基于Py-GC-MS和UHPLC-TOF-MS研究不同靛蓝提取物的化学组成差异.pdf

第 57 卷第 5 期2023 年 9 月生 物 质 化 学 工 程Biomass Chemical EngineeringVol.57 No.5Sept.2023 收稿日期:2023-02-20 基金项目:贵州科技支撑项目(黔科合支撑2022-159)作者简介:王成章(1966),男,湖北汉川人,研究员,博士,博士生导师,研究领域:天然产物研究与利用;E-mail:。doi:10.3969/j.issn.1673-5854.2023.05.001研究报告 生物质天然活性成分基于 Py-GC-MS 和 UHPLC-TOF-MS 研究不同靛蓝提取物的化学组成差异王成章1,2,颜洋洋1,2,刘丹阳1,2,周 昊1,2,商士斌1,2,张华兴3(1.中国林业科学研究院 林产化学工业研究所;江苏省生物质能源与材料重点实验室;国家林业和草原局林产化学工程重点实验室;林木生物质低碳高效利用国家工程研究中心;江苏省林业资源高效加工利用协同创新中心,江苏 南京 210042;2.南京林业大学 江苏省林业资源高效加工利用协同创新中心,江苏 南京 210037;3.凯里小生物科技有限公司,贵州 凯里 556000)摘 要:天然靛蓝来源于可再生含靛植物资源,具有杀菌消炎、清热解毒等药理作用,为探究不同提取工艺得到的靛蓝提取物的化学组成的差异,本研究以马蓝鲜叶自然发酵和生石灰打靛产生的靛蓝膏(粗靛)为原料,通过预处理去杂、盐酸酸化、葡萄糖还原和乙酸乙酯溶剂萃取等工艺,制备靛蓝粗提物(ICE)、酸化-靛蓝提取物(AIE)、葡萄糖还原-靛蓝提取物(GRIE)及乙酸乙酯萃取-靛蓝提取物(EAEI),并采用高效液相色谱(HPLC)、热裂解-气相色谱/质谱联用(Py-GC-MS)和超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱(UHPLC-TOF-MS)对提取物进行分析。研究结果表明:相比于靛蓝膏,4 种提取工艺制备的靛蓝提取物中靛蓝质量分数均显著提高,灰分含量均大幅减少。其中,还原-靛蓝提取物中靛蓝质量分数由靛蓝膏的 2.09%提高到 85%。4 种靛蓝提取物的裂解产物组分中含 12 20 个碳的大分子化合物较多,相应的 GC 含量分别是 7.91%、57.09%、54.4%和 62.7%。4 种提取工艺中,盐酸酸化和乙酸乙酯溶剂萃取提取的靛蓝提取物的裂解产物组分数量远高于预处理去杂和葡萄糖还原工艺。AIE 和 EAEI 分别鉴定出 61 和 184 种化合物,主要包括酸类、多糖类、黄酮类、生物碱类、苷类、多酚类、醛类、蛋白类、酯类 9 类物质,且 EAEI 中酸类、多酚类和黄酮类的相对峰面积分别是 48.72%、4.56%和 1.71%,均较 AIE 的有大幅度提高即乙酸乙酯萃取工艺实现了对靛蓝提取物中酸类、多酚类、黄酮类等有效富集。关键词:靛蓝提取物;青黛;提取工艺;生物碱?中图分类号:TQ35文献标志码:A 文章编号:1673-5854(2023)05-0001-07引文格式:王成章,颜洋洋,刘丹阳,等.基于 Py-GC-MS 和 UHPLC-TOF-MS 研究不同靛蓝提取物的化学组成差异J.生物质化学工程,2023,57(5):1 7.T Th he e C Ch he em mi ic ca al l C Co om mp po os si it ti io on n V Va ar ri ia an nc ce e o of f D Di if ff fe er re en nt t I In nd di ig go o E Ex xt tr ra ac ct ts s B Ba as se ed d o on nP Py y-G GC C-M MS S a an nd d U UH HP PL LC C-T TO OF F-M MS SWANG Chengzhang1,2,YAN Yangyang1,2,LIU Danyang1,2,ZHOU Hao1,2,SHANG Shibin1,2,ZHANG Huaxing3(1.Institute of Chemical Industry of Forest Products,CAF;Key Lab.of Biomass Energy and Material,Jiangsu Province;KeyLab.of Chemical Engineering of Forest Products,National Forestry and Grassland Administration;National EngineeringResearch Center of Low-Carbon Processing and Utilization of Forest Biomass;Jiangsu Co-Innovation Center ofEfficient Processing and Utilization of Forest Resources,Nanjing 210042,China;2.Jiangsu Co-InnovationCenter of Efficient Processing and Utilization of Forest Resources,Nanjing Forestry University,Nanjing 210037,China;3.Kaili Small Biotechnology Co.,Ltd.,Kaili 556000,China)Abstract:Natural indigo came from renewable indigo plant resources and had pharmacological effects such as sterilization,anti-inflammatory,heat clearing,and detoxification.In order to investigate the differences in the chemical composition of indigo2 生 物 质 化 学 工 程第 57 卷extracts obtained by different extraction processes,the raw material of indigo extract(crude indigo)used in this study wasproduced by natural fermentation and quick lime indigo beating of fresh leaves of Baphicacanthus cusia(Nees)Bremek.Theindigo crude extract,acidification indigo extract,glucose reduction indigo extract and ethyl acetate extraction indigo extract wereprepared through pretreatment,impurity removal,hydrochloric acid acidification,glucose reduction,and ethyl acetate solventextraction,respectively.The samples were analyzed by high performance liquid chromatography(HPLC),pyrolysis gaschromatography/mass spectrometry(Py-GC-MS)and ultra performance liquid chromatography quadrupole time of flight massspectrometry(UHPLC-TOF-MS).The results indicated that compared to indigo paste,the mass fraction of indigo in the indigoextract prepared by the four extraction processes had been significantly increased,and the ash content had been significantlyreduced.Among them,the mass fraction of indigo in the reduced indigo extract increased from 2.09%of indigo paste to 85%.The cracking product components of four indigo extracts contain more macromolecular compounds with 12 to 20 carbon atoms,with corresponding GC contents of 7.91%,57.09%,54.4%and 62.7%,respectively.Among the four extraction processes,the hydrochloric acid acidification and ethyl acetate solvent extraction significantly increased the variety and quantity of crackingproducts in indigo extract compared to those of pre-treatment impurity removal and glucose reduction processes.Acidificationindigo extract and ethyl acetate extraction indigo extract identified 61 and 184 compounds respectively,mainly including acids,polysaccharides,flavonoids,alkaloids,glycosides,polyphenols,aldehydes,proteins,and esters.Compared to acidificationindigo extract,the relative peak areas of acids,polyphenols,and flavonoids in ethyl acetate extraction indigo extract were48.72%,4.56%,and 1.71%,respectively.This demonstrated that the ethyl acetate extraction process had achieved effectiveenrichment of acids,polyphenols,flavonoids,and other compounds in indigo extract.Key word:indigo extract;indigo naturalis;extraction process;alkaloid天然靛蓝源于马蓝、木蓝、蓼蓝或菘蓝等含靛植物1-3,传统的靛膏是含靛植物茎叶经自然浸泡、过滤、加入石灰、搅拌、过滤(弃去滤液)得到靛膏,再经晒干和粉碎得到靛蓝粗提取物4-9。天然靛蓝具有绿色安全、环境相容性好等优点,在纺织品上染、建筑用涂料、绘画用颜料、化妆品和药品等领域广泛使用10-12。石岩等13通过药典标准检测方法分析了青黛无机物组成中总灰分为 65%85%、酸不溶性灰分为 5%29%。李永生等14采用反向高效液相色谱法同时测定青黛中 5 种核苷类成分。吴青青等15采用高效液相色谱法同时测定青黛中色胺酮、靛蓝及靛玉红的含量。传统青黛炮制仅采用简单搅拌收集浮沫得到靛花来制备较高靛蓝(8%)或有机物含量的青黛16,但产量很低难以满足临床用药需求,且不能满足靛蓝纯度高或灰分含量低的要求,以及对不同新工艺得到的青黛的深入研究鲜有报道,青黛和靛蓝提取物药理活性与作用机制尚不清晰。因此,本研究以马蓝鲜叶自然发酵和生石灰打靛产生的靛膏为原料,分别通过预处理去杂、酸化、还原和溶剂萃取等工艺,制备靛蓝粗提物、酸化-靛蓝提取物、葡萄糖还原-靛蓝提取物及乙酸乙酯萃取-靛蓝提取物。采用热裂解-气相色谱/质谱联用(Py-GC-MS)和超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱(UHPLC-TOF-MS)技术对不同提取工艺的靛蓝提取物中化学成分进行整体轮廓分析,并结合相关文献,快速分析并鉴定其化学成分,以期为靛蓝提取物中药效物质分析及利用提供基础,并为高品质靛蓝提取物中生物碱、酸类、多酚类、黄酮类等活性物质有效富集提供参考。1 材料与方法1.1 原料、试剂与仪器马蓝鲜叶发酵制备的靛蓝膏(靛蓝质量分数 2.09%,含水量 50%60%,灰分 65.23%),由贵州小生源有限公司提供;靛蓝标准品(HPLC97%)、甲醇(色谱纯),购于阿拉丁生化试剂有限公司;乙酸乙酯、氢氧化钠、葡萄糖、N,N-二甲基甲酰胺,均为市售分析纯;盐酸,市售化学纯。CBM-10A VP Plus 型高效液相色谱仪,日本岛津公司;KF1100 型箱式炉,南京博蕴通仪器科技有限公司;QUINTIX35-1CN PC 型电子天平,德国赛多利斯公司;LXJ-IIB 型低速离心机,海安亭科学仪器厂;KH5200E 型超声波清洗器,昆山禾创超声仪器有限公司;RE-5LC 型旋转蒸发仪和 DF-101S 型恒温加热磁力搅拌器,河南省予华仪器有限公司;209 F1 Libra 型热重分析仪,德国耐驰仪器制造有限公司;ICAP第 5 期王成章,等:基于 Py-GC-MS 和 UHPLC-TOF-MS 研究不同靛蓝提取物的化学组成差异3 7400 型双通道电感耦合等离子体发射光谱仪,UltiMate 3000 型超高压液相色谱(UHPLC)仪,美国赛默飞世尔科技公司;5600 QTOF 型高分辨串联质谱仪,美国 AB SCIEX 公司;PY-3030D/7890B-5977A 型热裂解色谱质谱联用仪,美国安捷伦科技有限公司。1.2 靛蓝提取物的制备1.2.1 靛蓝粗提物 将靛蓝膏按质量比 13 加水搅拌 30 min,用粒径 0.18 mm 滤布挤压过滤,离心,滤渣经 80 烘干,研磨成粉,过 0.18 mm 筛,得到靛蓝粗提物(ICE)。1.2.2 酸化-靛蓝提取物 取 30 g ICE 置于 250 mL 锥形瓶内,加入 150 mL 水,置于 80 的恒温水浴锅中搅拌10 min。然后缓慢滴加质量分数20%盐酸水溶液直到反应液 pH 值为2 3,搅拌反应40 min。离心得沉淀,用 100 水洗涤沉淀至中性,离心,滤渣经 80 烘干,制得酸化-靛蓝提取物(AIE)。1.2.3 葡萄糖还原-靛蓝提取物 取 2 g AIE 置于 250 mL 锥形瓶中,加入 100 mL 水和 3 g 氢氧化钠,置于 80 恒温水浴锅中搅拌30 min。离心后将下层滤渣转入锥形瓶中,再加入100 mL 水、3 g 氢氧化钠和 2.5 g 葡萄糖,瓶口用封口膜密封后在 60 恒温水浴下搅拌反应 50 min。反应后离心得上层液体,用气泵通入空气 2 min,再滴加质量分数 20%盐酸调 pH 值为 3 4,再次离心分离,下层沉淀用超纯水洗涤至中性,沉淀烘干,制得葡萄糖还原-靛蓝提取物(GRIE)。1.2.4 乙酸乙酯萃取-靛蓝提取物 取 20 g AIE 置于 500 mL 烧杯中,加入 200 mL 乙酸乙酯后超声波振荡 30 min。过滤,滤渣重复萃取 2 次,合并萃取液,蒸发乙酸乙酯溶剂后,烘干制得乙酸乙酯萃取-靛蓝提取物(EAEI)。1.3 分析方法1.3.1HPLC 分析采用 HPLC 分析检测不同提取工艺下的靛蓝提取物的靛蓝含量。HPLC 条件:PRAZIS C18 柱(250 mm 4.6 mm,5 m);流动相为甲醇/水(体积比7030);流速1.0 mL/min;检测波长 289 nm。1.3.2 灰分和酸不溶灰分的测定 靛蓝提取物中总灰分和酸不溶性灰分17参照2020 年版中华人民共和国药典中灰分测定法测定。1.3.3 Py-GC-MS 分析 ICE、AIE、GRIE 和 EAEI 4 种靛蓝提取物的化学组成通过 Py-GC-MS 分析。分析条件:进样量 3 mg,在氦气气氛下,以 20 /min 的升温速率从室温升至 600,保持 20 s 以确保待测样品裂解完全,进行 GC-MS 在线分析。色谱柱为 HP-5MS 毛细管柱(30 m 0.25 mm 0.25 m);柱温 250,程序升温:初始温度55 保持1 min,然后以15 /min 升至250 并保持3 min;分流比为501;流速 1 mL/min;载气为氦气;进样口温度为 300;传输线温度为 280。质谱采用 EI 离子源,离子源温度 250,扫描范围 25 400 u18-19。1.3.4 UHPLC-TOF-MS 分析通过 UHPLC-TOF-MS 分析 AIE 和 EAEI 的化学组成。色谱条件:色谱柱 ACQUITY UPLC HSS T3 柱(100 mm 2.1 mm 1.8 m);柱温40,进样量3 L;正离子模式流动相,A 为 0.1%甲酸水,B 为 0.1%甲酸乙腈;负离子模式流动相,A 为 2 mmol/L 乙酸铵水溶液,B 为乙腈。梯度洗脱:0 2 min,95%A;2 30 min,95%7%A;30 47 min,7%A;47 53 min,7%0%A;53 54 min,0%95%A;54 58 min,95%A。质谱条件:AB 5600 Triple TOF 质谱仪为电喷雾离子源:正负离子检测模式;一级采集范围(m/z)为50 1 200;轰击能量30 eV,每50 ms 10 张二级谱图。ESI 离子源参数设置如下:雾化气压(GS1)414 kPa;辅助气压 414 kPa;气帘气压 241 kPa;温度650;喷雾电压 5 000 V(正离子模式)或-4 000 V(负离子模式)20。2 结果与分析2.1 提取工艺对靛蓝提取物主要成分的影响不同提取工艺处理后的靛蓝提取物的主要成分分布见表 1。由表可知,市售靛蓝膏中靛蓝质量分数为 2.09%,刚达到 2020 年版中华人民共和国药典标准,并且其灰分质量分数高达 65.23%。经简单地预处理去杂得到的靛蓝粗提物中靛蓝含量提高至未处理时的 3 倍,灰分也明显减少,但仍有较多4 生 物 质 化 学 工 程第 57 卷的 SiO2类非石灰类杂质;以靛蓝粗提物为原料,经过酸化、还原和溶剂萃取等工艺得到的 AIE、GRIE 和表 1 不同提取工艺处理后的靛蓝提取物的成分分布Table 1 Composition distribution of indigo extract treated withdifferent extraction processes样品samples靛蓝/%indigo灰分/%ash content酸不溶灰分/%acid-insoluble ash content靛蓝膏 indigo paste2.0965.23ICE6.2249.5310.58AIE20.1313.355.84GRIE851.701.59EAEI353.932.73EAEI 中的靛蓝含量均得到大幅提升,灰分含量也大幅减少。其中酸化处理步骤可以除去靛蓝粗提物中绝大多数碳酸钙、氢氧化钙等,所以灰分质量分数由接近 50%变为 15%以下;而在酸化基础上继续采用葡萄糖还原工艺能除去大量的多糖、胶质体、植物纤维、叶绿素等有机物和石灰类等无机物,以及少量酸不溶灰分杂质,得到高纯度靛蓝,但在酸化基础上继续采用乙酸乙酯萃取工艺,其提纯效果不佳。由此可见,葡萄糖还原工艺是一种绿色、高效、简便的高纯度靛蓝分离纯化新工艺,可解决靛蓝纯化效率低和易造成环境污染等现实问题。靛蓝一直以来被认为是青黛的主要活性物质,由不同工艺制备得到靛蓝提取物样品中的靛蓝含量显著高于原料中靛蓝的含量,由实验结果可知,可以根据不同青黛靛蓝含量需要选择不同工艺。2.2 Py-GC-MS 法分析靛蓝提取物挥发性成分对 4 种靛蓝提取物进行 Py-GC-MS 裂解气质(室温 600)成分分析。4 个样品的裂解气质图及其化学组成分别见图 1 和表 2。a.ICE;b.AIE;c.GRIE;d.EAEI图 1 靛蓝提取物的 Py-GC-MS 分析Fig.1 Analysis of indigo extract by Py-GC-MS由表 2 可知,靛蓝提取物裂解后化合物组成复杂,12 个碳以下的小分子种类较少,12 碳及以上种类多且 GC 含量较高,因此,以 12 个碳为分界点来对裂解产物的组分进行分类。由表可知,ICE、AIE、GRIE 和 EAEI 4 个样品的裂解产物中12 个碳以下的小分子组分较少,分别为1.76%、9.73%、13.04%第 5 期王成章,等:基于 Py-GC-MS 和 UHPLC-TOF-MS 研究不同靛蓝提取物的化学组成差异5 和 4.25%;而 12 20 个碳的组分较多,分别为 7.91%、57.09%、54.4%和 62.7%。表 2 不同靛蓝提取物裂解组分的 Py-GC-MS 分析结果Table 2 Py-GC-MS analysis results of different indigo extract pyrolysis components保留时间retention time化合物名称compound name分子式molecular formulaGC 含量 GC content/%ICEAIEGRIEEAEI1.9926,6-二甲基富烯 6,6-dimethylfullereneC8H100.993.718苯甲醛 benzaldehydeC7H6O0.434.615均三甲苯 mesityleneC9H121.765.004.734右旋萜二烯 D-terpenadieneC10H160.234.979苯乙醛 phenylacetaldehydeC8H8O0.195.629间甲酚 m-cresolC7H8O0.297.137n-乙酰苯胺 n-acetanilideC8H9NO3.197.9811-甲基萘 1-methylnaphthaleneC11H100.188.017吲哚 indoleC8H7N0.603.710.238.6911-十四烯 1-tetradecaneC14H280.108.8467-甲基吲哚 7-methylindoleC9H9N0.318.871十二醛 dodecanalC12H24O0.428.9782,7-二甲基萘 2,7-dimethylnaphthaleneC12H120.189.7062-吲哚酮 2-oxindoleC8H7NO0.514.331.979.8132,4-二叔丁基苯酚 2,4-di-tert-butylphenolC14H22O0.8010.193月桂酸 lauric acidC12H24O20.151.5010.408十六烷 hexadecaneC16H340.1211.680靛红 isatinC8H5NO22.991.8711.691肉豆蔻酸 myristic acidC14H28O20.281.684.8911.838靛蓝 indigoC16H10N2O27.917.8112.368正十五酸 n-pentadecanoic acidC15H30O22.1412.959棕榈油酸 palmitoleic acidC16H30O220.474.4613.4713.072棕榈酸 palmitic acidC16H32O20.6518.7026.6213.097色胺酮 tryptophan ketoneC15H8N2O22.4313.56710-顺-十七碳烯酸 10-cis heptadecaenoic acidC17H32O20.7013.646反式油酸 elaidic acidC18H34O21.8213.678十七烷酸 heptadecane acidC17H34O21.0113.8221-十九烯 1-nonadeceneC19H380.9814.009叶绿醇 chlorophyll alcoholC20H40O3.1414.183亚油酸 linoleic acidC18H32O212.4614.2533-十二炔 3-dodecyneC12H229.611.3214.259油酸 oleic acidC18H34O27.1617.5214.307硬脂酸 stearic acidC18H36O26.532.1914.649共轭亚油酸 conjugated linoleic acidC18H32O22.120.4814.748亚麻酸 linolenic acidC18H32O20.28 此外,从表 2 中还可以看出,仅在 ICE 与 EAEI 中检测到靛蓝,说明 AIE 和 GRIE 中的靛蓝已完全裂解。ICE 中仅检测到 2 种裂解产物,且 GC 含量之和小于 10%,说明 ICE 中有机物成分很少。AIE 中检测到 23 种裂解产物,说明酸化工艺可以提高产品中有机物含量,且检测到较多酸类物质。GRIE 中检测到 9 种裂解产物,主要是吲哚类与酸类,应是由靛蓝裂解生成。EAEI 共检测到 19 种裂解产物,且分类较多,中等极性产物含量也较高,说明乙酸乙酯萃取工艺可得到较多的有机物,导致裂解产物组成较为复杂。2.3 UHPLC-TOF-MS 法分析靛蓝提取物化学组成利用 UHPLC-TOF-MS 对 AIE 和 EAEI 中化学成分进行检测分析,通过与 NIST 08 质谱数据库比对,6 生 物 质 化 学 工 程第 57 卷并利用面积归一法得到各成分的相对峰面积,其 UHPLC-TOF-MS 图谱及化学组分分类分别见图 2 和表 3。图 2 2 种靛蓝提取物 AIE(a)、EAEI(b)的 UHPLC-TOF-MS 分析Fig.2 UHPLC-TOF-MS analysis of AIE(a)and EAEI(b)由表 3 可知,AIE 中共鉴定出 61 种化合物,相对峰面积为 15.28%;EAEI 中鉴定出 184 种化合物,主要包括酸类、多糖类、黄酮类、生物碱类、苷类、多酚类、醛类、蛋白类、酯类 9 类物质,相对峰面积为56.04%。酸化-靛蓝提取物通过乙酸乙酯萃取工艺处理后,酸类物质由 7.83%增加到 48.72%;多酚类物质由0.43%增加到4.56%;黄酮类物质由0.33%增加到1.71%。可见,乙酸乙酯萃取工艺对靛蓝提取物中酸类、多酚类、黄酮类等实现了有效富集。表 3 不同靛蓝提取物组分的 UHPLC-TOF-MS 分析结果Table 3 UHPLC-TOF-MS analysis results of different indigo extract components类别categoryAIEEAEI数量amount相对峰面积/%relative peak area数量amount相对峰面积/%relative peak area酸类 acids317.839748.72多糖类 polysaccharides40.4640.02黄酮类 flavonoids40.33191.71生物碱类 alkaloids155.98350.75苷类 glycosides0060.08多酚类 polyphenols40.4384.56醛类 aldehyde0080.14蛋白类 proteins0020.02酯类 esters30.2550.04 在相同分析条件下,EAEI 中检测到的有机化合物种类远远多于 AIE 中的,可能是因为 AIE 中部分有机化合物含量太低,未达到检测限,所以未被检测出;而乙酸乙酯萃取过程对这些有机物实现了有效富集,使得 EAEI 中检测到的化合物增多。两种样品中共检测到16 种相同化合物,其中酸类化合物9 种,分别为12-羟基十二烷酸、蓖麻油酸、肉豆蔻烯酸、5-氨基-2-对甲苯基苯磺酸、8-(4-磺基苯基)辛酸、肉豆蔻酸、油酸、棕榈酸和硬脂酸;黄酮类化合物 1 种,为小豆蔻素;生物碱类化合物 3 种,分别为吲哚阿霉素、2-(3-吡啶基)-苯并咪唑和4-羟基喹啉;酯类化合物1 种,为雷公藤内酯醇;多糖类化合物2 种,分别为蔗糖和-环糊精。基于 UHPLC-TOF-MS 全面分析靛蓝提取物样品中的化学成分,结果显示 EAEI 中的有机化合物明显多于 AIE,说明乙酸乙酯萃取工艺可对靛蓝酸化物中多种有机化合物实现有效富集。3 结 论3.1 以靛蓝膏为原料,利用不同工艺处理制备得到靛蓝粗提物(ICE)、酸化-靛蓝提取物(AIE)、葡萄第 5 期王成章,等:基于 Py-GC-MS 和 UHPLC-TOF-MS 研究不同靛蓝提取物的化学组成差异7 糖还原-靛蓝提取物(GRIE)和乙酸乙酯萃取-靛蓝提取物(EAEI)。对 4 种靛蓝提取物中靛蓝成分测定结果表明:相比于靛蓝膏,4 种提取工艺制备的靛蓝提取物中靛蓝质量分数均得到显著提高,其中,GRIE 中靛蓝质量分数达到 85%。3.2 采用 Py-GC-MS 技术对靛蓝提取物中挥发性成分进行分析,结果表明:ICE、AIE、GRIE 和 EAEI 的裂解产物中含有 12 20 个碳的组分较多,相应的 GC 含量分别为 7.91%、57.09%、54.4%和 62.7%。其中,EAEI 的裂解产物中中等极性产物含量较高,说明乙酸乙酯萃取工艺可得到较多的有机物。3.3 采用 UHPLC-TOF-MS 技术对 AIE 和 EAEI 中的化学成分进行分析,结果表明:AIE 和 EAEI 分别鉴定出 61 和 184 种化合物,主要包括酸类、多糖类、黄酮类、生物碱类、苷类、多酚类、醛类、蛋白类、酯类 9 类物质,其中,乙酸乙酯萃取工艺对靛蓝提取物中酸类、多酚类、黄酮类等实现了有效富集。参考文献:1鞠紫昕.植物靛蓝染料的结构与性能研究D.上海:东华大学,2020.2杨明,刘泽玉,苏柘僮,等.“蓝”类植物中的前体物质转化为“靛”的机制探讨J.中国中药杂志,2010,35(7):928 931.3陈雪梅.青黛炮制过程基本原理研究D.成都:成都中医药大学,2008.4马乐乐,许润春,张定堃,等.古今青黛饮片形式的变化:靛花与粗靛质量的系统对比研究J.中国中药杂志,2021,46(13):31883197.5杨明,张定堃,贺亚男,等.青黛产业高质量发展的挑战与策略J.中国中药杂志,2021,46(13):3171 3179.6SUN Q,LENG J,TANG L,et al.A comprehensive review 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