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级血栓与止血.ppt

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GPIV,GPV,GPIX,膜脂质,血小板的骨架系统和收缩蛋白,微管,微丝,膜下细丝,血小板细胞器和内容物,颗粒,血小板第四因子(PF4),血小板球蛋白(-TG),凝血酶敏感蛋白(TSP),纤维连接蛋白(Fn),血小板衍生生长因子(PDGF),致密颗粒(颗粒),ADP,Ca,+,溶酶体(颗粒),血小板活化的表现,1、血小板由静寂状态的圆碟形变为骨架蛋白,滑动后的多角形或多伪足形活化状态。,2、血小板表面特殊蛋白的表达:,如:GPIIb/IIIa、P选择素,3、血浆血小板特异产物水平增高:,如:,-TG、PF4、TXA2,循环血液中的血小板90%以上是静寂的,,保证了正常人不会因血小板过度活化而,引起血栓性疾病。,血小板的功能,黏附功能,聚集功能,释放反应,促凝作用,血块收缩,Fibrinogen,IIb,IIIa,IX,IIb,IIIa,IIa,Ia,Ib,vWF,EC,PLT,血管壁在血栓与止血中的作用,血小板在血栓与止血中的作用,血液凝固的基础理论,血液抗凝系统,纤维蛋白溶解系统,血液流变学,血栓形成,凝血因子,14个,、(为 的活化形式)、,、,XIII,激肽释放酶原(,PK,)、高相对分子质量激肽原(,HMWK,),维生素K依赖的凝血因子:、,接触系统因子:、,PK、HMWK,凝血酶敏感因子:、,XIII,即组织因子,是正常人血浆中唯一不存在的凝血因子。,即钙离子,其余全部是蛋白质。,vWF,凝血机制,“两个途径,三个阶段”,(1)两个途径是指内源性和外源性凝血两个途径。,(2)三个阶段是指,A 凝血活酶的形成,凝血活酶是复合物,由,a,,V,PF,3,或磷脂以及钙离子组成。其作用是使凝血酶,原转变为凝血酶。,B 凝血酶的形成。,C 在凝血酶作用下,纤维蛋白原转变为纤维蛋白。,其中需要因子,XIII,的参与。,血管壁在血栓与止血中的作用,血小板在血栓与止血中的作用,血液凝固的基础理论,血液抗凝系统,纤维蛋白溶解系统,血液流变学,血栓形成,抗凝血系统的作用,有细胞和体液抗凝两个方面,以体液抗凝系统为主。,生理性体液抗凝系统包括:,抗凝血酶(AT),蛋白C系统,组织因子途径抑制物(TFPI),其它体液抗凝因子:,2,-巨球蛋白,,1,-抗胰蛋白酶等。,抗凝血酶(AT),AT是主要的生理性抗凝物质,尤其对凝血酶的,灭活能力占所有抗凝蛋白的79%,80%。,AT的抑酶谱很广,包括:IIa、Xa、IXa、XIa、,纤溶酶、激肽释放酶等。,肝素作用于AT的赖氨酸残基,大大增强AT的抗,凝血酶活性(2000倍以上)。,Thrombin,F Xa,F XIa,F IXa,Inhibition of the,Vk-dependent,Proteases of the,coagulation cascade:,The antithrombin III /,heparin mechanisms,The role of TFPI in the extrinsic pathway coagulation,TM,Thrombin,PC,APC,Ca,+,PS,Ca,+,TM,Endothelial cell,PC(protein c),PS (protein s),APC(activated PC),TM(thrombomodulin),Va,V,inactive,VIIIa,VIII,inactive,The component of PC system and anticoagulant mechanisms,背景,1993年,荷兰,Dahlb,ck,对一例19岁的家族性,静脉血栓病例的研究中发现,该患者的血浆,中加入 APC 后,其 APTT 延长不明显,而,正常人 APTT有明显延长,在患者家族其他,成员中也发现此现象,称为活化蛋白 C抵抗,(APC-R,,Activated Protein C Resistance,),原因:,1、APC抗体?,2、APC抵抗物?,3、PS缺乏?,4、FVa和FVIIIa不被APC灭活?,5、其他不明机制?,Factor V:1691 G A,Arg 506 Gln 506,APC-R,1994年,荷兰Leiden的Bertina和Dahlb,ck发现,FV的Leiden突变,血管壁在血栓与止血中的作用,血小板在血栓与止血中的作用,血液凝固的基础理论,血液抗凝系统,纤维蛋白溶解系统,血液流变学,血栓形成,纤维蛋白溶解系统,纤维蛋白溶解(纤溶)系统的作用 体内或体外的凝血块可以被溶解,这由纤溶系统来完成。,这一系统主要功能是降解沉积在血管壁的纤维蛋白,清除已经形成的血栓,维持血流通畅。,PAI(纤溶酶原激活抑制物),t-PA(组织型,纤溶酶原激活物,),u-PA(尿,激酶型纤溶酶原激活物,),a,2,-AP(a,2,-抗,纤溶酶,),Plasminogen,纤溶酶原(PLG),PAI-1,PAI-2,t-PA,u-PA,Plasmin,纤溶酶(PL),Fibrin Fibrin,(纤维蛋白原,degradation,纤维蛋白),products(FDP),a,2,-AP,纤溶酶生成以后就可以发挥降解纤维蛋白和纤维蛋白原的作用,溶解血栓。,凝血酶,XIII,纤维蛋白元,非交联纤维蛋白,交联纤维蛋白,纤溶酶,纤溶酶,纤溶酶,B,1-42,B,15-42,D-二聚体,X,Y,D,Z X,Y,D,Z X,Y,D,Z,(统称FDPs),在区分原发性纤溶亢进(如严重肝病,肾衰,肿瘤)和继发性纤溶亢进(一定是继发于血栓性疾病,包括急性心梗,脑卒中,下肢深部静脉血栓,肺栓塞,DIC等)时,检查FDPs并不能区分,两者均增高;而D-二聚体可以区分,因为D-二聚体是交联纤维蛋白的降解产物,在原发性纤溶亢进时并不增高。,血管壁在血栓与止血中的作用,血小板在血栓与止血中的作用,血液凝固的基础理论,血液抗凝系统,纤维蛋白溶解系统,血液流变学,血栓形成,血液流变学(hemorheology)是研究血液及血管的,流动性、变形性及在医学中应用的一门科学。,它包括血液的流动性、血细胞的变形性、血液凝固,性、血管壁的流变性及他们之间的相互作用、在病,理状态下的变化规律。,理论血液流变学,分子血液流变学,临床血液流变学,血管壁在血栓与止血中的作用,血小板在血栓与止血中的作用,血液凝固的基础理论,血液抗凝系统,纤维蛋白溶解系统,血液流变学,血栓形成,血栓形成(thrombosis)指在活体的心脏,或血管腔内,血液发生凝固或有沉积物形,成的过程。,血栓形成是止血机制过度激活的一种病理,状态,在许多疾病发病机制中起着重要作,用。,血栓形成的机制,血管壁的损伤,理、化、生物因素,免疫因素,内皮细胞表面的局部因素,血液成分的改变,血小板的改变,凝血因子的异常,抗凝作用的减弱,纤溶活性降低,其他,血流因素,Coagulation,Fibrinolysis,(+),Endothelium,Cell(+),Platelet(+),Anticoagulation,Fibrinolysis,(-),Endothelium,Cell(-),Platelet(-),Basic theory,血栓与止血检验基础理论,常用血栓与止血检验指标,检测项目的选择和应用,1、血管壁检测,2、血小板检测,3、凝血因子检测,4、抗凝系统检测,5、纤溶活性检测,6、血栓形成的特异检测,7、血液流变学检测,血管壁检测,1,、出血时间测定(BT),2,、毛细血管抵抗力试验(CRT),3、血管性血友病因子抗原及活性测定(vWF:Ag),4、血浆6-酮-前列腺素F1a测定,5、血浆血栓调节蛋白抗原测定(TM:Ag),6、血浆内皮素-1测定(ET-1),血小板检测,1,、血小板计数,2,、血块收缩试验,3、血小板相关免疫球蛋白测定(PAIg),4、血小板粘附试验(PAdT),5、血小板聚集试验(PAgT),6、血浆血小板P-选择素测定,7、血小板促凝活性检测(PPA),8、血浆血栓烷B2测定(TXB,2,),凝血因子检测,1,、,活化部分凝血活酶时间(APTT),2,、凝血时间测定(CT),3,、血浆凝血酶原时间测定(PT),4、血浆因子,、,、,和,促凝活性测定,5、血浆因子,、,、,和,促凝活性测定,6、血浆纤维蛋白原测定(Fbg),7、血浆因子X,定性试验,8、可溶性纤维蛋白单体复合物测定(SFMC),抗凝系统检测,1、,血浆凝血酶时间及其甲苯胺蓝纠正试验(TT),2、,甲苯胺蓝纠正试验或血浆游离肝素时间,3,、APTT交叉试验,4、狼疮抗凝物质测定,5、抗心磷脂抗体测定,6、血浆抗凝血酶活性(AT:A),7、血浆蛋白C活性测定(PC:A),8、血浆游离蛋白S抗原(FPS)和总蛋白S抗原测定(TPS),9、血浆凝血酶-抗凝血酶复合物测定(TAT),纤溶活性检测,1,、优球蛋白溶解时间(ELT),2,、D-二聚体定性试验,3、血浆组织型纤溶酶原激活剂测定(t-PA),4、血浆纤溶酶原活性测定(PGL),5、血浆纤溶酶原激活抑制物-1测定(PAI-1),6、血浆硫酸鱼精蛋白凝固试验(3P试验),7、血浆纤溶酶-抗纤溶酶复合物测定(PAP),8、血浆D-二聚体定量测定(DD),9、血浆纤维蛋白(原)降解产物测定(FDP),血栓形成的特异检测,1、血栓前体蛋白的测定(TPP),2、同型半胱氨酸测定(HCY),血液流变学检测,1、全血粘度测定,2、血浆粘度测定,3、红细胞变形性测定,4、红细胞电泳时间测定,出血时间测定,(,Bleeding time,BT),血小板检测(,Platelet count,PLT,),血浆凝血酶原时间测定,(,Plasma,Prothrombin time,PT,),活化部分凝血活酶时间测定,(,Activated partial thromboplastin time,APTT,),血浆凝血酶时间(,Thrombin time,TT,),血浆纤维蛋白原测定,(,Fibrinogen,Fbg,),出血时间测定,(,Bleeding time,BT),Duke,Ivy,TBT(template bleeding time),三种BT测定方法比较,TBT法 IVY法 Duke法,刺血部位,前臂,个体差异小 同左 耳垂,个体差异大,固定压力 上臂,成人:5.3kPa 同左 不加压,切口标准化 标准化切口 未标准化 未标准化,深度、长度,敏感性 最敏感 较敏感 不敏感,重复性 佳 尚可 差,器材 血压计,测定器,同左,仅需,但无测定器 刺血针,使用现状 国际上推荐使用 趋向淘汰 淘汰,临床意义延长见于:,()血小板明显减少,如原发性或继发性血小板减少性紫癜;,()血小板功能异常,如血小板无力症和巨大血小板综合征;,()严重缺乏血浆某些凝血因子,vWD、DIC;,(4)血管异常,如遗传性出血性毛细血管扩张症;,(5)药物干扰,如服用乙酰水杨酸、双嘧达莫(潘生丁)等。,血小板计数(,Platelet count,PLT,),参考值(100300)10,9,/L,Inhibition of the,单体聚合,且对V因子保护性差。,1994年,荷兰Leiden的Bertina和Dahlbck发现,共同途径的凝血缺陷血液凝固调节的异常,1993年,荷兰 Dahlbck 对一例19岁的家族性,纤维蛋白溶解综合征包括原发性纤溶和继发性纤溶两种,可选用FDP和DD作为纤溶系统活性的筛选试验,大致有下列四种情况:,Basic theory,GPIb,不易止血、月经出血过多等。,血管内皮细胞的止血作用,激肽释放酶原(PK)、高相对分子质量激肽原(HMWK),血浆凝血酶原时间测定,(,Plasma,Prothrombin time PT),原理,血浆凝血酶原时间(PT)测定是在被检血浆中加入Ca,2+,和组织因子(组织凝血活酶),观测血浆的凝固时间。它是反映外源性凝血系统各凝血因子总的凝血状况的筛选试验,VII,TF,Ca,+,VIIa,X,V,II,Fibrinogen,Fibrin,Quick,于,1935,年创立,Plasma Prothrombin Time(PT),1、凝血酶原时间(S)11-13秒。应测正常,对照值。病人测定值超过正常对照值3秒,以上为异常。,2、凝血酶原比值(PTR)即被检血浆的凝血,酶原时间(S)/正常血浆的凝血酶原时间(S)。,3、国际标准化比值(INR)即PTR,ISI,,ISI为,国际敏感度指数,ISI越小,组织凝血活,酶的敏感性越高。,International normalized ratio(INR),PT patient,INR=,PT mean normal,ISI,ISI:international sensitivity index,临床意义,1、PT延长 见于,先天性凝血因子I、II、V、VII、X缺乏;,后天性凝血因子缺乏,如严重肝病、维生素,K缺乏、纤溶亢进、DIC、口服抗凝剂、异常,凝血酶原增加等。,2、PT缩短,见于血液高凝状态如DIC早期、心,肌梗塞、脑血栓形成、DVT等。,3、INR是监测口服抗凝剂的首选指标,国人以,INR为2.0-3.0为宜。,Warfarin,肠道吸收,速度中等,口服,2030小时显效,作用持续时间45天,在,肝中与葡萄糖醛酸结合,由尿或粪便中排出。,Warfarin 存在个体差异,需用PT监控,用药剂量。,口服抗凝剂 Warfarin,维生素K依赖的凝血因子:、,Vitamin K cycle,and it,s inhibition,by warfarin,A:Warfarin,D:Vitamin K,活化部分凝血活酶时间测定,(activated partial thromboplastin time,APTT),原理,活化部分凝血活酶时间测定是在受检血浆中加入APTT试剂(接触因子激活剂和部分磷脂)和Ca,2+,后,观察其凝固时间。本试验是反映内源性凝血系统各凝血因子总的凝血状况的筛选试验。,XII,Surface activating agent,phospholipid,Ca,+,XIIa,Fibrinogen,Fibrin,XI、IX、VIII,The measurement principle of APTT,临床意义 它是目前推荐应用的内源凝血系统的筛选试验。此外,APTT又是监测肝素的首选指标,1、APTT延长 见于,因子、明显减少,如A、B型血友病、因子缺乏症;,凝血酶原重度减少,如严重的肝损伤等;,纤维蛋白原严重减少,如纤维蛋白原缺乏症、严重肝损伤等;,应用肝素、口服抗凝药时;,纤溶亢进使纤维蛋白原降解增加时;,循环抗凝物质增加,如类肝素物质增多等。,2、APTT缩短见于高凝状态。,血浆凝血酶时间,(Thrombin time,TT,),临床意义,延长见于低(无)纤维蛋白原血症和异常纤维蛋白原血症;血中FDP增高(如DIC);血中有肝素或类肝素物质存在(如肝素治疗中、SLE和肝脏疾病等)。,血浆纤维蛋白原测定,原理,目前推荐使用Clouse法(凝血酶比浊法)。本法是在受检血浆中加入一定是凝血酶,后者使血浆中的纤维蛋白原(Fbg)转变为纤维蛋白,通过比浊原理计算Fbg的含量。,参考值2-4g/L。,临床意义,1、增高 见于糖尿病、急性心肌梗塞、急性感染、结缔组织病、急性肾炎、灼伤、多发性骨髓瘤、休克、大手术后、妊高征、急性感染、恶性肿瘤等以及血栓前状态。,2、减低 见于DIC、原发性纤溶症、重症肝炎和肝硬化等。,血栓与止血检验基础理论,常用血栓与止血检验指标,检测项目的选择和应用,一期止血缺陷的筛检,BT延长 +血小板计数,减少,正常,增多,血小板减少,原发性/继发性,血小板减少症,血小板增多,原发性/继发性,血小板增多症,血小板功能缺陷,vWD,低(无)纤维蛋白原血症,BT和PLT均正常,正常人,单纯由于血管壁通透性和(或)脆性增加所致:,过敏性紫癜,遗传性出血性毛细血管扩张症,单纯性紫癜,二期止血缺陷的筛检,1、APTT正常、PT正常,X,因子缺乏症、血栓止血改变处于代偿期。,2、APTT延长、PT正常,血友病、获得性,、,因子缺乏症等。,3、APTT延长、PT延长,共同途径的凝血缺陷血液凝固调节的异常,4、APTT正常、PT延长,外源性凝血途径的凝血缺陷,如,因子缺乏症,。,纤溶亢进筛查试验的选择与应用,纤维蛋白溶解综合征包括原发性纤溶和继发性纤溶两种,可选用FDP和DD作为纤溶系统活性的筛选试验,大致有下列四种情况:,(1)FDP和DD均正常:表示纤溶性正常,临床的,出血症状可能与原发性或继发性纤溶无关。,(2)FDP阳性,DD阴性:见于纤维蛋白原被降解,,而纤维蛋白未被降解,即原发性纤溶。,(3)FDP阴性,DD阳性:见于纤维蛋白被降解,,即继发性纤溶,而纤维蛋白原未被降解。,(4)FDP和DD都阳性:表示纤维蛋白原和纤维蛋,白同时被降解,见于继发性纤溶,如DIC和,溶栓治疗。,表4-2-18,原发性和继发性纤溶亢进的鉴别,原发性纤溶,继发性纤溶,原发性纤溶,继发性纤溶,BPC,N,减低,SFMC,N,增高,-TG,N,增高,PAP,N,增高,PF,4,N,增高,D-二聚体,N,增高,F1+2,N,增高,B,1-42,肽,增高,N,FPA,N,增高,B,15-4,肽,N,增高,注:N正常,手术前出血倾向的筛查,一、详细询问病史与体检,1、有无遗传性出血家族史?,2、有无出血病史?,如:拔牙出血过多、受伤后出血不止或,不易止血、月经出血过多等。,3、有无获得性止血异常的疾病?,如:慢性肝病、慢性肾功能衰竭等。,二、实验室检查,1、对无出血家族史、病史和与出血有关的慢性病者,PLT、PT、APTT,2、对心脏、中枢神经系统、器官移植手术者,PLT、PT、APTT、BT、FIB、TT,3、对有出血阳性指征者,PLT、PT、APTT、BT、FIB、TT、,Coagulant factor、F X,、vWF、,Platelet aggregation test,血栓前状态 (PTS),指由于多种因素引起的血液易发生血栓形成的一种病理状态。,临床后果:,1、无明显诱因而自发性出现血栓。,2、存在诱因,如妊娠、手术、创伤、口服,避孕药等,可导致血栓形成。,3、可能长期无血栓形成。,筛选实验,(1)血小板增高和血小板聚集实验增加;,(2)APTT和PT缩短;,(3)纤维蛋白原含量增多;,(4)全血和血浆黏度增高等。,特异指标,对诊断PTS更有价值,常选用:,(1)血管壁损伤试验,如VWF:AG、,TM、ET-1,;,(2)血小板试验,如-TG、,P-选择素、TXB,2,;,(3)凝血试验,如sFMC、,F,1+2,/FPA、TAT、TF,;,(4)抗凝试验,如AT、,PC、TFPI,;,(5)纤溶试验,如sFDP、,DD,、,PAP,。,Fibrinogen,X,Y,D,E,PLm,IIa,Fibrin,monomer,I,FPA(Aa1-16),B,1-42,IIa,Fibrin,monomer II,B,15-42,PLm,Cross-linked fibrin monomer,X,Y,D,E,D-D,PLm,FPB(B,1-14),PLm,XIIIa,抗凝治疗的监测,抗凝治疗的监测 临床上常用抗栓药物以预防血栓形成或溶解血栓。但是,这些药物应用过量便会造成出血,用量不足达不到预期疗效。因此在应用这些药物的过程中,必须作实验室检测。,普通肝素监测,1、APTT,使用肝素后,APTT延长至对照的,1.5-2.5倍,可取得最佳抗凝效果,,又无明显的出血倾向。,2、ACT测定值为250-360秒,低分子量肝素(LMWH),抗因子Xa活性(Xa抑制试验)监测,共同,1、血小板计数,2、抗凝血酶(AT),口服抗凝剂的监测,选用,1、血浆凝血酶原时间比率(PTR)作为监测指标,使其维持在1.5-2.0为佳,,2、国际标准化比率(INR)作为首选口服抗凝剂的监测指标,中国人INR维持2.0-2.5之间为宜。,溶栓治疗的监测,提示溶栓可能发生出血的指标:,2、PLT10010,9,/L,提示溶栓有效的指标:,1、DDimer明显上升后逐渐下降,2、FDP明显上升后逐渐下降,3、,2,AP降低到30%以下,血栓与止血检验标本采集的要求,1、取血时病人应松弛,环境温暖,防止静脉挛缩。,2、不可拍打手臂,止血带压力尽可能小,压迫时,间不能太长。,3、注射器针头国际上推荐21G1.5或20G1.5。,4、,采血技术熟练,“一针见血”,防止组织损伤,,外源性凝血因子进入针管。,5、拉针栓的速度要慢而均匀,使血液平稳进,入注射器,防止气泡产生。,6、放血时取下针头,沿试管壁慢慢将血液注,入试管。,7、立即将血液与抗凝剂充分混匀,建议使用,真空采血系统。,8、抗凝剂的选择:,枸橼酸对VIII、V有一定的保护作用,ICSH和,ICTH推荐使用3.2%(0.109M),枸橼酸液作为,凝血因子检查的抗凝剂。,草酸盐与钙形成不溶性沉淀物,可影响自动凝,血仪测定时光电终点的判断。,肝素可与AT-III作用抑制许多凝血反应。,EDTA能抑制或干涉纤维蛋白凝块时纤维蛋白,单体聚合,且对V因子保护性差。,9、抗凝剂的用量:,血液与抗凝剂的比例必须精确。抗凝剂在血标本,的绝对含量可改变血浆中钙离子浓度,进而影响,试验结果。,一般而言,选择血液与抗凝剂按9:1比例混合,,实际上是指抗凝剂与正常压积血液的血浆之间的,比例而言,故应根据患者HCT随时调整抗凝剂的,用量:,抗凝剂用量约等于,0.00185,血量(ml)(100-病人HCT),红细胞压积(%)枸橼酸钠溶液(%),10、标本的保存:,检测项目 -80,-20 4 20 30,以上,APTT 至少1个月 6h 6h 2h,VIII 至少1个月 24h 6h 6h 即刻,IX、II 至少1个月 24h 6h 即刻,XII 至少1个月 24h 24h,PT 至少1个月 1年 24h 6h 4h,V 至少1个月 至少1个月 24h 6h 即刻,VII 至少1个月 至少1个月 24h 6h 6h,X 至少1个月 至少1个月 24h 24h 6h,AT-III 至少1个月 至少48h 6h 6h,PC、PS 至少1个月 至少48h 6h 2h 2h,PLG 至少1个月 至少48h 24h 6h 6h,Thanks,感谢观看,
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