再用CTAB溴化十六烷基三甲铵络合法进一步精制得银耳多糖纯品并.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,黑龙江生物科技职业学院,生物制药技术,生物分离技术,主讲人：张爱华,实训七、,银耳多糖的制备及鉴定,实验原理,2,材料用具,3,操作方法,4,目的要求,2,1,5,5,注意事项,目的要求,了解银耳多糖制备的基本原理,掌握糖类物质提取纯化的基本操作技术,原理,银耳多糖主要成分为酸性杂多糖、中性杂多糖、,胞壁多糖、胞外多糖及酸性低聚糖五类，,不含核酸、蛋白质类物质。,可利用银耳子实体经水浸泡捣碎，酶浸提，,乙醇沉析分离可制得银耳多糖粗品，,再用,CTAB(,溴化十六烷基三甲铵,),络合法,进一步精制得银耳多糖纯品并进行多糖的鉴定,。,材料用具,银耳子实体干品,（,50g,左右）,烧杯、布氏漏斗、抽滤瓶、分液漏斗、,量筒、离心机、恒温水浴锅、透析袋、,滤纸、组织捣碎机、不锈钢锅。,试剂,（,1,）,1,复合酶制剂,(,含果胶酶、纤维素酶和中性蛋白酶食品级复合酶,),；,（,2,）,2,溴化十六烷基三甲铵（,CTAB,）配制：,取,2 g CTAB,溶于,100,mL,蒸馏水中，摇匀备用；,（,3,）,-,萘酚配制：,-,萘酚,5g,溶于,95,乙,（,4,）,5%,三氯乙酸,-,正丁醇溶液；,（,5,）,2mol,L,的氢氧化钠溶液；,（,6,）,0.5,甲苯胺乙醇溶液；,（,7,）,2mol,L,氯化钠溶液；,（,8,）,2mol,L,盐酸溶液；,（,9,）活性炭；硅藻土。,（,10,）,1,融菌酶制剂；,（,11,）无水乙醇；,（,12,）浓硫酸；,（,13,）乙醚。,操作方法,1.,银耳预处理,20 g,锈钢锅中,加水,1600,mL,20,25,浸泡,30min,捣碎机,中捣碎,银耳,浆液,操作方法,2mol,L,盐酸溶液调,pH,至,6.3,加,入,1,复,合,酶,制,剂,50,下,酶促反应,40min,银耳,浆液,2.,酶浸提,80,灭酶，,保温浸提,约,1.5h,80,水浴,浓缩,操作方法,等体积,5,三氯乙酸,-,正丁醇溶液,摇匀,离心,（,3000r/min,）,15 min,浓缩液,3.,多糖的沉淀（有机酸除杂）,下层,清液,备用,吸去上层,正丁醇,中层,变性,蛋白,操作方法,2mol,L,的氢氧化钠溶液调,pH,至,7,摇匀,抽滤,3.,多糖的沉淀（,脱色、透析,）,下层,清液,备用,加,1,活,性炭,80,加热,15 min,脱色,滤液扎袋,流水,透析,12h,80,水,浴浓缩,抽滤,操作方法,加,3,倍量,95,乙醇,摇匀,3.,多糖的沉淀（,乙醇沉析,）,抽滤液,离心,（,3000r/min,）,15min,沉淀,用无水,乙醇洗,2,次,乙醚,洗涤,1,次,50,以下,真空,干燥,操作方法,4.,精制（一）,取粗,品,1 g,溶于,100,mL,水中,搅拌,静置,2h,2,CTAB,滤液,离心,除不溶物,60,解离,4 h,离心,3000r/min,15 min,80,热水,洗,氯,化,钠,2mol,L,溶,液,100,mL,操作方法,4.,精制（二）,解离液,加,三,倍,量,95,乙,醇,透析液,80,浓缩,离心,3000r/min,15 min,精品,银耳,多糖,离心,3000r/min,15 min,沉淀,用无水,乙醇、,乙醚,洗涤,上清液,流水,透析,10h,50,真空,干燥,操作方法,5.,多糖的鉴定（一）,观察硫酸层与糖溶液界面处颜色变化,透析液,1,mL,-,萘酚溶液,2,滴,颜色变化,摇匀,沿管壁,缓加,入浓硫,酸,1.5,mL,(,勿振动,),操作方法,5.,多糖的鉴定（二）,透析,浓缩,透析,浓缩,2,mL,点于滤纸,0.5,甲苯胺乙醇溶液染色,加入,2,CTAB,溶液,2,4,滴,观察现象,注意事项,1.,酶促反应的时间、温度应控制好。,2.,在制备全流程中应时刻注意温度，,不能超过,80,思考,题,1,加入复合酶制剂有何作用？,2,CTAB,络合法与乙醇沉析法分离银耳多糖有何异同？,3,为何在制备全流程中应时刻注意温度不能超过,80,？,