GH∕T 1394-2022 蜂蜜中寡糖的测定 液相色谱-质谱∕质谱法.pdf

ICS 67.180.10CCS X31GH中华人民共和国供销合作行业标准GH/T 13942022蜂蜜中寡糖的测定 液相色谱-质谱/质谱法Determination of oligosaccharides in honey liquid chromatography-tandem mass spectrometry method2023-02-0 9 发布2023-0 3-01 实施中华全国供销合作总社发布GH/T 13942022前言本文件按照GB/T 1.1-20 20标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起 草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华全国供销合作总社提出。本文件由全国蜂产品标准化工作组(SAC/SWG2)归口。本文件起草单位：南京海关动植物与食品检测中心、中国蜂产品协会、北京同仁堂蜂产品(江山)有限公司、南通海关综合技术中心、安徽泓顺源生物科技有限公司。本文件主要起草人：林宏、陆慧媛、李国伟、徐锦忠、丁涛、姜珊、陈磊、董勇美、程晓澳、熊文 慧、汪昌宏、费晓庆、柳茵、张晓燕、王艳、季美泉、王栩璐、韩燃、王静。GH/T 13942022蜂蜜中寡糖的测定 液相色谱-质谱/质谱法1范围本文件规定了蜂蜜中寡糖的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本文件适用丁蜂蜜中内源和外源性寡糖的测定和判定。本文件所指寡糖为麦芽六糖和麦芽七糖。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3方法原理样品经水溶解，采用液相色谱-质谱/质谱法测定，麦芽六糖和麦芽七糖的标准物质外标法定量。4试剂和材料4.1 试剂4.1.1乙睛(CH：CN)：色谱纯。4.1.2甲酸(HCOOH)：色谱纯。4.2试剂配制4.2.1 0.1%甲酸水溶液：准确吸取甲酸vi.1.2)1 mL,置于1000疝容量瓶中，用水稀释至刻度，摇 匀备用。4.2.2 乙睹水溶液(4+6)：准确量取乙睛(4 1.I)40矶 至100 niL容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀 备用。4.3标准品4.3.1 麦芽六糖标准品(Maltohexaose,C36H62O3。CAS号:34620-77-4)：绡度不低于98%。4.3.2 麦芽七糖标准品(Maltoheptaose,C42H72O36,CAS号:34620-78-5)：纯度不低于98%。4.4标准溶液配制4.4.1标准储备溶液：分别准确称取适量的标准物质(4.3.1和432),用水溶解，配制成1.0 mg/mL的标 准储备液，2-8 避光贮存，有效期6个月。4.4.2标准工作溶液:根据需要,分别移取适量各标准储备液，用乙睛水溶液(4.2.2)稀释成1.0 pg/mL,2.5|ig/mL,5 jig/mL,10 pg/mL,20 pg/mL,25 pg/mL,6个标准浓度的工作溶液，现用现配。1GH/T 139420225仪器和设备5.1 液相色谱质谱/质谱仪：串联四极杆质谱配电喷雾离子源。5.2 分析天平：感量0.0 0 0 0 1 g和0.0 1 g。5.3 涡旋混合器。5.4 移液器。5.5 微孔滤膜：0.22 有机型。6试样制备和保存对无结晶的蜂蜜样品，将其搅拌均匀。对有结晶析出的蜂蜜样品，在密闭情况下，将样品瓶置于不 超过60 的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温，在融化时必须注意防止水 分挥发。分出500 g,装入洁净容器，密封，标明标记。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染。试样于常温状态下保存。7试样处理准确称取样品1 g（精确至0.0 1 g）置于容量瓶中,用乙腊水溶液（4.422）溶解定容至10.0 mL,取 1 mL溶液经0.22 pm的滤膜过滤至进样瓶中，供液相色谱质谱/质谱仪测定。8测定 8.1参考液相色谱条件8.1.1 色谱柱：IIILIC（100 mm X 4.6 mm,5|J m）或相当者。8.1.2流动相：A,0.1%甲酸水溶液；B,乙腾。8.1.3 流速：1.00 mL/inino8.1.4 梯度洗脱程序:00.5 Bin,15%A；0.53.0 min,15%40%A；3.04.5 min,40%A；4.66.0 min,15%A。8.1.5柱温：室温。8.1.6 进样量：108.2 参考质谱条件8.2,1 离子化方式：电喷雾电离ESI；8.2.2 扫描方式：正离子扫描，具体监测离子见附录A；8.2.3 检测方式：多反应监测（SRM）；8.2,4 离子源温度：400；8.2.5 喷雾电压：2.5 kV；8.2.6 鞘气：氮气（NJ,流速50 psi；8.2.7 辅助气:氮气（凡），流速8 psi。使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测要求。8.3 定性测定2GH/T 13942022在相同实验条件下测定标准溶液和样品溶液，若样品溶液中检出色谱峰的保留时间与相应标准溶液 色谱峰的保留时间一致（允许偏差攵.5%）,且样品溶液的质谱离子对相对丰度与浓度相当标准溶液的 质谱离子对相对丰度相比较，相对离子丰度（k）的相对偏差不超过表2规定的范围，则可判定样品中 存在该组分。表2定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%k50502k20202k10k10允许的相对偏差/外202530508.4 定量测定取标准工作溶液进样，以麦芽六糖和麦芽七糖色谱峰面积为纵坐标，麦芽六糖和麦芽七糖的浓度为 横坐标绘制标准工作曲线，外标法定量；在上述色谱和质谱条件下，化合物的标准物质提取离子（定量）质谱图见附录B。8.5 空白试验除不加试样外，均按上述步骤进行。9结果计算样品中麦芽六糖和麦芽七糖的含量按式（1）计算:一 CxV式中：X试样中待测物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c由标准曲线中得出的供试品溶液中各待测物的浓度，单位为微克每毫升（M g/mL）；V样液的定容体积，单位为毫升（mL）；m试样的质量，单位为克（g）o以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，计算结果保留三位有效数字。10方法精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值.不得超过算术平均值的10%。11方法检出限和定量限麦芽六糖的检出限为10 mg/kg,定量限为50 mg/kgo麦芽七糖的检出限为10 mg/kg,定量限为50 mg/kg。12方法准确度在50.0 mg/kg、100.0 mg/kg和200.0 mg/kg加标水平进行回收率测定,平均回收率为80%-103%。3GH/T 139420221 3内源性和外源性寡糖的判定与结果表述样品中麦芽七糖超过定量限，麦芽七糖子离子689.3/1013.3丰度比大于1,麦芽七糖/麦芽六糖含 量比大于20乐同时满足上述三个条件则判定样品中含有外源性寡糖，结果表述为阳性，否则为阴性。4GH/T 13942022附录A(资料性)参考质谱条件A.1待测物的定性离子对、定量离子对及碰撞能量参见表A.1。表A.1化合物的定性离子对、定量离子对和碰撞能量测定物质分子结构式母离子5/z)子离子(败勿碰撞能量(eV)麦芽六糖CwHmOru1013.4851.3*60689.355麦芽七糖CkHtzO：见1175.41013.3*50851.355689.3*60“定量离子。注：附录A所列参考质谱条件仅供参考，当采用不同质谱仪器时，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优 化到最佳。5GH/T 13942022附录B（资料性）添加淀粉糖浆的蜂蜜和天然甘露糖蜂蜜的液相色谱-质谱/质谱图B.1添加淀粉糖浆的蜂蜜的液相色谱-质谱/质谱图参见图B.IoR T 0 03-600 S M 7G18 二60-40-2Q-0 18 0.30 0 54 0 71 0.86123 138 1.66 1.75 192 205cm 3*14 3 63 3.B03 02 318 二咒NL 3.43E3mr r=830W-WXMR.cEf9 S R MmsZ 1013303 Kdo-zsoeeujso.8512Ka5i 39)：伯 3 S S5.40 5.50 5 67 58?一*一NL 234E3lOO-i20-0.0也 巴 0 7七?世】,丝 3与1I*2里0.5 1X1 IS 2XJ2 38 2.55 2 73Ur r e(nin)3 S P 5*2376 R T:4 41 AV:1 ML:L91E3*CS IS AMnts2 1175.400 669 250-9.350.851250-851 3S 0.1013.2S Q-1011350)晅30lOOn851.30在世10U3060；639 26 39 28 689.30 689 32 689.34mfi85126 85128851.30 851.32m*2851.541013 26 1013 28 101330 1013.32101X34图B.1添加淀粉糖浆的蜂蜜的液相色谱-质谱/质谱图B.2天然甘露糖蜂蜜的液相色谱-质谱/质谱图参见图B-2。R T 000-6 00 S M 7G4814 965.0523 5 46 555Nl 1 HU mm aop：*c esi srm me 1013 4*892S 303S 0.aS 12K*fiS i50 MS|ayr iQ589-mfx 0UP S QM“逐 z 即 z W39 琢.的128&XM0I。口2l01Xg MS HPXT05.27 5.37 5 54 5.65 5.8855jayngjong 02388 R T 4.44 AV:1 NL:2.21E3P C ES S PMms2 1175 403(639.3-669 350 851 250-851 350 1013 2S 0-1013 350100-1101306B9.30BS 1.3068926 689 28 6B93D 68932 69 34脸951.26 B512B 851.30 8S 132 85134nVzLLLILLr-T-1 T-1I1013.26 1013 26 10133。1013J2 1013.34n位图B.2天然甘露糖蜂蜜的液相色谱-质谱/质谱图6