亨德拉病的病原与流行病学特征研究进展.pdf

中国草食动物科学2023 年亨德拉病的病原与流行病学特征研究进展宿志民1，潘柳婷1，段鹏1，李安东1，李安秀2，王美君3，宋晓晖4，孙雨4（1.山东畜牧兽医职业学院，潍坊 261061；2.烟台市牟平区大窑街道畜牧兽医站，烟台 264000；3.北京科牧丰生物制药有限公司，北京 102600；4.中国动物疫病预防控制中心，北京 102600）摘要：亨德拉病渊Hendra disease冤是由亨德拉病毒渊Hendra virus袁HeV冤引起的一种高致死性的人兽共患病袁主要感染草食家畜马匹以及与马匹密切接触的人遥 随着近年来输入性疾病的风险越来越大袁各类新发病也逐年上升袁人们对外来病的防控意识亟待加强遥为明确该病发生的关键因素和防控本病的关键环节袁文章从病原学特点尧流行病学尧易感动物尧临床诊断等方面介绍了亨德拉病袁阐述了该病的公共卫生影响袁为亨德拉病的流行病学研究与临床诊断的深入研究提供了科学依据遥关键词：亨德拉病曰病原学特点曰流行病学特征曰诊断检测中图分类号：S855.3文献标志码：A文章编号：2095-3887（2023）05-0042-05收稿日期：2023-06-11基金项目：国家重点研发计划（2022YFD1800500）作者简介：宿志民（1984-），男，讲师，学士，研究方向为畜牧兽医通信作者：孙雨（1983-），男，正高级兽医师，博士，研究方向为重大动物疫病预防控制XU Zhimin1，PAN Liuting1，DUAN Peng1，LI Andong1，LI Anxiu2，WANG Meijun3，SONG Xiaohui4，SUN Yu4（1.Shandong Vocational Animal Science and Veterinary College，Weifang 261061，China；2.Yantai AnimalHusbandry and Veterinary Station，Yantai 264000，China；3.Beijing Kemufeng Biopharmaceutical Co.，Ltd.，Beijing 102600，China；4.China AnimalDisease ControlCenter，Beijing 102600，China）Hendra disease is a highly lethal viral disease caused by the Hendra virus（HeV），mainly affecting horses，as well aspeople in close contact with horses.With the increasing risk of imported diseases in recent years and the increasing incidence ofvarious new diseases，peoples awareness of prevention and control of foreign diseases urgently needs to be strengthened.In orderto clarify the key factors that contribute to the occurrence of Hendra disease and the key links in its prevention and control，thisarticle introduced Hendra disease from the perspectives of pathogenic characteristics，epidemiology，susceptible animals，andclinical diagnosis.It elaborated on the public health impact of the disease，and provided a scientific basis for in-depthepidemiological research and clinical diagnosis of Hendra disease.Hendra disease；etiology characteristics；epidemiological characteristics；diagnostic testingdoi：10.3969/j.issn.2095-3887.2023.05.007近年来，以炭疽、布鲁氏菌病为例的各种人兽共患病，以非洲猪瘟、牛结节皮肤病为例的各种外来疫病从边境地区传入我国，严重威胁着公众健康水平和生活质量，直接或间接地影响我国畜牧业发展和食品安全等诸多领域。对于人兽共患病的防治，农业农村部于 2022 年9 月 14 日发布了关于落实 全国畜间人兽共患病防治规划（20222030 年）的通知。该规划中强调对重点防治病种，国家制定防治技术规范、标准，根据防控需要制定应急实施方案，实行全国统防、部门联防，一病一策、精准治理，区域协同、有效防控。其中着重提出了对于亨德拉病、尼帕病毒性脑炎等已在境外流行还未传入我国的烈性传染病，各行业应加强认识、开展联防联控、加强边境监测能力建设，力争做到有效降低该类外来疫病的传入和扩散。亨德拉病是由亨德拉病毒引起的一种高致死性的人与动物共患的病毒性疾病，主要感染草食家畜马匹以及42第 43 卷第 5 期与马匹的密切接触者咱1-3暂。目前，亨德拉病毒是亚太地区人畜共患病的重要新兴病原之一，被列为生物安全四级病毒，致死率在 40%75%之间，远远高于新冠病毒。感染这种病毒的主要症状有发热、乏力、咳嗽、厌食、肌痛和恶心等。该病确诊主要依靠实验室检测方法，例如免疫学实验、病原学方法、分子实验等。由于生物安全操作要求较高，病原学研究较少，传染来源与传播途径较为复杂，亟需对其相关的流行病学与病原学加强认识，为此，文章对亨德拉病的病原与流行病学特征研究进展作一综述，为该病的综合防控提供参考。1 病原学特点1.1 分类地位亨德拉病毒最初被称为马麻疹病毒，现将其归为副黏病毒科、亨尼帕病毒属。与副黏病毒科中多数病毒相比，亨德拉病毒具有宿主范围宽（可感染果蝠、马、犬、猫、豚鼠和人），无血凝特性和神经氨酸酶活性等咱4暂特点。1.2 病原的分子生物学特征亨德拉病毒含有一个不分节段的负链 RNA 基因组，基因组全长 182234nt，和尼帕病毒一样也编码 6 个结构蛋白：核衣壳蛋白（N，562 279 bp），融合蛋白（F，6 3468 676 bp），基质蛋白（M，4 9846 342 bp），糖蛋白（G，8 68011 243 bp），大蛋白（L，11 24718 201 bp），磷酸化蛋白（P，22834980bp）。其中 P 基因还编码两种非结构蛋白：V 蛋白和 C 蛋白。N 蛋白结合负链 RNA 形成螺旋状的核衣壳，一个 N 蛋白可以结合 6 个核苷酸，行使转录功能和复制的模板功能咱5-7暂。亨德拉病毒的 F0 前体蛋白在其序列的 K109（GDVK L）被水解成由二硫键相连接的 F1 和 F2 两个亚基，二硫键相连接的 F1 和 F2 两个亚基介导了病毒外膜和靶细胞膜的融合。V 蛋白通过和 STAT1、STAT2 蛋白结合形成高分子的复合物，在胞质内隔离了 STAT1 和STAT2，防止了 STAT 的激活，从而抑制干扰素诱导的细胞抗病毒反应。L 蛋白和 P 蛋白相互作用形成复合体，该聚合酶复合体通过 P 磷酸化蛋白和组装的 N 蛋白间的相互作用而形成转录复合体咱5-7暂。亨尼帕病毒属的两个成员（亨得拉病毒和尼帕病毒）的毒力、宿主范围和细胞嗜性与 G 蛋白、F 蛋白和 P 蛋白有很大的关系，前二者通过结合细胞表面的受体使病毒和宿主细胞膜融合，决定了该病的宿主范围和细胞嗜性，而 P 基因通过干扰细胞对干扰素的反应而决定了病毒的毒力。M 蛋白为基质蛋白形成病毒外膜的一部分咱8暂。1.3 病原的形态学特征和培养特性亨德拉病毒的超显微结构具有副黏病毒的特征，病毒颗粒呈多晶体排列，从球形到丝状，形态各异，病毒粒子大小不均（38600nm），核蛋白呈螺旋对称。和其他副黏病毒不同的是该病毒表面有 2 个分别为 15nm 和 18nm的突起咱1-2暂。亨德拉病毒的体外培养比较容易，可以在多种哺乳动物的原代和传代细胞系中增殖，包括 Vero、MDCK、BHK、RK13、LLC-MK2 和 MRC5 等。通常情况下用 Vero细胞进行病原增殖，感染细胞的病变特征是形成合胞体，将感染细胞染色后观察，可见在细胞核和胞质中存在数量不等的包涵体。该病毒也可存活于鸡胚内咱1-3暂。1.4 理化特性亨德拉病毒虽然致病力强，但是对理化因素的抵抗力不强，离开动物体后不久即死亡。亨德拉病毒由于具有囊膜，故易被脂溶剂灭活。一般的消毒剂和高温也可灭活。在澳大利亚暴发亨德拉病时，研究者将人和马的血清经 56保温 30 min，再用含 0.5%吐温-20 和0.5%Triton-X100 的 PBS 5 倍稀释，病毒即失去感染性咱1-3暂。2 流行病学2.1 传染源狐蝠科的果蝠被认为是该病毒的自然宿主。在澳大利亚开展的一次大规模血清流行病学调查中发现，黑果蝠、灰首果蝠、小红果蝠和眼镜果蝠亨德拉病毒抗体呈阳性，并且可以从这些果蝠的胎儿组织和血液中分离到该病毒。可以认为，黑果蝠、灰首果蝠、小红果蝠和眼镜果蝠既是亨德拉病毒的保毒者，也是传染源。2.2 传播途径亨德拉病毒的传播途径目前尚不完全清楚。Barker咱9暂研究发现，寄生在澳大利亚狐蝠的一种多毛硬蜱可能和该病毒从狐蝠传播到马和其他动物有关。Field咱10暂认为翼龙蝙蝠（飞狐）是该病毒的天然宿主，尿液是狐蝠的主要排泄途径，狐蝠传播给马的最简单的传播方式是马接触（口鼻、结膜）受感染的狐蝠尿液（直接接触、采食尿液污染的饲料、表面接触）。目前尚未完全确认该病毒是否能在马属动物之间进行传播，但是在亨德拉病毒的自然暴发期间，马与马之间似乎有相互传播的迹象，但是感染猫却可以将病毒传染给马。感染动物如马、猫的肾脏、膀胱和尿液中均能分离到该病毒，且尿液中的滴度很高，所以认为尿液是感染动物排毒的主要途径，被尿液污染的饲料可能是重要的传播方式。亨德拉病毒可以通过黑综述与专论43中国草食动物科学2023 年狐蝠垂直传播，黑狐蝠也能被感染，但不发病。有的蝙蝠可被作为宠物饲养，但对饲养蝙蝠的人员进行的调查却没有检测到亨德拉病毒抗体。迄今尚未发现节肢动物作为生物媒介来传染本病的证据。人感染该病毒主要是因为接触了病马的组织或体液所致，到目前还没有发现人与人之间传播的证据。其他可能的传播方式有流产胎儿和生殖道排泄物咱9袁11-12暂。3 易感动物3.1 易感动物目前怀疑黑狐蝠是该病毒的天然宿主，由黑狐蝠传染给马，人密切接触感染马后被感染发病。迄今为止，马是唯一能被自然感染的家畜。猫、豚鼠和小鼠可以在试验中被感染并可能发生致死的情况，其中兔子出现了血清学转化，但不能引起病毒复制的原因尚不清楚。人感染主要是因为接触病马或其分泌物所致，所以与病马有接触史的人是高危人群。3.2 流行特征与分布流行病学调查结果显示，亨德拉病的暴发时间和果蝠的繁殖季节有一定的联系。该病目前仅在澳大利亚暴发过，在巴布亚新几内亚北海岸的马丹、摩斯比港及新不列颠均发现了亨德拉病毒血清阳性的蝙蝠咱4袁7袁11暂4 对动物的致病性马的潜伏期一般在 811 d，最长不超过 16d。马通常为急性、高热性传染，出现呼吸急促、体温异常至 41毅C 左右、异常出汗、头部浮肿、黏膜冲血和共济失调等症状。晚期因血管损伤，可见鼻腔和口腔有大量黄色泡沫液体排出。如病毒损伤了肺部和脑部，可导致出现犬瘟热和麻疹样症状。尸检可见肺极度充血、水肿。病理学检查可见肺充满了大量液体。血管严重变性，且内皮细胞有合胞体形成咱3袁13-14暂。研究发现，给试验豚鼠接种亨德拉病毒可导致全身性血管疾病而死亡。感染的豚鼠 712 d 出现呼吸困难，发病后 24h 死亡。尸检表现为尸体发绀，胃肠道充血、水肿。组织学病变主要在动脉和静脉，毛细血管无病变，肾、淋巴结、脾脏、胃肠道、血管和骨骼肌有病变。猫接种后表现的症状和马相似：抑郁伴有发热，呼吸困难、频率加快，步伐加速，从出现症状后 24h 内死亡。其特点是广泛性的血管疾病，尤其是肺部严重水肿，伴有不同程度的充血、出血和坏死、胸腔积水，胃肠道、淋巴结和血管水肿。黑果蝠皮下接种该病毒，出现亚临床症状而产生抗体咱3袁13-14暂。5 诊断5.1 临床诊断Meulendyke 等咱15暂研究发现，对于马来说，其感染亨德拉病后并不都会发生死亡，有些马发病后仍可康复，其中病死的马匹会出现包括鼻腔起泡、口鼻分泌物、呼吸困难、心动过速（120 次/min）、体温升高（41）以及大量出汗，病马单侧躺卧，死亡前抽搐。Eaton 等咱16暂研究发现，人感染后出现的症状与马有差别，在人上主要表现为脑炎。根据人和动物有无接触病原的经历，结合亨德拉病的流行病学、临床症状可做出初步诊断。但是该病临床症状经常与流感、急性细菌感染巴氏杆菌病、中毒性疾病、炭疽、马病毒性动脉炎、军团菌病、非洲马瘟等相混淆，应当实验室检测以确诊咱2袁16暂。5.2 实验室诊断5.2.1 病毒分离由于亨德拉病毒感染人群的途径未明及缺乏有效的疫苗，因此在采集病料和血样时要做好安全防护。病毒的分离需要在生物安全水平四级实验室中进行且需要最高安全程序。用于实验室诊断的样品最好是动物发病初期的血液样品、病死动物的肺脏、脑组织以及肾脏或者其他脏器。同时本病毒对环境因素较敏感，因此最好在低温条件下储藏和运输咱3袁17暂。Daniels 等咱18暂2002 年建立了一种快速检测此病毒的方法病毒蚀斑法，相较于传统病毒分离方法，该方法大大节省了工作时间及工作量。5.2.2 电子显微镜检查亨德拉病毒在细胞培养物中的效价达 108PFU/mL，可通过电镜和免疫电镜来观察培养物中的病毒结构、其他超微结构和抗原反应咱3暂。亨德拉病毒容易引起 Vero 等细胞的典型细胞病变，形成细胞的合胞体。电镜下观察病毒粒子有典型的双绒毛样纤突结构咱17暂。5.2.3 RT-PCR 鉴定分子生物学检测方面，传统经典的技术为巢氏 PCR检测方法，可实现对病毒核酸的灵敏检测。对于组织、脑脊（髓）液、细胞培养物，可通过巢式 PCR 来扩增病毒的M 基因及其他相对保守的基因，该方法特异性较强。澳大利亚的疾病控制与预防中心建立了亨德拉病毒的诊断性 PCR，该方法通过扩增病毒的 N 基因对扩增阳性片段进行序列测定分析，以此来做出判断。该方法在不影响巢氏 PCR 核酸检测方法特异性的同时，进一步提高了核酸检测的敏感性。另外，Smith 等针对亨德拉病毒 M 基44第 43 卷第 5 期因建立了较为先进的实时荧光定量 RT-PCR 方法，可在接到标本后 4h 内得到检测结果，又进一步提高了核酸检测的敏感性。近几年随着分子生物技术的不断发展，新的检测技术不断出现，已有关于该病毒相关核酸恒温扩增快速检测技术的报道咱14袁17暂。5.2.4 抗原检测抗原检测主要有间接 ELISA、免疫荧光试验、免疫组化等。其中免疫组化是诊断亨德拉病毒最有效的方法之一，对于甲醛固定的组织，比较安全，且可对原始材料进行回顾性调查，可以对肺脏、纵膈淋巴结、脾脏、肾脏组织进行免疫组化试验，对于怀孕动物的检测还应当包括子宫、胎盘和胎儿组织咱5袁19-20暂。近几年，国外研究学者针对相应抗原检测的 ELISA 试剂盒及快速检测试纸条也有相关开发报道，不断完善了抗原的快速检测技术，为商品化的抗原检测试剂盒的开发打下了基础。5.2.5 抗体检测随着免疫学检测技术的不断发展，当前检测亨德拉病毒抗体的主要方法包括 ELISA 方法、间接免疫荧光试验、免疫印迹试验、ELISA 和血清中和试验等。目前，针对病毒的保守优势序列已开发出了相应血清抗体检测的快速诊断技术，如单克隆抗体、竞争 ELISA 和间接ELISA 检测技术咱5袁20暂。6 治疗与预后目前，尚未有用于人与动物免疫预防的疫苗咱1-3暂。由于亨德拉病毒对人和动物都有感染性，目前没有很好的治疗方法。临床上主要采用支持疗法，患者在病毒感染早期使用病毒唑有一定的作用。Bonaparte 等咱5暂发现，F 蛋白的 C 端高度保守的 7 肽重复序列在化学修饰后（酰胺化、乙酰化、通过聚乙二醇连接），提高了该短肽的可溶性和产量，延长了半衰期，修饰后的该短肽可以抑制亨德拉病毒和细胞膜的融合咱21暂。7 结语目前对于亨德拉病还是重在预防，其中最重要的就是严格检疫，及时淘汰病马，及时有效地开展动物流行病学监测，掌握我国野生动物（如蝙蝠）和家畜（如马）中是否存在自然感染及其分布特点；采取严格的预防措施，控制好传染源，如加强进出口马的检疫；捕杀病马，焚烧深埋，对家畜圈舍彻底消毒等。切断传播途径，采用隔离措施封锁疫区，不让易感动物接触传染源，同时对进疫区的动物进行血清学调查，找出传染源和传播途径。亨德拉病毒传播力强，危害巨大，传入风险较高。坚持“人病兽防、关口前移，从源头前端阻断人兽共患病的传播途径”对该病积极应对与防控起着十分重要的作用。因此，未来有必要加强对狐蝠行为生态学及其与病毒关系的研究。为什么亨德拉病毒突然出现，如何从果蝠传染到马，对不同的宿主为什么产生的临床症状明显不同，与果蝠接触的人血清学并非阳性，而人感染则是因为和感染马密切接触，其传播途径怎样，人能否产生潜伏性感染等等，均有待进一步的深入研究。参考文献1 金宁一，胡仲明，冯书章.新编人兽共患病学 M.北京：科学出版社，2007：121-130.2 田克恭.人与动物共患病 M.北京：中国农业出版社，2012.3 俞东征.人兽共患传染病学 M.北京：科学出版社，2009：865-875.4 Marsh G A，Wang L F.Henipaviruses：deadly zoonotic Paramyxo-viruses of bat origin science direct J.The Role of Animals inEmerging Viral Diseases，2014，6：125-142.5 Bonaparte M I，Dimitrov A S，Bossart K N，et al.Ephrin-B2 ligand is afunctional receptor for Hendra virus and Nipah virus J.Proc NatlAcad Sci，USA，2005，102（30）：10652-10657.6 Dang H V，Cross，Robert R W.Broadly neutralizing 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mutton sheep breeding is an important part of this region.The present situation，characteristics，existing problemsand weaknesses of Zhangjiakou mutton sheep industry were analyzed，and put forward reasonable suggestions from five aspects:optimizing the breeding variety structure，improving the standard breeding level，making the leading enterprises better andstronger，improving the green breeding level，and improving the policy guarantee measures.At the same time，it also provided fourways for the high-quality development of mutton sheep industry in Zhangjiakou，hoping to provide a theoretical basis for thetransformation and upgrading of mutton sheep industry in this region.Zhangjiakou；mutton sheep；development status；green breedingdoi：10.3969/j.issn.2095-3887.2023.05.008收稿日期：2023-07-03基金项目：张家口市 2023 年度社会科学研究项目（Q2023005）作者简介：任聪妍（1980-），女，畜牧师，大学本科，研究方向为畜牧技术和肉羊高效养殖通信作者：关琛（1993-），男，满族，助理畜牧师，硕士研究生，研究方向为肉羊高效养殖、疾病防治和农业文化遗产保护15Meulendyke K A，Wurth M A，McCann R O，et al.Endocytosis playsa critical role 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