微生物学显微镜直接计数法.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验三、微生物数量的测定,一、实验目的：,掌握使用血球计数板进行微生物显微镜直接计数的方法,了解微生物数量测量的几种方法、原理及其应用,二、实验原理,常用的微生物细胞数目的检测法,血球计数板法,平板菌落计数法,干重法,比浊法等,干重法,将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来，然后烘干至恒重(干燥温度可采用105、,100,或80)、称重。一般干重为湿重的10%20%,。,注：该法适合菌浓度较高的样品。,比浊法,在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与吸光值成正比，,菌数越多，吸光值越大。,因此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。,该法适合测定大量的细胞。,我们采用的是25,16的，计数时查5个中方格的总菌数。如图：,计算：1个计数室的总菌数=A/525B,1g（ml）样品中的总菌数=A/525101000B,=50,000AB个,5个方格的总菌数,稀释倍数,三 实验器材,1.菌种,酵母（,Saccharomyces cerevisiae,）菌悬液(已稀释100倍),2.器具,显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片,。,四 实验方法,1.检查计数板,检查计数板是否有破损。,2.镜检计数室,在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。,3加样品,将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘点一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。,4.显微镜计数,静置几分钟，将计数板放在显微镜下，先用低倍镜找到计数室，再换成高倍镜进行计数,5.清洗血球计数板,计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干净后自行晾干，镜检观察每小格内无残留物为止。,注意事项,1、加样时先摇匀菌液，计数室中不可有气泡产生；,2、菌液浓度以每小格有5-10个菌体为宜。,3、计数时，格线上的菌体只数上方和右边线上的；,4、如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，作为两个菌体计算；,5、清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗。在水龙头上用水柱清洗，直到洗净为止。,6、一个样品要从两个计数室中计得的平均值来计算。,特别注意,血球计数板均有编号，一人一个，务必小心使用，若损坏，需原价赔偿或赔偿原物！,显微直接计数结果,五、作业,100,100,