非血缘干细胞动员、采集与检测中的问题和对策.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,非血缘干细胞动员、采集与检测中的问题和对策,管理目标,安全性：确保供者无长期或不可逆转的,不良反应,有效性：,CD34+,细胞数是最根本的要求,安全性,有效性,内容介绍,血液细胞、,G-CSF,动员后血液细胞、机采,PBSC,中细胞分类特征,G-CSF,注射期间的注意事项,PBSC,采集中的注意事项,有核细胞及,CD34+,计数方法及注意事项,G-CSF动员后血液细胞成份,白细胞明显增加（,20-8010,9,/L),，以,N,增加为主,粒细胞：,嗜中性粒细胞,(N),：,80%,嗜酸性粒细胞,(,Eo,),：,0.5-5%,嗜碱性粒细胞,(,Ba,),：,1%,淋巴细胞,:10%,单核细胞,:10%,偶有有核红细胞,红细胞,:,变化不大,血小板：不变或有所减少,单个核细胞,(MNC),机采G-CSF动员后血液细胞成份（PBSC采集物）,因为,CD34+HSC,主要在单个细胞中，因此机采,PBSC,主要为,MNC,CD34+,细胞占全部有核细胞,(ANC)0.3-1.5%,粒细胞：,嗜中性粒细胞,(N),：,10%,嗜酸性粒细胞,(,Eo,),：,2%,嗜碱性粒细胞,(,Ba,),：,1%,淋巴细胞,:30-50%,单核细胞,:30-50%,偶有有核红细胞或其它中晚幼粒细胞,单个核细胞,(MNC),NC、MNC、CD34+细胞检测的注意事项(详见规程）,对每个有关的细节都要有严格的,SOP,及质控管理，如,抽样：检测样本与采集袋中的样本要充分混匀,检测：上机前要充分混匀,对检测的仪器设备及其清洁卫生、保养、校准等,试剂的选择、保存；标本的保存,检测过程、结果分析,结果的审核与报告,PBSC采集物检测流程,抽样、标记、运送,有核细胞计数,染色,溶解红细胞,洗涤,固定贮存,数据分析、计算、最终报告,血液细胞计数室,FCM,实验室,白细胞分类,FCM,检测,细胞形态室,报告给主管医师,PBSC采集物的计算,举例，一患者为,50kg,体重，他的供者第一次采集了,PBSC 160ml,，采集物有核细胞浓度为,20010,9,个细胞,/1000ml,，,CD34+,细胞占全部有核细胞的,0.78%,，请问此次采集是否达到卫生部制定的采集标准？,采集物中有核细胞总数为：,20010,9,个细胞,/1000ml 160ml,=3.210,10,患者每公斤体重接受的有核细胞数,=3.210,10,/50=6.4X10,8,/kg,采集物中,CD34+,细胞总数,=3.210,10,0.78%=2.49610,8,患者每公斤体重接受的,CD34+,细胞数,=2.49610,8,/50,=4.99X10,6,/kg,此次采集物的,NC,及,CD34+,细胞数高于卫生部的标准,PBSC采集物检测中的注意事项,抽样,:,抽样前要将采集袋中的,PBSC,采集物与小辫中的采集物混合,5,次以上,;,检测,:,采集完成后立即送检,G-CSF,注射中不良反应发生的机制,骨髓造血细胞迅速增加：多部位疼痛、胸闷,异体蛋白反应：流感样症状、过敏等,血白细胞升高引起的血管堵塞、血小板聚集,功能增加高凝状态：血栓、栓塞、脾破裂,其它：恶心、便秘等,健康供者动员采集不良反应调查,最常见：多部位疼痛、疲乏,;,采集中低钙,较常见：流感样症状、恶心、失眠、头晕,少见：盗汗、浮肿,罕见：血栓、栓塞（心肌缺血、一过性脑缺,血、失明等），脾破裂、虹膜炎、虹,膜外层炎、急性痛风性关节炎、过敏,反应、严重化脓感染,G-CSF动员对血生化的影响,DF Stroncek，J.Clin.Oncol.,1997，15:1601G-CSF 2-10ug/kg/d,5d;,美国，n=102,ALP,升高,LDH,升高,ALT,升高,钠升高,糖降低,钾降低,BIL,降低,BUN,降低,北京市道培医院URD动员中的副作用（一）,G-CSF 5ug/kg/d,4-5d，n=73,头、腰背、四肢、全身痛,39(54%),疲乏,10(14%),失眠,4 (6%),恶心,3 (5%),发热,3 (5%),食欲下降,2 (3%),均,=II,度,心悸,1 (2%),头晕,1 (2%),鼻塞,1 (2%),腹泻,1 (2%),唇部疱疹,1 (2%),采集PBSC的时间及循环血量,在,G-CSF,后,D5-6,采集最好,每次采集至少循环供者血容量的,2,倍,LVL,可循环供者血容量的,3-6,倍,CMDP,规定每次循环量,15000ml,，不得,50,10,9,/L,，提前采集,PBSC,，并减少,G-CSF,量,不适合URD的补充建议,由于一些罕见不良反应报告，除了,CMDP,的标准，建议以下供者不适合捐献,PBSC,CBC,在正常低线水平,有血栓史者,有自身免疫性疾病,有慢性炎症性疾病史，如眼部炎症,有恶性疾病,有血液病家族史者，最好检查骨髓形态及染色体,PBSC保存与运输的最佳温度,Antonenas V,2006,Cytotherapy,158-165(8),初始,CD34+,细胞7.7106(0.730.3)/kg ul,贮存后CD34+活性损失,2-8C,18-24,C,37,C,24h,9.4%21.9%100%,48h 19.4%30.7%,72h,28%43.3%,