基于Wnt_β-catenin信号通路探讨阿司匹林联合阿托伐他汀对非小细胞肺癌细胞A549细胞增殖的影响.pdf

基基于于 /信信号号通通路路探探讨讨阿阿司司匹匹林林联联合合阿阿托托伐伐他他汀汀对对非非小小细细胞胞肺肺癌癌细细胞胞 细细胞胞增增殖殖的的影影响响朱 莹 易善永 郭云霞 吕朋举 作作者者单单位位:郑郑州州大大学学附附属属郑郑州州中中心心医医院院(朱朱 莹莹 易易善善永永 吕吕朋朋举举)郑郑州州人人民民医医院院(郭郭云云霞霞)通通讯讯作作者者:吕吕朋朋举举 【摘要】目的 基于/信号通路探讨阿司匹林()联合阿托伐他汀()对非小细胞肺癌()细胞增殖的影响 方法 将 细胞株分为 组、组、组和 组 法检测细胞存活率 检测炎症因子和氧化应激水平 检测蛋白表达 结果 结果显示(/)、(/)和 联合 均能明显抑制 细胞增殖这种抑制作用随药物作用浓度增加而增加(.)与 组相比 组、组和 组氧化应激和炎症水平明显降低(.)与 组和 组相比 组氧化应激和炎症水平明显降低(.)与 组相比 组、组和 组 和 蛋白表达量均明显下降(.)与 组和 组相比 组 和 蛋白表达量明显下降(.)结论 联合 能够抑制/信号通路有效抑制 细胞增殖 【关键词】基因连环蛋白阿司匹林阿托伐他汀非小细胞肺癌细胞增殖 :./.中图分类号:.文献标识码:文章编号:()/.【】()()()/.(/)(/)(.).(.).(.).(.).(.)./.【】(:)目前临床上对非小细胞肺癌()主要采用铂类化疗药物进行治疗长期大剂量应用铂类化疗药物可增加患者耐药性降低化疗敏感性 因此寻找有效的治疗方案对改善 患者预后提高患者存活率有重要的意义 近年多项流行病学调查与临床试验表明阿司匹林()能降低结直肠癌、胰腺癌等多种消化道肿瘤的发病风险和病死率同时兼具降低癌症患者死亡率、延长患者生存周期的作用但是 至今未被系统地应用到临床治疗中基于 的抗肿瘤作用也集中在以结直肠癌为主的消化道肿瘤领域 阿托伐他实用癌症杂志 年 月第 卷第 期 .汀()是另一种新兴的、被证实可能应用于包括 在内多种类型恶性肿瘤的药物文献报道 与 存在重叠的抗肿瘤机制因此猜想 能够联合 发挥协同抗 效应 目前、与 的相关性及分子机制的研究相对较少其抗肺癌的机制也尚未完全清楚有待深入研究分析 信号通路是一个高度保守的复杂的蛋白质作用网络其功能最常见于成年动物的正常生理过程但如果该信号相关关键蛋白发生突变导致信号异常活化就可能诱导癌症发生 蛋白与细胞表面特异性受体互相作用调节下游蛋白的磷酸化和去磷酸化过程引起 连环蛋白()积累游离的 入核调节基因表达其异常表达或激活能引起肿瘤发生从既往研究结果来看该信号通路的异常激活与肺癌发生发展也密切相关 因此本研究通过基于/信号通路探究 联合 对 细胞增殖的影响旨在为 的临床预防及治疗提供指导 材材料料与与方方法法.材料 人非小细胞肺癌 细胞株购自上海慧颖生物科技有限公司采用含质量分数 胎牛血清()的 培养基(公司)复苏 细胞系并进行传代培养 培养条件:、.、隔天换液 和 标准品购自美国 公司 检测试剂盒由上海经科化学科技有限公司提供 全自动酶标仪购自美国 公司辣根过氧化酶()标记兔抗鼠二抗、单克隆抗体、单克隆抗体和 单克隆抗体均购自美国 公司 超氧化物歧化酶()、丙二醛()、活性氧()检测试剂盒均购于上海富雨生物科技有限公司白细胞介素()、和肿瘤坏死因子()检测试剂盒均购自上海宾智生物科技有限公司.法检测 细胞增殖活性 取对数生长期的 细胞制作成细胞混悬液接种于 孔培养板中(个/)待 细胞贴壁后加入 和(或)使与细胞作用的 浓度分别为、/浓度分别为、/组加入等量培养基溶液于 、培养箱中预培养每孔加入 的 溶液继续培养 检测波长为 处各孔的吸光度值绘制细胞生存率随浓度变化的生长曲线.检测氧化应激水平取细胞上清液使用 试剂盒检测、和 水平严格按试剂盒说明书进行测定.检测炎症因子水平 取细胞上清液使用 试剂盒检测、和 水平严格按试剂盒说明书进行测定.检测蛋白表达 应用 检测 和 蛋白表达水平 将 细胞接种于 孔板中设置浓度为 /、/以及两者联合的 个药物干预组和 个加入 培养基的对照组 后收集细胞取 细胞上清液加入 裂解液提取总蛋白用 细胞质蛋白提取试剂盒提取细胞质蛋白 核蛋白提取试剂盒获得核蛋白将蛋白质进行 分离分离后蛋白电子转移到 膜 将膜与封闭缓冲液孵育洗涤加入一抗 ()、和 ()孵育过夜 洗膜使用辣根过氧化物酶()偶联的二抗()孵育膜室温孵育 洗膜电化学发光显像 为内参采用凝胶图像分析系统对比条带强弱.统计学分析 应用 .软件对所得数据进行分析满足正态分布的计量资料均以()表示不满足正态分布的资料以四分位数表示采用单因素方差分析比较多组间差异性 比较多组两两间差异 .表示差异有统计学意义 结结果果.、对 细胞增殖的影响 结果显示(/)、(/)和 联合 均能明显抑制 细胞增殖这种抑制作用随药物作用浓度增加而增加(.)与 或 单独处理相比 联合 对 细胞增殖的抑制作用更强见图 实用癌症杂志 年 月第 卷第 期 .图 、和 联合 对 细胞增殖的影响.和 对氧化应激的影响 与 组相比 组、组和 组 水平、含量明显降低含量明显升高(.)与 组和 组相比 组 水平和 含量明显降低 含量明显升高(.)见表 表 和 对氧化应激的影响()分组(/)(/)(/)组.组.组.组.注:为与 组相比.为与 组相比.为与 组相比.和 对炎症因子水平的影响 检测结果显示与 组相比 组、组和 组、和 水平均明显下降(.)与 组和 组相比 组、和 水平明显下降(.)见表 表 和 对炎症因子水平的影响(/)分组 组.组.组.组.注:为与 组相比.为与 组相比.为与 组相比 .和 对/信号通路的影响 与 组相比 组、组和 组 和 蛋白表达量均明显下降(.)与 组和 组相比 组 和 蛋白表达量明显下降(.)见图 讨讨论论 大量统计数据表明服用 和 可降低癌症发生的风险延缓肿瘤发展的进程 基于此我们设想通过 和 对肺癌的系统研究详细阐述 和 对肺癌细胞的抑制作用和具体的分子机制注:为 组 为 组 为 组 为 组图 和 对/信号通路的影响 本研究结果显示无论是单药干预还是 联合 干预均能明显抑制 细胞增殖并且这种抑制作用随药物作用浓度增加而增加且 联合 干预对 细胞增殖的抑制作用更实用癌症杂志 年 月第 卷第 期 .强提示 联合 具有显著抑制 细胞恶性增殖的作用 流行病调查和科学试验同时证明了 的抗肿瘤作用也同时阐述了 的抗肿瘤机制表明其可以通过多种生物学机制抑制肿瘤细胞在体内外的增殖诱导肿瘤细胞发生凋亡减少肿瘤负荷 等的研究证明阿托伐他汀对 细胞有抗增殖作用 黄娜等通过细胞实验证明阿托伐他汀能够抑制 细胞增殖并促进 细胞凋亡这种抑制作用呈呈明显的时间和剂量依赖 俞俊等研究阿司匹林联合阿托伐他汀抑制 细胞增殖的机制时证明了二者联合能够协同抑制 细胞增殖既往研究与本研究结果一致说明 联合 干预能够发挥协同抗 作用 本研究结果显示与 组相比 组、组和 组 水平和 含量明显降低 含量、和 水平明显升高且 组降低的更明显说明 联合 能够有效降低炎症因子水平和氧化应激水平 李万奎等探讨 联合 对内皮细胞氧化损伤和炎症因子的影响的研究指出 联合 能够抑制氧化损伤内皮细胞的炎症水平从而提高细胞的增殖活力和存活率该研究与本研究结果基本一致 信号通路在机体生长发育、稳态的维持和肿瘤发生中饰演一个关键的角色 作为 信号通路的关键分子其蛋白水平关系到 信号通路的开放或者关闭 在恶性肿瘤细胞的胞浆和胞核内累积使其下游靶基因异常激活 本研究结果显示 组、组和 组 和 蛋白表达量均明显低于 组且 组 和 蛋白表达量下降的更显著提示 联合 抑制 细胞增殖可能是通过抑制/信号通路实现 信号传导途径是由配体蛋白质 和膜蛋白受体结合激发的一组多下游通道的信号转导途径 在细胞连接处与 相互作用参与细胞间粘附 信号异常表达或激活时 通路被打开 蛋白与细胞表面特异性受体结合诱导下游蛋白磷酸化和去磷酸化引起 积累并定位于胞核启动下游基因转录从而诱导肿瘤发生发展 等认为 通过调节环氧合酶()进而影响可调节 信号通路的前列腺素()发挥抗结肠癌的作用机制 还可以抑制乳腺癌细胞系 中 蛋白水平使肿瘤细胞发生细胞周期阻滞从而抑制其恶性增殖 田春阳等结肠癌 细胞实验结果证明阿托伐他汀能够调控上皮间质转化相关蛋白 表达从而抑制结肠癌细胞的生长 既往研究与本研究结果一致说明 联合 能够调控/信号通路从而更好地抑制肿瘤细胞恶性增殖 综上所述本研究立足于/信号通路探究 联合 干预对 细胞恶性增殖的影响揭示了 联合 干预对 细胞系恶性增殖的抑制作用 但本研究仅基于/信号通路探究阿司匹林和阿托伐他汀对 细胞恶性增殖的影响阿司匹林和阿托伐他汀是否也能通过其他信号途径发挥协同治疗的作用的研究还有待补充参考文献 .:.():.():.赵 超王 寒.阿司匹林与消化道肿瘤关系的发现及研究进展.河北医科大学学报():.():.():.():.陈 航黄平.通过/信号通路促进肝细胞癌细胞增殖和迁移.肿瘤():./.():.张皓渝刘红兵刘卫华等./信号通路在实用癌症杂志 年 月第 卷第 期 .胃癌中的研究进展.中国现代普通外科进展():.:.():.严晨强.阿司匹林抗肿瘤研究进展.武警医学():.蔡忠林马骥王朝阳等.阿司匹林预防肿瘤的研究进展.现代肿瘤医学():.:.():.黄 娜王贝魏明莉等.阿托伐他汀对人肺腺癌细胞的凋亡作用及其调控机制研究.临床肺科杂志():.俞 俊段晶晶张 晔.阿司匹林联合阿托伐他汀协同抑制非小细胞肺癌细胞增殖及其机制研究.药学实践杂志():.李万奎.阿司匹林联合阿托伐他汀钙对内皮细胞氧化损伤及炎症因子的影响.实用医药杂志():./.():.梁宏彬崔晓波傅松滨./信号通路在卵巢癌耐药中的研究进展.国际遗传学杂志():.倪明立谢玲秦贝贝./信号通路在非小细胞肺癌组织的表达及意义.广东医学():.:.():.:.():.田春阳刘晓政.阿托伐他汀调控上皮间质转化抑制结肠癌细胞生长的机制研究.现代肿瘤医学():.(收稿日期 修回日期 )(编辑:吴小红)(上接第 页).():.():.():.():.():.():.():.:.:.():.():.(收稿日期 修回日期 )(编辑:吴小红)实用癌症杂志 年 月第 卷第 期 .