微生物与免疫实验汇报.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,微生物与免疫实验汇报,实验小组：第二组,小组成员：麦嘉欣（汇报人）,刘育宏,贾晨飞,指导老师：王卓娅,实验一 肠杆菌科细菌鉴定,实验目的,熟悉肠杆菌科细菌鉴定程序和方法，学会分析其实验结果，得出正确的鉴定结论。,实验原理,肠杆菌科细菌，尤其是埃希菌属，志贺菌属和沙门菌属的细菌，,形态与染色性基本相同,（都是G-短杆菌），在非选择性平板上的培养特征也,难以区别,。因此，鉴别它们时必须依靠,生化反应特性,、,抗原特性,与,致病特性,等鉴定实验。,实验方法,一 配制培养基,二 EMB平板划线分离培养,三 EMB表面确定可疑菌落,四 双糖铁琼脂斜面培养基和半固体培养基纯培养,（一）生化反应鉴定（葡萄糖，乳糖，麦芽糖，甘露醇，蔗糖，吲哚，甲基红，Vp，枸橼酸盐）,（二）血清学鉴定,五 药物敏感试验,实验结果与讨论,（一）EMB平板划线,紫黑色，有金属光泽单菌落可初步鉴定,大肠埃希菌,菌落，粉红色或无色透明的单菌落可初步定为,志贺菌,或,沙门菌菌落,。,分析：产生,酸性物质,和伊红美蓝染料结合致使染料成,紫黑色,。,若在K/A中还出现,黑色沉淀,，则此培养基中接种的是,沙门菌,。,分析：因为沙门菌能利用葡萄糖产生,H2S,，与培养基中的Fe2+结合生成,FeS黑色沉淀,。,（三）半固体培养基,（,动力试验,）,大肠埃希菌,和,沙门菌,有沿接种针的插入位置向周围,扩散,的迹象，说明它们是,有鞭毛,，能运动，而,志贺菌,则只沿接种针插入位置生长，说明它,无鞭毛,，不能运动。,（四）生化反应鉴定,1.糖发酵实验,葡萄糖,发酵：如右图，三种菌的培养基都由,蓝,变,黄,，所有杜氏小管都产生了,气泡,。,分析：只有,大肠杆菌,能利用葡萄糖产气，另外两管可能混入大肠杆菌或产气杂菌。,（从左到右依次是志贺菌，沙门菌，大肠杆菌）,乳糖,发酵：如右图，,大肠杆菌,培养基颜色变,黄,，另两支依旧,蓝色,。另外，也只有大肠杆菌培养基中的杜氏小管产生,气泡,。,分析：只有,大肠杆菌,能利用乳糖产酸产气，达到预期。,（从左到右依次是志贺菌，沙门菌，大肠杆菌）,麦芽糖,发酵：如右图，三只试管都由,蓝,变,黄,，并且都产生了,气泡,。,分析：,大肠杆菌,利用麦芽糖产酸产气，,沙门菌,只产酸，,志贺菌,则是都不产。该现象可能是三种菌相互混杂或者受污染。,（从左到右依次是志贺菌，沙门菌，大肠杆菌）,甘露醇,发酵：如右图，三支试管也是由,蓝,变,黄,，都出现,气泡,。,分析：三种菌均可利用甘露醇产酸，但其中只有,大肠杆菌,能利用它产气。另外两管出现气泡最有可能是混入大肠杆菌。,（从左到右依次是志贺菌，沙门菌，大肠杆菌）,蔗糖,发酵：如右图，三支试管都是,蓝,色，都产生了少量,气泡,。,分析：三种菌都不可利用蔗糖产酸产气。因此少量气泡的出现可能是混入产气杂菌。,（从左到右依次是志贺菌，沙门菌，大肠杆菌）,2.,吲哚,试验,如右图，蛋白胨水培养基培养过后加入吲哚试剂，发现大肠杆菌试管上层出现,红色,的游离带，其余两管上层则是,黄色,的游离带。,分析:只有,大肠杆菌,可分解蛋白质中的色氨酸产生靛基质（吲哚）。达到预期。,（从左到右依次是志贺菌，沙门菌，大肠杆菌）,3.,甲基红,试验,三支试管都变成了,红色,。,分析：甲基红指示剂,PH小于4.4红色。,三种菌都可利用葡萄糖产酸降低PH到4.4以下。达到预期。,（从左到右依次是志贺菌，沙门菌，大肠杆菌）,4.伏一普试验（,VP,试验）,三支试管保持原色，无一变红。,分析：若生成,红色化合物，,反应,阳性,。三种菌均不可发生此类生化反应，反应,阴性,。,（从左到右依次是志贺菌，沙门菌，大肠杆菌）,5.,枸橼酸盐,利用试验,右图中，,大肠杆菌,培养基依旧绿色，,沙门菌,培养基完全变蓝，,志贺菌,培养菌则下层不变，斜面变蓝。,分析：枸橼酸钠为,唯一碳源,。利用可产生碱性物质，使指示剂,绿色变深蓝色,。三种菌都不可利用枸橼酸钠。右图现象可能混有杂菌。,（从左到右依次是志贺菌，沙门菌，大肠杆菌）,表1 肠杆菌科细菌生化反应鉴定结果记录表,表2 肠杆菌科细菌生化反应鉴定数据参考表,（五）血清学鉴定,玻片上的两滴混合液澄清，实验达不到预期。,分析：理论上会有一滴发生凝集反应，形成肉眼可见凝集块，另一滴则浑浊。,（如右图示）,实验失败可能由于杂菌污染或是菌量过少。,左边凝集，右边浑浊,（六）药物敏感试验（,K-B,纸片扩散法）,实验目的,：熟悉掌握,K-B,纸片扩散法基本操作及要求，学会用其测定试验菌对各种抗菌药物的敏感性,实验原理,：含有定量抗菌药物的纸片贴在己接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。,抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度,，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（,MIC）,呈负相关，即抑菌圈愈大，,MIC,愈小。,实验方法,（一）接种肉汤培养基,（二）菌液均匀涂抹平板培养基,（三）分别夹取青霉素、链霉素、庆大霉素和头孢拉定四种抗生素纸片贴在平板上进行培养,部分抗生素抑菌圈直径解释标准及相应最低抑菌浓度,实验结果,实验结果,实验讨论,三种菌对,链霉素,和,庆大霉素,敏感,，但对,青霉素,和,头孢拉定,耐药,。,不同菌对不同抗生素的敏感程度不同。青霉素对本实验三种菌，和头孢拉定对大肠杆菌和志贺菌都没有出现抑菌圈，其余均出现了抑菌圈，但是按照抑菌圈的直径标准判断，沙门菌对头孢拉定的抑菌圈在其耐药范围之内。,