C18色谱柱的使用.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,C,18,色谱柱的使用,定义、区分,液相色谱柱根据,极性,分为,正相柱,和,反相柱,。,正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合,-CN,-NH3,等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（,ODS,）称为,C18,柱，其它常用的反相柱还,C8,C4,C2,和苯基柱等。,使用、维护,pH,适用范围,反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的,PH,范围。一般的,C18,柱,PH,值范围都在,2-8,，流动相的,PH,值小于,2,时，会导致键合相的水解；当,PH,值大于,7,时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。,pH,过高或过低还可能会损害密封圈和柱塞杆以及色谱柱更 严重的是当,PH,大于,9.5,时会破坏流通池的石英玻璃如果发现上述情况，色谱柱入口会发生塌陷。,样品的前处理,a.,最好使用流动相溶解样品,b.,使用针头过滤器（,0.45um,滤膜）出去样品的可见异物,流动相配制,a.,流动相对样品具有一定的溶解能力，并且保证样品不会在色谱柱内析出或长时间留在色谱柱内,b.,流动相不与样品发生反应,c.,流动相粘度尽量小，使样品得到高效分离的同时降低柱压，延长色谱柱寿命,d.,流动相沸点不能太低，避免有气泡产生，影响实验进行,e.,流动相要保证现配现用，不能储存太久，避免流动相生成杂质微生物影响检测,f.,流动相使用前先脱气,注意事项,新色谱柱使用：,a.,先用,10-20,倍柱体积的色谱级甲醇或乙腈由低流速缓慢提高至正常流速冲洗，随后换至,10%,甲醇低流速缓慢提高至正常流速冲洗,b.,分清色谱柱方向,c.,尽量在色谱柱前段加保护柱，并定期清洗保护柱,色谱柱冲洗,使用完毕先用,10%,甲醇,/,水冲洗，如果长时间不用再用纯甲醇冲洗、保护（一般情况下，,10%,甲醇,/,水低流速冲洗过夜）,再生,用相当于,20,倍体积的溶剂按顺序冲洗柱子，尽可能按照色谱柱箭头方向冲洗，尽量不反冲：,10%,甲醇,/,水溶液,甲醇,氯仿（或异丙醇）甲醇*或用热蒸馏水（,55,）,+,四次注射,100ulDMSO.,