紫外可见分光光度计操作作业规程.doc

紫外-可见分光光度计操作规程
(TU1810)

1．目标：制订本标准目标是为规范检验人员在质量检验过程中操作，确保检验结果正确性。
2．适用范围：本标准适适用于二厂检验员对产品质量检验。
3．职责： QC检验员对本标准实施负责。
4．程序：
4.1 简述
紫外-可见分光光度法是利用物质分子对紫外可见光谱区辐射吸收来进行分析一个仪器分析方法。这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上电子在电子能级间跃迁，它广泛用于无机和有机物质定性和定量分析。
朗伯—比耳定律（Lambert—Beer）是光吸收基础定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析依据和基础。当入射光波长一定时，溶液吸光度是吸光物质浓度及吸收介质厚度（吸收光程）函数。其常见表示式为，式中为系数：
A=ε·ι·C
式中 A 为吸光度；
ε 为吸收系数；
C 为溶液浓度；
ι为光路长度。
如溶液浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，对应吸光度即为吸收系数以表示。如溶液浓度（C）摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，则对应有吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表示。
4.2 仪器
紫外可见分光光度计是基于紫外可见分光光度法原理工作常规分析仪器。依据光路设计不一样，紫外可见分光光度计能够分为单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。
4.2.1 仪器测量条件选择
1.测量波长选择
通常全部是选择最强吸收带最大吸收波长λmax作为测量波长，称为最大吸收标准，以取得最高分析灵敏度。而且在λmax周围，吸光度随波长改变通常较小，波长稍许偏移引发吸光度测量偏差较小，可得到很好测定精密度。但在测量高浓度组分时，宁可选择灵敏度低部分吸收峰波长（ε较小）作为测量波长，以确保校正曲线有足够线性范围。假如λmax所处吸收峰太尖锐，则在满足分析灵敏度前提下，可选择灵敏度低部分波长进行测量，以降低比耳定律偏差。
2.适宜吸光度范围选择
任何光度计全部有一定测量误差，这是因为测量过程中光源不稳定、读数不正确或试验条件偶然变动等原因造成。因为吸收定律中透射比T和浓度C是负对数关系，从负对数关系曲线能够看出，相同透射比读数误差在不一样浓度范围中，所引发浓度相对误差不一样，当浓度较大或浓度较小时，相对误差全部比较大。所以，要选择适宜吸光度范围进行测量，以降低测定结果相对误差。
在实际工作中，可经过调整待测溶液浓度或选择合适厚度吸收池方法，使测得吸光度落在所要求范围内。
3.仪器狭缝宽度选择
狭缝宽度会直接影响到测定灵敏度和校准曲线线性范围。狭缝宽度过大时，入射光单色光降低，校准曲线偏离比耳定律，灵敏度降低；狭缝宽度过窄时，光强变弱，势必需提升仪器增益，随之而来是仪器噪声增大，于测量不利。选择狭缝宽度方法是：测量吸光度随狭缝宽度改变。狭缝宽度在一个范围内，吸光度是不变，当狭缝宽度大到某一程度时，吸光度开始减小。所以，在不减小吸光度时最大狭缝宽度，即是所欲选择适宜狭缝宽度。
4.3 紫外-可见分光光度计检定
4.3.1 波长示值误差和反复性
仪器波长示值误差指标为±0.3nm，波长反复性指标为0.2nm，您能够用仪器氘灯两条特征谱线检验，具体检验方法以下：
①确定仪器光谱宽带为“2.0nm”。开机初始化完成后，按数字5键进入系统应用界面， 在系统应用界面中按数字键2强狭缝设定为“2.0nm”。
②在系统应用界面按RETURN键返回仪器主界面，按2键选择光谱测量功效。
③按F1键选择参数设定功效，按对应数字键设定采样间隔为0.2nm、扫描速度为 中速、波长范围为660nm~480nm、纵坐标范围0-100、测光方法Es、光源选择氘灯
④按RETURN键返回光谱扫描界面。
⑤按START/STOP键并输入增益值为6，按ENTER键确定，开始扫描。
⑥扫描结束后，按F2键并输入阈值（1~100）后，按ENTER键进行峰值检出（假如检出峰波长为0.000nm，则需要按键返回，然后重新按F2键输入比前次输入小数值作为阈值，重新进行峰值检出）
⑦按F4键打印输出
反复扫描三次，并做峰值检出，氘灯两个峰标准值为656.1nm和486.0nm。
4.3.2基线平直度
样品池中不放任何遮挡物，以空气为空白进行测量，用波长扫描功效测量全波段吸光度值，其具体测量方法以下
①首先确定仪器光谱宽带为2.0nm
②在仪器主界面俺2键选择光谱测量模式
③按F1键进入参数设置界面，按对应数字键设置测光方法Abs、采样间隔为1nm、扫描速度为中速、波长范围为1100~190nm、纵坐标范围为-0.01Abs~.0.01Abs
④按RETURN键，返回光谱测量主界面，按AUTOZERO键进行基线校正。
⑤按START/STOP键进行扫描
⑥按F4键打印输出。
读取曲线吸光度值，在1090nm~200nm波长，测量扫描图谱中起始点和最大偏移之差即为仪器基线平直度。
分光光度法允差范围
波长（nm）
吸收强度
吸收系数（）
允差范围
235
最小
124.5
123.0~126.0
257
最大
144.0
142.8~146.2
313
最小
48.62
47.0~50.3
350
最大
106.6
105.5~108.5
可按下表所列试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英池中，在要求波优点测定透光率，应符合下表中要求。
试剂
浓度（%，g/ml）
测定用波长（nm）
透光率（%）
碘化钠
1.00
220
<0.8
亚硝酸钠
5.00
340
<0.8
合要求。
4.4.1 计算分光光度法
按《中国药典》要求，计算分光光度法通常不宜用于含量测定，对于少数采取计算分光光度法品种，应严格按各品种项下要求方法进行。用本法时应注意：有部分吸光度是在待测成份吸收曲线上升或下降陡坡处测定，影响精度原因较多，故应仔细操作，尽可能使供试品和对照品测定条件一致。若该品种不用对照品，如维生素A测定，则应在测定前对仪器作仔细校正和检定。
4.4.2 比色法
供试品本身在紫外-可见光区没有强吸收，或在紫外光区虽有吸收但为了避免干扰或提升灵敏度，加入合适显色剂，使反应产物最大吸收移至可见光区。
用比色法测定时，因为显色是影响显色深浅原因较多，应取供试品和对照品或标准品同时操作。除另有要求外，比色法所用空白系指用同体积溶剂替换对照品或供试品溶液，然后依次加入等量对应试剂，并用一样方法处理。
当吸光度和浓度关系不呈良好线性时，应取数份梯度量对照品溶液，用溶剂补充至同一体积，显色后测定各份溶液吸光度，然后以吸光度和对应浓度绘制标准曲线，再依据供试品吸光度在标准曲线上查得其对应浓度，并求出其含量。
4.5 注意事项
4.5.1 试验中所用量瓶和移液管均应经检定校正、洗净后使用。
4.5.2 使用石英吸收池必需洁净。当吸收池中装入同一溶剂，在要求波长测定各吸收池透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配对使用，不然必需加以校正。
4.5.3 取吸收池时，手指拿毛玻璃面两侧。装样品溶液体积以池体积4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭洁净，检视应无残留溶剂，为预防溶剂挥发后溶质残留在池子透光面，可先用醮有空白溶剂擦镜纸擦拭，然后再用干擦镜纸拭净。吸收池放人样品室时应注意每次放入方向相同。使用后用溶剂及水冲洗洁净，晾干，防尘保留，吸收池如污染不易洗净时可用硫酸发烟硝酸（3:1 v/v）混合液稍加浸泡后，洗净备用。如用铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡，不然清洁液中铬酸钾结晶会损坏吸收池光学表面，并应充足用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。
4.5.4 含有杂原子有机溶剂，通常均含有很强末瑞吸收。所以，看成溶剂使用时，它们范围均不能小于截止使用波长。比如甲醇、乙醇截止使用波长为205nm。另外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。所以，在检验所用溶剂在供试品所用波长周围是否符合要求，立即溶剂置1cm石英吸收池中，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定吸光度，溶剂和吸收池吸光度应符合下表要求。
以空气为空白测定溶剂在不一样波优点吸光度要求
波长范围（nm）
220~240
241~250
251~300
300以上
吸光度
≤0.40
≤0.20
≤0.10
≤0.05
每次测定时应采取同一厂牌批号，混合均匀同批溶剂。
4.5.5 称量应按药典要求要求。配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时所取容积通常应不少于5ml。含量测定时供试品应称取2份，如为对照品比较法，对照品通常也应称取2份。吸收系数检验也应称取供试品2份，平行操作，每份结果对平均值偏差应在±0.5%以内。作判别或检验可取样品1份。
4.5.6 供试品溶液浓度，除各品种项下已经有注明者外，供试品溶液吸光度以在0.3~0.7之间为宜，吸光度读数在此范围误差较小，并应结合所用仪器吸光度线性范围，配制适宜读数浓度。
4.5.7 选择仪器狭缝谱带宽度应小于供试品吸收带半高宽10%，不然测得吸光度值会偏低，或以减小狭缝宽度时供试品溶液吸光度不再增加为准，对于中国药典紫外分光光法测定大部分品种，能够使用2nm缝宽，但当吸收带半高宽小于20nm时，则应使用较窄狭缝，比如青霉素钾及钠吸光度检验需用1nm缝宽或更窄，不然其264nm吸光度会偏低。
4.5.8 测定时除另有要求者外，应在要求吸收峰±2nm 处，再测几点吸光度，以查对供试品吸收峰位置是否正确，并以吸光度最大波长作为测定波长，除另有要求外吸光度最大波长应在该品种项下要求波长±2nm以内，不然应考虑试样同一性、纯度和仪器波长正确度。
4.5.9 用于制剂含量测定时，应注意供试液和对照液pH值是否一致，如pH值对吸收有影响，则应调溶液pH值一致后再测定吸光度。
4.6 结果计算
4.6.1 对照品比较法 可依据供试品溶液及对照品溶液吸光度和对照品溶液浓度以正比法算出供试品溶液浓度，再计算含量。
C样品=A样品×C对照/A对照
式中 A为吸光度值；C为测试液浓度（以mg/ml 计）。
4.6.2 吸收系数法 要求吸收系数，系指，即在指定波长时，光路长度为1cm，试样浓度换算为1%（g/ml）时吸光度值，故应先求被测样品值，再和要求值比较，可计算出供试样品含量。
（样品）=
式中 A 为供试品溶液测得吸光度值；
C 为供试品溶液百分浓度，即100ml中所含溶质克数（g/ml）；
L 为吸收池光路长度（cm）。
供试品含量%=×100
式中（样品）为依据前式计算出供试品吸收系数；
（标准）为药典或药品标准中要求吸收系数。
4.7 吸收系数测定法
本法关键用于新品种吸收系数测定。
4.7.1 测定方法 取精制样品精密称取一定量，使样品溶液配成吸光度读数在0.6~0.8之间，置1cm吸收池中，在要求波优点按5.5.8项要求测出吸光度读数，然后再用同批溶剂将溶液稀释1倍，使吸光度在0.3~0.4之间，再按上述方法测定。样品应同时测定2份，同一台仪器测定2份结果，对平均值偏差应不超出±0.3%，不然应重新测定。测定时，先按仪器正常灵敏度测试，然后再减小狭缝测定，直到减小狭缝吸光值不增加为止，取吸光度不改变数据。再用4台不一样型号仪器复测。
吸收系数可依据朗伯-比尔定律求算，以下例说明：
已知某化合物分子量为287，用乙醇配成浓度为0.0030%溶液，在波长297nm处，用1cm石英池，测得吸光度为0.6139，求值及摩尔吸收系数ε值。
297nm=A/CL==205
ε297nm=A/CL==5874

4.8 开机
开机前打开仪器样品室盖，观察确定样品室内无挡光物。
开机后，仪器显示初始化工作界面，仪器将进行自检并初始化整个过程需要约2min左右，假如初始化正常结束，系统进入仪器操作界面，以下图所表示：

系统初始化 …… ……
1.内 存 检 查： 正常
2.样品池电机复位： 正常
3.波 长电机复位： 正常
4.狭 缝电机复位： 正常
5.滤光片电机复位： 正常
6.光 源电机复位： 正常
7.钨 灯 检验：
8.氘 灯 检验：
9.波 长 检验：
10.参数 初始化：
系统忙… …

仪器初始化完成后，您便能够开始对仪器进行操作。仪器通常需要经过60min预热时间使光源达成稳定，为确保测量数据正确性，尽可能不要在仪器预热时进行测量。

5.0 光度测量
在此功效模块下，可测定样品在确定波长下吸光度或透过率，完成K系数运算和测量数据打印等功效。
5.1 进入光度测量模式
在仪器主界面下依据提醒按1键选择光度测量方法，仪器进入光度测量模式，显示界面变为光度测量主界面，按RETURN键返回仪器主界面，图所表示：

退出光度测量时，系统在信息提醒区显示“数据将丢失，继续？（是：ENTER，否CLE）” 信息提醒您对目前已测得数据进行操作。
测试按ENTER键，系统将返回仪器主界面，全部已测得数据将丢失。按CANCLE键，系统退回到光度测量主界面，提醒信息变为“请按START键测量”，您能够继续光度测量操作。
下面依据图3-2给出了光度测量主界面具体介绍：

①此处“光度测量”表示现在为光度测量模式；“990nm”为目前工作波长；“0.000Abs”表示现在实时测得吸光度值。
②此部分为工作区，以表格形式显示具体测量数据，每屏可显示最多9个测量数据值，超出则会自动分屏显示。
③此部分为信息提醒区，目前信息提醒您按START/STOP键开始测量。
④此处显示目前时间，图中显示时间为4月15日8时34分。
⑤此部分为功效键提醒区，显示F1~F4键功效。具体按键功效以下：
★F1—进入参数设定界面；
★F2—删除测量数据，刷新屏幕；
★F3—设置样品池状态；
★F4—打印测量结果。
另外在此画面下，按键盘操作键GOTOWL可进行工作波长设置；按AUTOZERO键可完成目前波长下自动校零功效。
5.2 参数设置
在光度测量主界面下，按F1键进入光度测量参数设置界面，按RETURN键返回到光度测量主界面，图所表示：

在该界面下可设置测量光度方法，测量波长和K系数运算系数，依据界面下方提醒按对应数字进行各项参数设置。全部参数设置完成后，按RETURN键返回到光度测量主界面。
5.3 设置光度方法
在光度测量模式下，仪器提供Abs（吸光度）、T%透光率和R%（反射率）两种光度方法供您选择。
在光度测量参数设置界面按1键设置光度方法，每按一次1键，Abs、T%和R%交替变换，图所表示。

5.4 设置测量波长
在光度测量参数设置界面按2键可进行测量波长设置，图所表示：

设置波长界面底部，系统提醒您输入您想要设置测量波长，用数字键0~9和“.” 输入您想要设置测量波长，假如输入错误按CANCEL键可清楚目前输入，输入完成按ENTER键确定后，系统提醒“系统忙…”，此时系统正在设定您所设置波长，完成设定后系统退出测量波长设定，返回到光度测量参数设置界面。
您也能够在下图所表示光度测量主界面下，按GOTOWL键设置光度测量工作波长。

在光度测量界面底部，系统提醒您输入您想要设置测量波长，用数字键0~9和“.”输入您想要设置测量波长，假如输入错误按CANCEL键可清楚目前输入，输入完成按ENTER键确定后，系统提醒“系统忙…”，此时系统正在设定您设置波长，完成设定后系统退出测量波长设置界面，返回到光度测量主界面；不输入数据按RETURN键可直接退出测量波长设定界面，返回到光度测量主界面。
5.5 输入K系数值
在光度测量参数设置界面按3键可进行光度测量K系数设置，图所表示：

设置K系数界面底部，系统提醒您输入你您想要设置K系数，用数字键0~9、“.”和“—”输入K系数，假如输入错误按CANCEL键可清除目前输入，输入完后按ENTER键确定，系统设定完成输入K系数后退出K系数设置界面，返回到光度测量参数设置界面。
5.6暗电流校正
进行暗电流校正能够消除仪器部分噪声，确保样品测量结果更为正确。通常在仪器环境发生改变时，您必需进行仪器暗电流校正，所谓环境改变关键是指：环境温度改变较大时、安装位置改变、做高吸收度样品时等。（提议您在开启仪器预热后，在进行测量前进行暗电流校正，确保数据结果正确性）。暗电流校正具体操作以下：

在光度测量参数设置界面按4键进行暗电流校正，此时在提醒区显示“系统忙…”
，大约10s后提醒信息变为“请按数字键选择”，此时表示暗电流校正完成，如上图所表示
5.7 试样池设置
在试样池设置界面下，您能够选择您所配置试样池（包含：固定池、五联池和八联池）。假如所配置试样池为八联池或五联池，，您还能够设置使用试样池数，并进行移动试样池，试样池复位等操作。
在下图所表示光度测量主界面下，按F3键进入试样池设置界面，假如所表示

在试样池设置界面下，依据提醒按对应数字键进行您所需要设置，完成设置后，按RETURN键返回到光度测量主界面。

5.8选择试样池类型
在试样池设置界面下按1键进行试样池类型设置。系统提供试样池类型有固定池架、五联池架和八联池架三个选项，每按一次1键，系统在固定池、五联池和八联池之间交替转换，图所表示。请依据自己实际所配置试样池类型，选择适合您试样池类型。

5.9 设定使用试样池数
此项参数仅对五联池或八联池有效。在试样控制界面下，按2键进行使用样品池数设置，图所表示：

在试样池设置界面底部，系统提醒您输入您想要设置使用试样池数，用数字键0~9输入使用试样池数，假如输入错误按CANCEL键能够清楚目前输入，输入完后按ENTER键确定，系统设定完成输入使用池数后返回到试样池参数设置界面；不输入数据按RETURN键可直接返回到试样池参数设置界面。
在测量过程中，系统依据该项设置对指定书目标试样池逐一进行测量，序号以n-1,n-2,…标识，n标识第n次测量，后面数字表示样品池序号。假如使用杨池数为1个，或将多样池修改样池数为1，则重新回到主界面进行测量后，已测得数据根据1-1,2-1,3-1,4-1….次序编号。
6.0 一号池空白校正
此项参数用来设定是否要进行一号池空白校正（仅对五联池和八联池有效），此项设置有“否”和“是”两个选项，每按一次3键，选项在“否”和“是”之间交替切换，图所表示。

空白校正意义是把在1号试样池内试样作为空白，对其它试样池（除一号样品池外其它设定样品池）进行测定。在测量开始时，系统将以1号样品池内试样作为空白进行校零。
6.1 移动试样池
此项参数仅对五联池和八联池有效。在试样池设置界面下，按数字键4将移动试样池架到下一试样池。
此选项后面数值标示目前在光路上试样池编号，每按一次4键，试样池架将向下移动一个单位，此选项后面数值也对应加1，直到样品池编号最大值后，样品池复位到1号样品池，以此循环。样品池最大编号五联池为5，八联池为8.
6.2 试样池复位
此项参数仅对五联池和八联池有效。不管目前光路上是几号样品池，在试样池设置界面下按数字键5将试样池架复位，使得1号样品池回到光路上。

6.3 单池测样
在试样池类型选择为八联池或五联池时，当使用试样池数设置为1,1号池空白校正选项为“否”时，可用<移动试样池>功效选择八个试样池（或五个试样池）中任一个作为测量样池，随即测量仅对选中样池操作。
6.4 自动校零（校100%）
在光度测量设置界面下，ZERO键可对目前工作波长进行零吸光度（透过率100%）校正。在校正前，应先放入空白样品（如：溶解待测样品溶剂等），然后进行校正操作。
当使用单样品池进行测量时，单样品池测量包含使用单样品池架和多样品池单池测样，（相关多样品池单池测样请参考<单池测样>）。
测量时首先参考<参数设置>和<试样池设置>设置好多种测量参数和试样池参数（关键是选择样品池类型和多样品单池设置），然后参考<自动校零>进行校零操作；校零后将装好样品比色皿放入样品池内，按START/STOP键，反复测量一次样品，测量结果将显示在界面上，图所表示。

测量结果表格中“No.”表示测量数据编号，图中表示第2次测量第1号样品池结果（假如是多样品单池测量，编号“1”表示是目前使用样品池）；“Abs”表示测得样品吸光度值；“K*Abs”表示吸光度值经过K系数运算后值，图中测量时K系数值为10.
6.5 当使用多样品池进行测量时
只有配置多样品池架（如：八联池、五联池等）后才能进行多样品池测量，您能够依据实际需要选择您需要使用样品池个数。使用多样品池测量能够大大提升您工作效率。
使用多样品池测量时测量结果图所表示，表格中“No.”表示测量数据编号，图中“2-3”表示第2次测量第3号样品池结果；“Abs”表示测得样品吸光度值；“K*Abs”表示吸光度值经过K系数运算后值，图中测量时K系数值为10.图中表示是使用3个样品池进行2次测量结果。

测量结果查阅，假如测量结果超出了显示器显示范围（一屏最多显示9个），您能够用方向键↑↓逐行查阅测量结果。

测量结果删除
测量结果结束后，您能够按F2键清楚测量数据，此时系统提醒“数据将丢失，继续？（是：ＥＮＴＥＲ，否ＣＬＳ）”依据提醒按ＥＮＴＥＲ键确定，系统将清除全部测量数据；按CANCEL取消删除操作，系统提醒变回“请按START键测量”，您能够继续其它操作，假如所表示

请您在删除测量结果前进行数据打印输出，以避免数据丢失造成损失。

7.0 光谱测量
在此功效模块下，可对样品在一段确定波长内吸光度Abs、透过率T%和样品光束（或灯）能量Es和参比光束能量Er进行测量及打印。
7.1 进入光谱扫描测量模式
在仪器主界面下依据提醒按2键选择光谱测量方法，仪器进入光谱测量模式，显示界面变为光谱测量主界面，按RETURN键返回仪器主界面，图所表示：

退出光谱测量时，系统在信息提醒区显示“数据将丢失，继续？（是：ENTER，否：CLE）”信息，提醒您对目前已测得数据进行操作。
此时按ENTER键，系统将返回仪器主界面，全部已测得数据将丢失。按CANCEL键，系统退回到光谱测量主界面，提醒信息变为“请按START键测量”，您能够继续光谱测量操作
下图给出了光谱测量主界面具体介绍：

①此处“光谱测量”表示现在为光谱测量模式；“990nm”为目前工作波长；“0.000Abs”表示现在实时测得吸光度值。
②此部分为工作区，以平面坐标图形式显示测得谱线。图中横坐标为波长值，纵坐标为吸光度值Abs（依据光度方法不一样，纵坐标还能够为透过率T%和能量值Es、Er）。
③此部分为信息提醒区，目前信息提醒区您按START/STOP键开始测量
④此处显示目前时间，图中显示时间为4月15日8时34分
⑤此部分为功效键提醒区，显示F1~F4键功效。具体按键如上图所表示。
7.2 参数设置
在光谱测量主界面下，按F1键进入光谱测量参数设置界面，按RETURN键返回到光谱测量主界面，图

在该界面下可设置光度方法、扫描速度、采样间隔、波长范围、纵坐标范围、光源选择、等。
依据界面下方提醒按对应数字进行各项参数设置。
7.3 设置光度方法
在光谱测量模式下，仪器提供Abs（吸光度）、T%（透过率）、R%（反射率）、Es（样品光路能量）和Er（参比光路能量）五中光度方法供您选择。
在光度测量参数设置界面下按1键设置光度方法，每按一次1键，五种光度方法之间交替转换，图所表示。

7.4 设定扫描速度
仪器提供快速，中速，慢速三种扫描速度。假如是在宽波长范围内简单了解样品大约什么地方有吸收峰，峰值为多少时，能够选择快速扫描；假如需要在较小波长范围内正确读取峰位置和峰值，选择慢速扫描，能够确保结果正确可靠；中速扫描则是介于二者之间。
在光谱测量参数设置界面下按2键可进行扫描速度设置。每按一次2键，中速、快速和慢速之间交替切换，图所表示

7.5 设置采样间隔

仪器提供采样间隔有0.1nm、0.2nm、0.5nm、1.0nm、2.0nm、5.0nm六种，采取采样间隔越小，仪器所绘制扫描曲线也越正确，但同时测量所花时间也会越长。
在光谱测量参数设置界面下按3键设定采样间隔，每按一次3键，采样间隔值在0.1nm、0.2nm、0.5nm、1.0nm、2.0nm、5.0nm之间交替切换，以下图所表示

7.6 设置测量波长范围
在光谱测量参数设置界面下按4键可进行测量波长范围设置，以下图所表示

7.7 设置测光值坐标范围
在光谱测量参数设置界面下5键可进行纵坐标范围设置，图

7.8 光源选择
仪器许可您自己选择光源进行光谱测量，但这仅限于ES（样品光能量）和Er(参比能量）这两种光度方法。
要进行光源选择，首先确定您选择光度方法为Es或Er。在光谱测量参数设置界面下按6键选择光源，每按一次6光源在“钨灯”和“氘灯”之间交替转换，图所表示

暗电流校正，具体操作以下:

7.9 测量
采取光谱测量模式进行测量时首先参考<参数设置>设置好多种测量参数，然后参考<基线校正>进行基线校正；最终将装好样品比色皿放入样品池内（目前光路上样品池），按START/STOP键开始测量，系统将在您设置波长范围内对样品进行扫描，此时系统提醒“正在进行光谱扫描…”，您能够动态观察到扫描曲线生成。
当系统信息提醒变回为“请按START键测量”时，表示系统完成测量。测量完成后结果图

8.0 峰值检出
测量完成后，在光谱测量主界面下，按F2键可对测量得到谱线进行峰值检出操作，图所表示

在光谱测量界面底部，系统提醒您输入阈值，用数字键0~9和 “.”输入阈值，假如输入错误按CANCEL键可清楚目前输入，输入完后按ENTER键确定，系统设定完成输入阈值后将进行峰值检出并将结果显示在界面上；不输入数据按RETURN键可直接退出检出操作，系统将返回到光谱测量界面。
系统接收阈值输入值为整数或保留小数点后一位小数，范围为0.1~100.0；输入超出给定范围时，系统将判定输入数值不符合要求，此时系统自动清除已输入数据，您需要重新输入。
输入阈值后，系统即对目前谱图进行峰值检出运算，将结果显示在画面上，在检出峰值出标示箭头，在界面下方显示该峰谷点波长值和测光值，图所表示：

8.1 试样池设置
在光谱测量主界面下，按F3键进入试样池设置界面，按RETURN键返回到光谱测量主界面，图所表示：

该界面下选项使用和光度测量试样池设置界面下使用相同，您能够参考光度测量一章<试样池设置>进行操作。

9.0 定量测量
利用此功效，您能够对样品进行单波长定量测定，绘制标准曲线等。定量方法有系数法和标准曲线法。

9.1 进入定量测量模式
在仪器主界面下依据提醒按3键选择定量测量方法，仪器进入定量测量模式，显示界面变为定量测量主界面，按RETURN键返回仪器主界面，图所表示：

退出定量测量时，系统在信息提醒区显示“数据将丢失，继续？（是:ENTER,否：CLE）”信息提醒您对目前已测得数据进行操作。此时按ENTER键，系统将返回仪器主界面，全部已测得数据将丢失。按CANCEL键，系统退回到定量测量主界面，提醒信息变为“请按START键测量”，您能够继续定量测量操作。
下面依据下图给出了定量测量主界面具体介绍：

①此处“定量测量”表示现在为定量测量模式；“990nm”为目前工作波长；“0.000Abs”表示现在实时测得吸光度值。
②此部分为工作区，以表格形式显示具体测量数据，每屏可显示最多9个测量数据值，超出则会自动分屏显示。
③此部分为信息提醒区，目前信息提醒您按START/STOP键开始测量。
④此处显示目前时间，图中显示时间为4月15日8时34分。
⑤此部分为功效键提醒区，显示F1~F4键功效。具体按键功效以下：
•F1—进入参数设定界面；
•F2—删除测量数据，刷新屏幕；
•F3—设置样品池状态；
•F4—打印测量结果。
另外在此画面下，按键盘操作键GOTOWL可进行工作波长设置；按ZERO键可完成目前工作波长下自动校零功效。

9.2 参数设置
在定量测量主界面下，按F1键进入定量测量参数设置界面，按RETURN键返回到定量测量主界面，图所表示：

在该界面下可设置定量测量工作模式、测量波长和浓度单位，依据界面下方提醒按对应数字进行各项参数设置。全部参数设置完成后，按RETURN键返回到光度测量主界面。
9.3 设置定量测量方法
本仪器共提供“系数法”和“标样法”两种定量测量方法。两种测量方法建立工作曲线步骤请参考<建立工作曲线>。
在定量测量参数设置界面按1键设置工作模式（即定量测量方法），每按一次1键，“系数法”和“标样法”交替切换，以下图

9.4 设置测量波长
在定量测量参数设置界面按2键可进行测量波长设置，图所表示：

设置测量波长界面底部，系统提醒您输入您想要设置测量波长，可数字键0~9和“.”输入您想要设置测量波长，假如输入错误按CANCEL键可清除目前输入，输入完成按ENTER键确定后，系统提醒“系统忙…”，此时系统正在设定您所设置波长，完成设定后系统退出测量波长设置界面，返回到定量测量参数设置界面；不输入数据按RETURN键可直接退出测量波长设定，返回到定量测量参数设置界面。
您也能够在下图界面中，按GOTOWL键设置定量测量工作波长。

在定量测量界面底部，系统提醒您输入您想要设置测量波长，用数字键0~9和“.”输入您想要设置测量波长，假如输入错误按CANCEL键可清除目前输入，输入完成按ENTER键确定后，系统提醒“系统忙…”，此时系统正在设定您所设置波长，完成设定后系统退出测量波长设置界面，返回到定量测量主界面；不输入数据按RETURN键可直接退出测量波长设定，返回到定量测量主界面。

9.5 设置浓度单位
仪器系统提供浓度单位共有“none”、“mg/L”、“%”、“mol/mL”、“μg/L”、“g/L”、“mg/mL”、“ng/mL”、“mol/L等9种选择。
在定量测量参数设置界面按3键可进行浓度单位设置，每按一次3键，浓度单位在：“none”、“mg/L”、“%”、“mol/mL”、“μg/L”、“g/L”、“mg/mL”、“ng/mL”、“mol/L”之间交替切换，图所表示。

9.6 系数法
系数法适适用于已知工作曲线情况下对样品进行定量测量。采取系数法您只需要输入工作曲线系数和截距就能完成工作曲线建立。
首先，确定在定量测量参数设置界面下您所选择工作模式为“系数法”；在定量测量参数设置界面下按F1键进入系数法工作曲线参数设置界面，在此界面下按RETURN键返回到定量测量参数设置界面，以下图

在该界面下显示工作曲线表示式为“Conc=K*Abs+B”，依据界面下方提醒按1和2键分别对公式中斜率K和截距B置进行设置。
①设定工作曲线斜率
在系数法工作曲线参数设置界面下按1键可对斜率K进行设置，图

9.7 标样法
标样法是测量出已知浓度一系列标准样品吸光度值，然后依据这些吸光度值和浓度值来建立工作曲线测量方法。
首先，确定在定量测量参数设置界面下您所选择工作模式“标样”；在定量测量参数设置界面下按F1键进入标样法工作曲线参数设置界面，图所表示。

在该界面下依据界面下方提醒按1键可设置标样数；按2键能够对某个标样直接设置其浓度和吸光度；按3键能够依据输入数据建立工作曲线并将其绘制在显示器上。
9.8 设置标样个数
在标样参数设置界面下按1键能够对标样数进行设置，图所表示：

在标样法参数设置界面底部，系统提醒您输入标样个数，用数字键0~9输入您想要设置标样个数，假如输入错误按CANCEL键可清除目前输入，输入完后按ENTER键确定，系统设定完成输入标样个数后返回到标样法参数设置界面；不输入数据按RETURN键可直接返回到标样法参数设置界面。
9.9 输入标样浓度和吸光度
在标样法参数设置界面下按2键能够对标样序号进行设置，图所表示。在标样法参数设置界面底部，系统提醒您输入1号标样浓度值，用数字键0~9和“.”
输入您想要标样浓度，假如输入错误请按CANCEL键可清除目前输入，输入完后按ENTER键确定，输入标样个数符合系统后要求后系统提醒您输入标样吸光度，不输入数据请按RETURN键可跳过标样浓度设置而直接进行标样吸光度设置，系统使用默认标样浓度。
完成浓度设置以后，系统提醒您选择吸光度输入方法，用数字键1选择键盘输入，此时系统提醒您输入1号标样吸光度，用数字键0~9和“.”输入您想要设置标样吸光度了，假如输入错误按CANCEL键可清除目前输入，输入完后按ENTER确定。
设置1号标样浓度和吸光度以后，系统提醒您输入2号标样浓度值，采取和上述相同步骤完成全部标样设置后系统返回标样法参数设置界面。

10.0 标样吸光度测量
测量标样吸光度通常应用于只知道标样浓度值而不知道标样吸光度值情况在上述操作“②输入标样浓度和吸光度”选择吸光度输入方法界面，按2选择用一号池测量，以下图

测量标样吸光度前应该进行空表校零，方法是先将空白溶液放入目前光路样品池（一号样品池），然后在定量测量主界面按ZERO键进行自动校零。
自动校零后，依据系统提醒信息先将要测量标样放入目前光路样品池（一号样品池），然后按START/STOP键系统开始测量目前标样吸光度值，测量完成后系统将测得结果作为目前界面上显示标样吸光度值，此时系统提醒输入下一号标样浓度值或返回标样法参数设置界面（完成全部标样设置情况下）。

11.日常维护保养
11.1
注意事项：
按<安装场所>要求为仪器提供一个良好工作环境
鉴于仪器再出厂前调试到最好状态，所以请您不要私自调整，更不能拆卸其中零件，尤其不能碰伤光学镜面，绝对不能够对其进行擦拭。
11.2 日常保养
每次使用后应检验样品室是否积存有溢出溶液，常常擦拭样品室，以防废液对部件或光路系统腐蚀。
仪器使用完成应盖好防尘罩，可在样品室及光源室内放置硅胶袋防潮，但开机时一定要取出。
仪器液晶显示器和键盘日常使用和保留时应注意预防划伤、防水、防尘、防腐蚀。
定时进行性能指标检测，发觉问题即和厂家或销售部门联络处理。