实验二-线粒体和液泡系的活体染色.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验二,线粒体和液泡系的活体染色,实验目的：,1.,观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布；,2.,学习一些细胞器的超活染色技术。,实验原理,活体染色：,是能使生活有机体的细胞或组织,特异性着色,但对活样品又没有毒害作用的一种活体染色方法，其目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。,应用：,活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。,分类：,根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为,体内活体染色与体外活体染色,两类。体内活体染色是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。体外活体染色又称,超活染色,，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。,线粒体的超活染色,线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。,詹纳斯绿,B,是毒性较小的碱性染料，可,专一性地对线粒体进行超活染色,，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态,(,即,有色状态,),，呈,蓝绿色,；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基,(,即,无色状态,),。,液泡系的超活染色,中性红为弱碱性染料，对液泡系,(,即高尔基体,),的染色有专一性，只将,活细胞,中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。,实验步骤,1、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察,取清洁载玻片,滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液,用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞,刮下的粘液状物放于载玻片的染液滴中,染色10l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液),盖上盖玻片,显微镜下观察,在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜观察，可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染成,蓝绿色,的,颗粒状或短棒状,的结构，即是线粒体。,2、洋葱内表皮细胞线粒体的超活染色,用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴在干净的载玻片上，然后撕取洋葱鳞茎内表皮1小块，置于染液中，染色15-20min。,吸去染液，加一滴Ringer液，注意使内表皮展平，盖上盖玻片，显微镜观察。,先用低倍镜进行观察，找到细胞后，即可转入高倍镜继续观察，此时，要注意,细胞核位于细胞的近中部的一侧,。在它的周围有致密的原生质体，在原生质中有被染成,蓝绿色的小颗粒,。此即线粒体。,4、植物细胞液泡系的活体染色,撕取洋葱内表皮细胞，放在加有一滴1/3000的中性红染色的载玻片中，染色510min，吸去中性红染液，滴加11滴Ringer液，盖上盖玻片，镜检。,可见被染成砖红色的中央大液泡。,作业,分别绘图示液泡系、线粒体形态和分布。,