HPLC法检测化妆品中覆盆子酮的含量.pdf

王 菲青蛙王子（福建）婴童护理用品有限公司，福建漳州，363005摘 要：通过HPLC法对化妆品中覆盆子酮含量的检测进行了研究。经shim-pack GWS C18柱（4.6 mm 250 mm5 m）分离，二极管阵列检测器（DAD）进行检测。V（甲醇）V（水）=4060为流动相，220 nm为检测波长。研究结果显示，在8.0800 g/mL质量浓度范围内，覆盆子酮的浓度和面积呈线性关系，相关系数为0.998 7。本方法对覆盆子酮的检出限为2 g/mL，定量限为8 g/mL。样品的加标回收率为95.3%117.3%，相对标准偏差为0.04%2.45%（n=3）。关键词：覆盆子酮；HPLC；化妆品中图分类号：TQ658 文献标识码：A 文章编号：1672-2701（2024）03-94-05HPLC法检测化妆品中覆盆子酮的含量覆盆子酮的别名：悬钩子酮。CAS为5471-51-2，化学式为C10H12O2，熔点在8283，不溶于水，主要应用在食品香料中，也应用在化妆品及皂的香精中1。覆盆子酮是已使用化妆品原料目录（2021年版）清单中第02380号，其在淋洗类产品和驻留类产品中的最高历史使用量都为0.4%2，是一种粒状或白色针状结晶。_作者简介：王菲，硕士，理化分析测试专员，联系电话：[phone]。E-mail：。近年来，随着相关部门对化妆品防腐剂使用监管力度加大，越来越多的植物防腐剂成为配方师争先恐后研究的重点，其中覆盆子酮也进入研究者的研究目录中。朱会霞3的研究表明，覆盆子酮对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等具有抑制作用，并且覆盆子酮在pH值为48范围内时，抑菌作用是稳定的。孔秋婵等4的研究结果表明，覆盆子酮与1,2己二醇或苯氧乙醇复配，具有显著的抑菌效果，可以满足乳液和膏霜剂型防腐的需求。中国洗涤用品工业工业与公共设施清洁942024年第3期（总276期）目前，对覆盆子酮的检测方法有高效液相色谱法-荧光法5气相色谱法6分光光度法7及核磁共振内标法8等，但采用高效液相色谱法测定化妆品中覆盆子酮的含量还未有相关的研究。同时，覆盆子酮与4-（4-羟基苯基）-2-丁醇有相似的结构，这种结构可能会导致消费者皮肤患白斑病9。因此，开发一种采用高效液相色谱法测定化妆品中覆盆子酮的检测分析方法具有重要的研究意义。1 实验部分1.1 主要试剂与仪器覆 盆子 酮，纯 度 9 8.0 0%，St an ford Analytical Chemicals Inc.；甲醇，色谱纯，西陇科学股份有限公司；纯水，实验室自制。岛津分析天平（AUY220），岛津企业管理(中国)有限公司；HPLC（LC-15C），SHIMADZU仪器（苏州）有限公司；超声波清洗机（AK-031SD），深圳市钰洁清洗设备制造中心；混匀器（XK90-A），江苏新康医疗器械有限公司；离心机（80-1），江苏科析仪器有限公司；纯水机（RO-EDI-250L），汕头市正华达环保科技有限公司。1.2 实验方法1.2.1 色谱条件色谱柱：采用shim-pack GWS C18，色谱柱的规格为：250 mm4.6 mm5 m；流动相：甲醇水（V/V）=40%60%；流速：1.0 mL/min；检测波长：220 nm；检测器：二极管阵列检测器（DAD）；柱温：30；进样量：10 L。1.2.2 标准溶液的配制精密称取覆盆子酮标准品0.020 0 g用甲醇溶解并定容于25 mL容量瓶中，配制成0.8 mg/mL的标准液作为储备液，并于4 冰箱中储存备用。覆盆子酮标准储备液用甲醇稀释成浓度为8 g/mL40 g/mL80 g/mL400 g/mL800 g/mL系列标准溶液，现配现用。1.2.3 样品溶液制备将0.501.00 g（精确到0.000 1 g）的化妆品，精确称取于具塞比色管（刻度10 mL）中，加入适量甲醇，置于混匀器内，使试样充分的混合分散，超声提取20 min，离心，用甲醇定容到10 mL混匀后再用0.45 m或0.22 m滤膜过滤，供试样品溶液备用。2 结果与讨论2.1 流动相对测试的影响覆盆子酮可溶于甲醇和乙腈中，且两种溶剂对不同剂型的化妆品都具有较好的溶解分散性。研究了V（甲醇）V（水）和V（乙腈）V（水）不同混合比例对分离效果及检测时间的影响，测试采用V（甲醇）V（水）3070、4060、5050为流动相，研究发现，当以V（甲醇）V（水）5050为流动相时，分离效果较差，而以V（甲醇）V（水）3070作为流动相时，检测时间较长，因此选择流动相为V（甲醇）V（水）4060。同时以V（乙腈）V（水）4060为流动相时，分离效果和检测时间与V（甲醇）V（水）4060相同，考虑到溶剂对实验者安全的影响，最终选取流动相为V（甲醇）V（水）4060，其在试样中的分离度可达3.167，理论塔板数可达20 558，拖尾因子可达1.120，覆盆子酮的色谱图见图1。2.2 检测波长的选择覆盆子酮标准物质在1.2.1色谱条件下进行190800 nm范围内的全扫描，从扫描的光谱可以看出，在220 nm附近覆盆子酮具有极强的紫外吸收95功效型个人洗护技术与市场能力，因此覆盆子酮的检测波长选择220 nm，光谱图如图2。2.3 溶剂和超声时间的影响2.3.1 提取溶剂的影响在1.2.1的色谱条件下，选择较难分散的膏霜类体系作为研究对象，将甲醇、乙腈和流动相作为溶剂来提取膏霜中的覆盆子酮，样品制备过程参考响应值/mAU0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 时间/min400350300250200150100500-50响应值/mAU0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 时间/min7065605550454035302520151050-5-10A.覆盆子酮对照品的色谱图 B.样品中覆盆子酮的色谱图图1 覆盆子酮对照品和样品中覆盆子酮的色谱图1.2.3样品溶液制备。实验结果显示，采用这三种溶剂分别有98.5%、99.0%和98.3%的提取率。这三种溶剂对膏霜中覆盆子酮的提取率相当，因此选择甲醇作为萃取溶剂。2.3.2 提取时间的影响由于膏霜体系的化妆品成分比较复杂，不易分散萃取，故选择研究膏霜中覆盆子酮超声萃取时间为响应值/mAU1982212766437167006005004003002001000200 300 400 500 600 700 波长/nm图2 覆盆子酮全扫描吸收峰覆盆子酮中国洗涤用品工业工业与公共设施清洁962024年第3期（总276期）10 min、15 min、20 min、25 min时对提取率的影响，实验结果见图3，结果显示以超声萃取20 min为宜。提取率/%105.00100.0095.0090.0085.0080.0075.0010 min15 min20 min25 min图3 超声时间与膏霜中覆盆子酮的提取率的关系时间/min2.4 绘制标准曲线将1.2.2中配置的系列标准溶液，取10 L测试，按每个系列标准溶液浓度和峰面积，得到线性回归方程（表1）。根据检出限（LOD）是信噪比表1 覆盆子酮标准曲线及标准系列浓度对应的峰面积 浓度Xi/峰面积 峰面积 峰面积 峰面积 线性回 LOD/LOQ/(gmL-1)(Vs)(y1)(Vs)(y1)(Vs)(y1)(Vs)(y)归方程 (gmL-1)(gmL-1)84080400800116 821576 7221 141 3435 415 83211 765 526116 854577 2931 141 3855 400 01711 784 700116 301577 4051 141 7965 588 48011 785 349116 659577 1401 141 5085 468 11011 778 525Y14620 x-66721R20.998 728表2 覆盆子酮（n3）的回收率和相对标准偏差 样品类型 添加量水平/(gmL-1)检出量/(gmL-1)回收率/%RSD/%水剂类乳液类膏霜类166611016661101666110 17.768.9115.115.263.0129.016.966.2101.4110.6104.4104.695.395.5117.3105.6100.398.52.142.450.970.751.100.040.860.570.97（S/N）为3时化合物的浓度，得到该方法对覆盆子酮的检出限为2 g/mL，定量限（LOQ）是信噪比（S/N）为10时化合物的浓度，得到该方法对覆盆子酮的定量限为8 g/mL。因此可以满足化妆品中覆盆子酮的最大添加量0.4%的检测要求。2.5 精密度与回收率水剂类、乳液类、膏霜类为空白加标基质，加标水平回收率和精密度实验采用3个浓度（16、66、110 g/mL），实验结果如表2所示。由表2可知，3个浓度加标的回收率为95.3%117.3%，相对标准偏差为0.04%2.45%（n3），表明该方法准确度、精密度较好。2.6 重复性实验平行制备6份浓度为40 g/mL的供试样品溶液，按1.2.3的方法进行处理，6份平行供试品溶液97功效型个人洗护技术与市场对应的峰面积如表3。以6次测定值来考察方法重复性，RSD为0.2%（n6），说明该方法具有良好的重复性。表3 6份浓度为40 g/mL的供试样品溶液的相对标准偏差 添加量水平/(gmL-1)峰面积(Vs)RSD/%404040404040574 483575 330576 722577 293577 405576 7490.22.7 实际样品检测购买市面上标签上显示含有覆盆子酮的三种剂型的洁面泡沫、膏霜、爽肤水并测试其覆盆子酮的含量。样品按照1.2.3进行处理。测得覆盆子酮的含量分别为0.11%、0.30%和0.12%。3 结论采用HPLC法测定化妆品中覆盆子酮的含量，甲醇为萃取溶剂，超声提取20 min，分离采用shim-pack GWS C18柱，二极管阵列检测器（DAD）检测。该分析方法简单易操作，检出限、定量限、回收率、精密度等均符合检测要求。参考文献1 AMT生物技术有限公司.覆盆子酮抑菌防腐剂及其制备方法和应用:中国:202110772232.9P.2021-10-08.2 国家药监局.国家药监局关于发布已使用化妆品原料目录(2021年版)的公告(2021年第62号)EB/OL.2023-10-20.https:/ 朱会霞.覆盆子黄酮的抑菌特性研究J.现代食品科技,2012,28(11):1484-1487.4 孔秋婵,蒋佳欣,夏高辉,等.覆盆子酮应用于化妆品中的防腐功效研究J.中国洗涤用品工业,2023(4):54-61.5 HIGASHI Y.Improved Method for Determination of Raspberry Ketone in Fragrance Mist by HPLC-Fluorescence Analysis after Pre-Column Derivatization with 4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(N-chloroformylmethyl-N-methylamino)-2,1,3-benzoxadiazoleJ.Journal of Analytical Sciences,Methods and Instrumentation,2018,8(2):17-24.6 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准 食品添加剂 覆盆子酮(又名悬钩子酮):GB 1886.284-2016 S.北京:中国标准出版社,2016.7 张志红,徐理民,要宝强.覆盆子酮的分光光度法测定J.北京石油化工学院学报,2005,13(4):15-17.8 仙云霞,耿岩领,周洪雷,等.核磁共振内标法测定覆盆子酮对照品的含量J.山东科学,2015(1):7-11.9 AOYAMA Y,ITO A,SUZUKI K,et al.The First Epidemiological Report of Rhododenol-Induced Leukoderma in Japan Based on a Nation-Wide SurveyJ.The Japanese Journal of Dermatology,2014,124:2095-2109.Determination of Raspberry Ketone in Cosmetics by HPLCWANG FeiFrog Prince(Fujian)Baby Care Products Co.,Ltd.,Zhangzhou,Fujian 363005,ChinaAbstract:This article studies the HPLC method for detecting the content of raspberry ketone in cosmetics.Shim-pack GWS C18 column(4.6 mm250 mm5 m)was employed for separation,with detection carried out using a diode array detector(DAD).Using V(methanol):V(water)=40:60 as the mobile phase,detection wavelength is 220 nm.The research results indicated that within the mass concentration range of 8.0800 ug/mL,there was a linear relationship between the concentration and area of raspberry ketone,with a correlation coefficient of 0.9987.The detection limit of this method for raspberry ketone was 2 ug/mL,and the quantitative limit was 8 ug/mL.The spiked recovery rate of the sample was 95.3%117.3%,and the relative standard deviation was 0.04%2.45%(n=3).Keywords:raspberry ketone;HPLC;cosmetics中国洗涤用品工业工业与公共设施清洁982024年第3期（总276期）