specification for safety of cosmetics”,100%pine pollen is tested by skin irritation/corrosion test,skin allergy test,skin phototoxicity test,acute transdermal toxicity test,and so on,to evaluate its toxicological safety.Results show that 100%pine pollen showed no skin irritation in the skin irritation/corrosion test,and no skin allergy in the skin allergy test no skin phototoxicity is observed in the skin phototoxicity test,and the acute transdermal toxicity test showed that it was a mild toxic substance.The application of pine pollen in skin care field has higher safety,to provide scientific basis for the safety of pine pollen in skin care by evaluating its local toxicology.Keywords:pine pollen;toxicological evaluation;safety松花粉为松科植物马尾松、油松或同属数种植物的干燥花粉，在我国有着悠久的应用历史，广泛应用于医药、食品、化妆品、新生儿皮肤护理等领域。松花粉在药用、食用领域的毒理安全性验证较多。根据国家标准要求和相关规定，对其进行的急性经口毒性试验、细菌回复突变试验、哺乳动物红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验和 28d 经口毒性试验等毒理学评价试验，验证了松花粉的急性毒性分级属于实际无毒级，无遗传毒性，未见明显毒性作用，具有较高的安全性。在皮肤毒性方面相关研究较少。为检验松花粉应用于护肤领域的毒理安全性能特进行实验研究，为松花粉在护肤领域的应用提供依据和参考。1实验方法1.1皮肤刺激性/腐蚀性试验 以化妆品安全技术规范（2015 年版）（以下简称规范）规定的多次皮肤刺激性实验方法进行。试验前动物要在实验动物房环境中适应 3d 时间。试验前约 24h，将实验动物背部脊柱两侧被毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各为 3cm3cm。取受试物 0.5g 直接涂在侧皮肤上，涂抹面积为 2.5cm2.5cm。当受试物使用无刺激性溶剂配制时，另一侧涂溶剂作为对照，每天涂抹 1 次，连续涂抹 14d。从第二天开始，每次涂抹前应剪毛，用无刺激性溶剂（生理盐水）清除残留受试物。1h 后观察结果，按规范P491 表 1 进行皮肤反应评分，对照区和试验区同样处理。效的方式，并且减少了复杂的操作流程和成本的付出，也不会产生垃圾热解后的焦油、重金属物质、烟气等毒副产品，实现了节约土地，从基础稳定排放指标和碳排放量，降低垃圾处置费用和垃圾的减量化、无害化和资源化、稳定化的 目的。5结语该设备是一体式的制氢、制氧设备，通过电化学的电解水加水制氢制氧，产出的氢氧可以分离，大大提高了制氢制氧工艺的一体化程度，使得制氢制氧变得高效便捷，对相关领域的发展具有很大的促进作用。作者简介：钱文都（1959-），男，云南文山人，深圳市活力氢氧技术有限公司、云南新益新能源有限公司、西藏环创科技有限公司董事长，研究方向：电解水制氢制氧技术研究与应用。参考文献1 李军，张香圃，蒋亚雄，等.SPE 电解水制氧（氢）技术的研究 J.舰船科学技术，2003（S1）：21-23，37.2 俞江南，王雨侬，付俊杰，等.电解水制氢技术及隔膜材料研究进展 J.当代化工研究，2023（20）：5-7.3 陈建军.绿氢的制备、储运及其应用技术进展 J.广东化工，2023，50（15）：70-72，69.（责任编辑：周羿廷）（上接第109页）2024 年第 2 期111中国高新科技TECHNOLOGY EXPLORATION|科技探索结果评价：按下列公式计算每天每只动物平均积分，按规范 P492 表 2 判定皮肤刺激强度。每天每只动物平均积分=1.2皮肤变态反应试验 试验前动物要在实验动物房环境中适应 3d 时间，将动物随机分为受试物组和对照组。用局部封闭涂皮法对受试物进行皮肤变态反应试验。试验前约 24h，将豚鼠背部左侧去毛。诱导接触：将受试物 0.2g 涂在实验动物左侧去毛区皮肤上，以 2 层纱布和 1 层玻璃纸覆盖，再以无刺激胶布封闭固定 6h。阴性对照组不做处理，阳性对照组涂以诱导浓度的2，4-二硝基氯代苯溶液后做同样处理。第 7d 和第 14d 以同样方法重复 1 次。去毛范围为 4 6cm2。激发接触：末次诱导后 14d，将 0.2mL 受试物涂于豚鼠右侧 2cm2cm 去毛区（接触前 24h 脱毛），然后用 2 层纱布和 1 层玻璃纸覆盖，再以无刺激胶布固定 6h。阴性对照组做同样处理，阳性对照组涂以激发浓度的 2，4-二硝基氯代苯溶液后做同样处理。激发接触后24h 和 48h观察皮肤反应，按规范P497 表 1评分。当受试物组动物出现皮肤反应积分大于等于 2 时，判为该动物出现皮肤变态反应阳性，按规范 P498 P499 表 3 判定受试物的致敏强度。1.3皮肤光毒性试验 将动物固定，按规范 P501 表 1 所示，在动物去毛区 1和 2 涂 0.2g 受试物，30min 后，左侧（去毛区 1 和 3）用铝箔覆盖，胶带固定，右侧（去毛区 2 和 4）用 UVA 进行照射。结束后分别于 1h、24h、48h 和 72h 观察皮肤反应，根据规范 P501 P502 表 2 判定每只动物皮肤反应评分。单纯涂受试物而未经照射区域未出现皮肤反应，而涂受试物后经照射的区域出现皮肤反应分值之和为 2 及以上的动物数为 1 只或1 只以上时，判为受试物具有光毒性。1.4急性经皮毒性试验 采用限量试验法，即按照 2180mg/kg BW 的给药剂量，对供试大鼠（雌、雄各 5 只）一次性经皮给予受试物。给受试物前约 24h，剃除动物躯干背部拟染毒区域的被毛，用于染毒的被毛区域至少应为 10%动物体表面积。不要损伤皮肤以免影响皮肤的通透性。实验当日称重、标记，根据动物体重确定受试物涂抹量。将受试物均匀涂敷于动物背部皮肤染毒区，然后用一层薄胶片覆盖，无刺激胶布固定，防止动物舔食。涂敷需尽可能薄而均匀。封闭接触 24h，给药后 2 4 h内密切观察动物体征。染毒结束后，清除残留受试物。之后每天观察 1 次，观察期为 14d。记录动物中毒体征、症状出现和消失，以及动物死亡时间。观察期内存活动物每周称重、观察期结束存活动物称重，处死后进行大体解剖学检查。2结果2.1皮肤刺激性/腐蚀性试验 以 100%浓度的松花粉每天涂抹 1 次，连续涂抹 14d，所试家兔皮肤未发现红斑/水肿等刺激表现，每天每只动物的皮肤刺激性反应平均积分为 0。根据皮肤刺激强度分级判定，受试物对家兔多次皮肤刺激性为：无刺激性。2.2皮肤变态反应试验以 100%浓度的松花粉激发接触后 24h 和 48h 观察皮肤反应，所试豚鼠皮肤未发现红斑/水肿等变态表现，受试物组动物皮肤反应积分为 0。根据变态反应试验皮肤反应评分判定，受试物对豚鼠皮肤变态反应试验结果为：未见皮肤变态反应。受试物对豚鼠多次皮肤变态反应试验结果如表 1 所示。表1受试物对豚鼠多次皮肤变态反应实验结果组别动物数（只）起始体重a（g）终止体重a（g）诱导剂量激发剂量观察时间皮肤反应强度b积分2动物数致敏率（%）红斑水肿012340123阴性对照10256.312.0358.321.8原液24h10/100/100/100/10 0/10 10/100/100/100/100048h10/100/100/100/10 0/10 10/100/100/100/1000受试物组20256.410.4355.210.2原液原液24h20/200/200/200/20 0/20 20/200/200/200/200048h20/200/200/200/20 0/20 20/200/200/200/2000阳性对照10283.06.1391.76.10.2%0.1%24h0/102/106/102/10 0/10 10/100/100/100/1088048h0/105/105/100/10 0/100/100/100/100/10550注：a 起始体重、终止体重的表示方式为均值 SD；b 在皮肤反应强度栏中应填写当皮肤反应积分为 0，1，2，3，.时，发生反应的动物数占受试动物数的比例。2024 年第 2 期112中国高新科技科技探索|TECHNOLOGY EXPLORATION2.3皮肤光毒性试验以 100%浓度的松花粉涂敷并用 UVA 照射后，于 1h、24h、48h、72h 观察皮肤反应，所试豚鼠皮肤未发现红斑/焦痂/水肿等变态表现，受试物组动物皮肤光毒性反应积分为 0。根据光毒性试验皮肤反应评分判定，受试物对豚鼠皮肤光毒性试验结果为：未见皮肤光毒性。豚鼠皮肤光毒性试验结果如表 2 所示。2.4急性经皮毒性试验以100%浓度的松花粉按照2180mg/kg BW的给药剂量，对供试大鼠（雌、雄各 5 只）一次性经皮给予受试物给药涂敷后观察 14d，实验动物未出现明显中毒体征；动物死亡数为 0；动物体重变化未见异常；大体解剖学检查未见异常。该样品对雌、雄SD大鼠的急性经皮半数致死剂量（LD50）均大于 2180mg/kg BW，依据皮肤毒性分级标准，该样品属于微毒级物质。大鼠急性经皮毒性试验结果如表 3 所示。大鼠急性经皮毒性试验动物体重变化如表 4 所示。3结论依据规范所规定的实验方法，经检验验证，松花粉进行皮肤刺激性/腐蚀性试验，多次皮肤刺激性表现为无刺激性；皮肤变态反应试验表现为未见皮肤变态反应；皮肤光毒性试验表现为未见皮肤光毒性；急性经皮毒性试验验证为微毒级物质。结合其系统毒性和安全性，表明松花粉作为护肤品、化妆品的原料应用于皮肤表面时具有较高的安全性和应用前景。作者简介：李燕杰（1982-），女，北京西城人，国珍健康科技（北京）有限公司工程师，研究方向：日化产品管理。参考文献1 侯晨晨，沈蓉，刘迪，等.松花粉药理作用及临床应用研究进展 J.中国中医药信息杂志，2017，24（9）：124-127.2 沈德嫱，陈立勇.松花粉的保健功效及其临床应用研究进展 J.中国民族民间医药，2017，26（6）：55-57，60.3 兰玉倩，李燕梅.玫瑰松花糕的制作研究 J.现代园艺，2017（13）：38-39.4 陈晓洁，张贵瑾.松花粉在新生儿皮肤护理上的应用效果 J.贵阳中医学院学报，2013，35（4）：60-62.5 潘松浩，邹鹏飞，邵茜，等.松花粉提取物护肤功效体外研究 J.香料香精化妆品，2018（6）：29-32.6 张惠惠，崔议方，宋书祎，等.过热蒸汽灭菌松花粉的安全性毒理学评价研究 J.药学研究，2022，41（7）：442-446.7 陆梅，严峰，罗海燕，等.松花粉安全性毒理学研究 J.药学研究，2015，34（1）：16-19.8 国家食品药品监督管理总局.化妆品安全技术规范（2015 年版）S.国家食品药品监督管理总局，2015.（责任编辑：周羿廷）表2豚鼠皮肤光毒性试验结果动物编号性别体重（g）皮肤反应积分1h24h48h72h1234123412341234126801000200020001002254000001000100000032700100020002000000425801000200020002005262000001000100000062730000020002000200注：表头 1、2、3、4 为化妆品安全技术规范（2015 年）第六章 7。皮肤光毒性试验之图 1 所示试验区。表3急性经皮毒性试验动物实验结果剂量（mg/kg BW）性别动物数（只）死亡动物数（只）2180雌502180雄50表4急性经皮毒性试验动物体重变化剂量（mg/kg BW）性别试验前（g）（动物数）第7d（g）（动物数）第 14d（g）（动物数）2180雌248.245.89（5）296.396.35（5）350.824.47（5）2180雄258.656.68（5）307.806.44（5）366.677.90（5）