实验八脂肪酸β氧化作用.ppt

实验八实验八脂肪酸脂肪酸-氧化作用氧化作用一、一、目的与任务目的与任务了解脂肪酸的了解脂肪酸的-氧化作用氧化作用通过测定和计算反应液内丁酸氧化生成丙酮的量，掌通过测定和计算反应液内丁酸氧化生成丙酮的量，掌握测定握测定-氧化作用的方法及其原理氧化作用的方法及其原理二、实验原理二、实验原理 在肝脏中，脂肪酸经在肝脏中，脂肪酸经氧化作用生成乙酰辅氧化作用生成乙酰辅酶酶A A。2 2分子乙酰辅酶分子乙酰辅酶A A可缩合生成乙酰乙酸。乙可缩合生成乙酰乙酸。乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成-羟丁羟丁酸。酸。乙酰乙酸、乙酰乙酸、-羟丁酸和丙酮总称为酮体羟丁酸和丙酮总称为酮体。酮体为机体代谢的中间产物。酮体为机体代谢的中间产物。问题：为什么要生成酮体，其意义是什么？问题：为什么要生成酮体，其意义是什么？氧氧化化的的生生化化历历程程 乙酰乙酰CoACoAFAD FADH2 NAD+NADHRCH2CH2CO-SCoA脂酰脂酰CoA CoA 脱氢酶脱氢酶脂酰脂酰CoACoA-烯脂酰烯脂酰CoA CoA 水化酶水化酶-羟脂酰羟脂酰CoA CoA 脱氢酶脱氢酶-酮酯酰酮酯酰CoA CoA 硫解酶硫解酶RCHOHCH2COScoARCOCH2CO-SCoA RCH=CH-CO-SCoA +CH3COSCoAR-COScoAH H2 2O O CoASHTCATCA 乙酰CoA 乙酰CoACoA 乙酰乙酰CoACoAATPATPH H2 20 0呼吸链H H2 20 0呼吸链 乙酰CoACoA 乙酰CoA 乙酰CoA 乙酰CoA酮体的生成酮体的生成肝脏肝脏羟甲基戊二酸单酰羟甲基戊二酸单酰CoA（HMGCoA）脂肪酸脂肪酸硫解酶硫解酶2CH3COSCoACH3COCH2COSCoA乙酰乙酰乙酰乙酰CoAHOOCCH2-C-CH2COSCoA|CH3OH|HMG-CoA裂解酶裂解酶HMG-CoA合成酶合成酶CH3COSCoACoASH-氧化氧化CH3COCH2COOHCH3CHOHCH2COOH乙酰乙酸乙酰乙酸丙酮丙酮-羟丁羟丁酸酸脱氢酶脱氢酶CO2NADH+H+NAD+CH3COCH3脱羧酶脱羧酶CoASH 2NaOH+I 2NaOH+I2 2 NaOI+NaI+H NaOI+NaI+H2 2O O CH CH3 3COCHCOCH3 3+3NaOI CHI+3NaOI CHI3 3+CH+CH3 3COONa+2NaOH COONa+2NaOH 剩余的碘用标准硫代硫酸钠溶液滴定：剩余的碘用标准硫代硫酸钠溶液滴定：NaOI+NaI+2HCl INaOI+NaI+2HCl I2 2+2NaCl+H+2NaCl+H2 2O O I I2 2+2Na+2Na2 2S S2 2O O3 3 Na Na2 2S S4 4O O6 6+NaI+NaI碘仿碘仿 本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮在碱性条件下，与碘生成碘仿。反应式：在碱性条件下，与碘生成碘仿。反应式：在碱性条件下，与碘生成碘仿。反应式：在碱性条件下，与碘生成碘仿。反应式：问题：为什么说本实验的关键是制备新鲜的肝糜问题：为什么说本实验的关键是制备新鲜的肝糜?根据滴定对照与滴定样品所消耗的硫根据滴定对照与滴定样品所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算由丁代硫酸钠溶液体积之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。酸氧化生成丙酮的量。三、实验器材三、实验器材5ml5ml微量滴定管微量滴定管恒温水浴恒温水浴吸管吸管剪刀剪刀50ml 50ml 锥形瓶锥形瓶漏斗漏斗试管及试管架试管及试管架四、试剂与材料四、试剂与材料鲜猪肝鲜猪肝：0.5g/ml0.5g/ml0.5%0.5%淀粉溶液淀粉溶液：0.5g0.5g淀粉溶解于水中，定容至淀粉溶解于水中，定容至100ml100ml0.9%0.9%氯化钠溶液：氯化钠溶液：0.9g0.9g氯化钠溶解于水中，定容至氯化钠溶解于水中，定容至100ml100ml0.5M0.5M丁酸溶液丁酸溶液：取：取5ml5ml丁酸溶于丁酸溶于100ml0.5M100ml0.5M氢氧化钠溶液中氢氧化钠溶液中15%15%三氯乙酸溶液：三氯乙酸溶液：15g15g三氯乙酸溶解于水中，定容至三氯乙酸溶解于水中，定容至100ml100ml10%10%氢氧化钠：氢氧化钠：10g10g氢氧化钠溶解于水中，定容至氢氧化钠溶解于水中，定容至100ml100ml10%10%盐酸：盐酸：10ml10ml浓盐酸稀释至浓盐酸稀释至100ml100ml0.2M0.2M碘液碘液：25.4gI25.4gI2 2+50gKI+50gKI定容到定容到1000ml1000ml，用标准，用标准0.05M0.05M硫代硫酸钠标定硫代硫酸钠标定标准标准0.01M0.01M硫代硫酸钠硫代硫酸钠：将已标定的：将已标定的0.05M0.05M硫代硫酸钠稀释成硫代硫酸钠稀释成0.01M0.01M1/15M PH7.61/15M PH7.6磷酸缓冲液磷酸缓冲液：1/15M Na1/15M Na2 2HPOHPO4 4 86.8ml+1/15M NaH86.8ml+1/15M NaH2 2POPO4 4 13.2ml 13.2ml五、操作步骤五、操作步骤肝糜制备：取肝用肝糜制备：取肝用0.9%NaCl0.9%NaCl冲洗污血，用滤纸吸去表面水冲洗污血，用滤纸吸去表面水分。称分。称肝组织肝组织5g5g置研钵中，加置研钵中，加少量的少量的0.9%0.9%NaClNaCl研成细浆。研成细浆。再加再加0.9%NaCl0.9%NaCl到到总体积总体积10ml10ml。取取2 2个个50ml50ml锥形瓶，各加入锥形瓶，各加入3ml 1/15M3ml 1/15M磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液（pH7.6pH7.6）。其中一个锥形瓶中加）。其中一个锥形瓶中加2ml2ml正丁酸正丁酸，另一个锥形，另一个锥形瓶中不加正丁酸（对照）。再各加入瓶中不加正丁酸（对照）。再各加入2ml2ml肝糜肝糜。混匀于。混匀于4343恒温水浴恒温水浴内保温内保温1.51.5小时小时。取出锥形瓶，各加入取出锥形瓶，各加入3ml 15%3ml 15%三氯乙酸三氯乙酸，混匀，混匀，对照瓶内对照瓶内追加追加2ml2ml正丁酸正丁酸，混匀，混匀，静置静置15min15min。分别。分别过滤过滤，滤液收集，滤液收集在在2 2支试管中。支试管中。酮体测定：吸取两种酮体测定：吸取两种滤液各滤液各2ml2ml分别放入另分别放入另2 2个锥形瓶中，个锥形瓶中，各加各加3ml 0.1M3ml 0.1M碘液碘液和和3ml 10%NaOH3ml 10%NaOH。摇匀，。摇匀，静置静置10min10min。加。加入入6ml 10%6ml 10%盐酸盐酸中和。中和。用用0.01M0.01M标准硫代硫酸钠标准硫代硫酸钠滴定剩余的碘。滴至滴定剩余的碘。滴至浅黄色浅黄色时，时，加入加入3 3滴滴0.1%0.1%淀粉淀粉作指示剂。摇匀，作指示剂。摇匀，滴至蓝色消失为止滴至蓝色消失为止。记录所消耗的硫代硫酸钠液的记录所消耗的硫代硫酸钠液的mlml数。数。问题：问题：15%三氯乙酸的作用是什么三氯乙酸的作用是什么?肝脏的丙酮含量（肝脏的丙酮含量（mmol/gmmol/g）=（A AB B）*C CNaNa2 2S S2 2O O3 3 *1/6*1/6*5 5A A：滴定对照所消耗的：滴定对照所消耗的0.01M0.01M硫代硫酸钠溶液的硫代硫酸钠溶液的mlml数数B B：滴定样品所消耗的：滴定样品所消耗的0.01M0.01M硫代硫酸钠溶液的硫代硫酸钠溶液的mlml数数C CNaNa2 2S S2 2O O3 3:标准硫代硫酸钠溶液的浓度（标准硫代硫酸钠溶液的浓度（M M）1/61/6：1mol1mol标准硫代硫酸钠相当于丙酮的量标准硫代硫酸钠相当于丙酮的量六、结果计算六、结果计算七七.课后研讨题课后研讨题1 1、总结本实验操作的关键环节和注意事项总结本实验操作的关键环节和注意事项。2 2、酮体为什么只能在肝外组织进行作用？酮体为什么只能在肝外组织进行作用？3 3、什么叫酮体？为什么正常代谢时产生的酮体含量少？什么叫酮体？为什么正常代谢时产生的酮体含量少？在什么情况下血中酮体含量增高，而尿中也能出现酮体？在什么情况下血中酮体含量增高，而尿中也能出现酮体？4 4、为什么测定碘仿反应中剩余的碘可以计算出样品中的为什么测定碘仿反应中剩余的碘可以计算出样品中的丙酮的含量？丙酮的含量？5 5、查阅资料，介绍在哪些情况下会促进脂肪酸的氧化查阅资料，介绍在哪些情况下会促进脂肪酸的氧化?。6 6、查阅资料，介绍酮体检测的方法，参考值及临床意义查阅资料，介绍酮体检测的方法，参考值及临床意义？八、汇报要求八、汇报要求以大组为单位课后总结结果，讨论，制作一份以大组为单位课后总结结果，讨论，制作一份ppt，课内讨论汇报。，课内讨论汇报。ppt内容包括：实验目的，实验条件的选择，内容包括：实验目的，实验条件的选择，各小组实验结果，计算结果和分析，课后研讨各小组实验结果，计算结果和分析，课后研讨题，实验体会等。题，实验体会等。此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！16