实验-环境检测微核实验.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验五 微核试验法,检测环境污染,实验目的：,掌握用黄鳝来进行微核测定环境污染的方法。,能在显微镜下正确辨认微核并计算微核率。,实验原理：,微核检测技术是一项非常有效而实用的实验技术,常被用于进行环境监测分析。,微核指由于生物受到内外环境因素的影响,染色体的结构发生异常变化,形成,无着丝粒断片或染色体在后期时移动滞后现象,。,微核的形成体现了环境的污染状况,常常以,微核出现的频率计算污染指数,测定环境的污染状况。,微核检测技术主要利用的实验材料有,:,动物的骨髓红细胞系、外周血淋巴细胞、上皮脱落细胞以及植物中的蚕豆根尖细胞等。,现有的微核测试系统多数是用哺乳动物的骨髓细胞或外周血细胞。缺点是需要一定培养条件与时间、细胞同步化困难、微核率低，一般只在,0.2,左右。,在细胞间期可见微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核,1/3,以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成,DNA,的能力。,实验材料：,购买健康黄鳝,实验器材：,显微镜、载玻片、盖玻片、吸水纸、烧杯、玻片染色缸、手术剪、镊子,实验试剂：,1,分析纯,CdCl22.5H2O,2,固定液 甲醇,3,Giemsa,染色液,实验步骤：,重金属镉离子,(Cd2+),诱导黄鳝外周血细胞微核实验方法。,1,实验用水准备,实验用水，可用曝气数天的自来水。,2,实验用容器,可用实验室内的水槽，清洗后，加入定量曝气的自来水。,3,试剂诱导,配实验用试剂,CdCl,2,2.5H,2,O,，,设,2mg/L,、,0.2mg/L,两,个培养终浓度梯度。把规格一致的黄鳝放入含试剂的溶液中七天，期间可换水重新补充试剂。另设同样条件的空白对照，可用曝气的自来水作为对照饲养。,4,断尾取血，做血涂片,取黄鳝，断尾，取外周血，滴于载玻片上，做均匀涂片。注意涂片均匀。涂片空气干燥。,5,外周血涂片固定,将干燥后的涂片，插入染色缸的插槽中，,固定,5,分钟,，取出，气干。,6,Giemsa,染色,固定后的涂片，采用骨髓染色体制备的染色体扣染法，,染色,10,分钟,，取出载片。在小水流下冲片，小心擦干玻片下表面，注意不要碰到细胞面。,7,镜检,血涂片手法,注意事项,1,、所用玻片必须干净，无油污。,2,、如染色太浅，可按照原来步骤重染；染色太深或有沉淀物则可用甲醇脱色后重染。,3,、染色时切勿使染液干涸，否则发生不易去掉的沉淀。,4,、冲洗时不可先倾倒染色，应先轻轻摇动玻片，缓慢加水使沉渣泛起，然后再用水冲洗。,5,、水冲洗时间不宜过长，否则会脱色。,成熟的黄鳝,外周血红细胞,多呈椭圆形或长椭圆形。外周血细胞中核呈卵圆形或椭圆形，中位，染色较深且均匀。可见微核，主核大小的,1/3,以下，并与主核分离，着色较浅，形态呈圆形，横圆形，不规则形。,