促性腺激素.ppt

*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第二章,促性腺激素,(,gonadotripin,Gn,)(,gonadotropic,hormone,GTH,),促性腺激素,(,gonadotropic,hormone,GTH,),黄体生成素,(luteinizing,hormone,LH,),卵泡刺激素,(follicle-stimulating,hormone,FSH,),人绒毛膜促性腺激素,(human chorionic,gonadotropin,hCG,),马绒毛膜促性腺激素,(equine chorionic,gonadotropin,eCG,),GTH,的发现和纯化,1920s,发现去垂体大鼠出现严重的生殖功能紊乱，幼鼠不成熟，成年鼠不繁殖；,1927,发现,hCG,(,孕妇、葡萄胎及绒癌患者的尿中,),1933,证明腺垂体分泌的,GTH,是,2,种糖蛋白；,1959,从羊垂体中分离出,LH,1960s,分离、纯化,FSH,1970s,测出,LH,、,FSH,的氨基酸序列,第一节,FSH,与,LH,的结构,(,一,)LH,和,FSH,亚单位的结构,LH,和,FSH,的结构相似：,、,亚单位通过,2,个非共价键结合而成，,亚单位的氨基酸序列几乎完全相同，,亚单位各自具有独特的氨基酸序列，对受体的识别、结合起决定作用，,、,二聚体才具有生物活性。,FSH,(,二,),糖基与,LH,和,FSH,亚单位,、,亚单位分别与不同的糖基结合,意义：,保持蛋白的稳定性，保证其生物活性,亚单位：结合,2,个寡糖,亚单位：,(,人,LH),结合,1,个寡糖,(FSH),结合,2,个寡糖,(,三,),活性决定簇,1.,、,亚单位结合并维持其结构的完整，是保持,GTH,生物活性的先决条件。,拆分,hCG,的,与,亚单位后，失活；,拆分后再重组，活性降低,(60%80%),。,2.,糖基是延长,t,1/2,、提高生物活性的关键。,去唾液酸的,hCG,t,1/2,缩短为数分钟，生物活性为完整,hCG,的,3%,。,(,四,),基因结构与染色体定位,1.,亚单位基因,定位于人染色体,6p21.123,，长度,616.5kb,，有,4,个外显子和,3,个内含子；,亚单位基因的编码区高度保守成熟的,mRNA,含,730800,个核苷酸，翻译产生,120(24+96 or 92),个氨基酸的前体多肽。,2.,亚单位基因,各种,亚单位由不同染色体上的不同基因编码。,人,LH,亚单位基因,：,19q13.3,长度,1.1kb,含,3,个外显子，,2,个内含子；,mRNA,约含,700,个核苷酸，前体蛋白,145,氨基酸,(24+121),。,人,LH,和,CG,亚单位,的氨基酸序列有,82%,相似，二者具有几乎相同的生物活性。,人,FSH,亚单位基因,：,11q13,含,3,个外显子，,2,个内含子，不同种属间的核苷酸和氨基酸有高度相似性,(80%),；,mRNA,在,3,端有一段非翻译区,(11.5kb),与保持其稳定性有关。,第二节,FSH,和,LH,的合成、分泌、代谢与排泄,合成的场所：,促性腺细胞（腺垂体）。,促性腺细胞垂体细胞总数的,7%15%,分,2,种细胞群：卵形细胞,(,大,),、有角细胞,(,小,),。,双激素细胞：卵形细胞,(,大,),产生,LH,和,FSH,单激素细胞：有角细胞,(,小,),仅产生,LH,或,FSH,双激素，单激素细胞并存，,LH,和,FSH,分级释放和不平行释放的结构基础,正常腺垂体显微镜图像。腺垂体包含嗜酸性细胞、嗜碱性细胞和嫌色细胞。染色方法多样，如要准确识别特定激素分泌物，免疫组织化学染色法是必要的。激素分泌分类如下：粉红色嗜酸性细胞分泌生长素,(GH),和催乳素,(PRL),；,暗紫色的嗜碱性细胞,分泌促肾上腺皮质激素,(ACTH),，促甲状腺激素（,TSH,）和,卵泡刺激素（,FSH,）和黄体生成素,(LH),。淡染的嫌色细胞几乎没有胞质颗粒，但也有分泌活动。,一、,LH,和,FSH,的合成和分泌,合成：,1.,亚单位、,亚单位装配在内质网进行，,2.,连接寡聚糖,(,在从内质网向高尔基体过程中完成,),。,分泌：,1.LH,的分泌：卵泡早期下降，然后逐渐上升，在排卵期达高峰，随后快速下降,，到下一个周期在逐渐增加。,2.FSH,分泌的波动较小，排卵后和卵泡早期也呈下降表现。,Figure 3.Hormonal levels through the menstrual cycle.The cycle is driven by alterations in,GnRH,pulsation,which differentially favor the production of,gonadotropins,.Follicular development fostered by FSH results in E2 production,which,in turn,causes positive feedback to produce the LH surge.After ovulation,the corpus,luteum,produces P,causing a slowing of the,GnRH,pulse generator and decrease in LH.The arrows indicate,GnRH,pulsations.The length of the arrow indicates the amount of,GnRH,secreted.The distance between arrows indicates pulse intervals.(From Marshall JC et al:,Gonadotropin,-releasing hormone pulses:Regulators of,gonadotropin,synthesis and,ovulatory,cycles.Recent,Prog,Horm,Res 47:155-189,1991).,GnRH,脉冲释放的频率对维持适当的血浆,LH,和,FSH,水平起决定作用。,GnRH,脉冲释放频率过低或过频、连续释放时导致循环中的促性腺激素水平下降。,连续灌注,GnRH,，,LH,释放呈双向反应：,初次释放,30,分钟达峰值，,90,分钟后开始第二次上升，持续,4,小时。,提示：人垂体中有,2,个,LH,池，,GnRH,作用，使第,1LH,池快速释放,LH,，第,2,池为激素生物合成激发促性腺细胞分泌颗粒，释放,LH,（雌激素可促进此相分泌）。,连续灌注,GnRH,，血浆,FSH,逐渐升高。,提示：,促性腺细胞中没有可快速释放的,FSH,池；,可能还需要特殊的,FSH,释放因子。,二、,LH,和,FSH,合成和分泌的调控,调控,GTH,的表达的因素：,1.,下丘脑因子,GnRH,2.,垂体内因子,肽类激素、激活素、卵泡抑素,3.,性腺的反馈调节,甾体激素、肽类,调控,GTH,的表达的方式：,1.,改变转录速度,2.,改变,mRNA,的稳定性,3.,增加蛋白亚基的合成,4.,改变翻译后加工,5.,改变促性腺细胞数量,（一）下丘脑的调控,GnRH,下丘脑正中隆起 腺垂体 与促性腺细胞表面的受体结合。,GnRH+R,达一定数量后，细胞表面内陷一胞吞作用转运至胞内，,GnRH+R,在溶酶体酶的作用下分离，,GnRH,进入细胞内部，,R,游离回到细胞表面，等待与下一个,GnRH,分子结合。,间歇性,GnRH,释放（脉冲式），使受体的数量逐次增加，,LH,和,FSH,合成与分泌逐渐增多,上调作用。,持续性,GnRH,释放，初期可使,LH,和,FSH,大量合成与分泌，长期作用后因受体不足而使,LH,和,FSH,合成与分泌减少,下调作用。,影响脉冲式,GnRH,释放的因素：,雌二醇增加脉冲式,GnRH,释放频率，使,LH,释放增加；,孕酮水平增高，降低脉冲式,GnRH,释放频率，减少,LH,释放，有利于,FSH,合成与分泌；,去甲肾上腺素刺激,GnRH,释放,阿片抑制,GnRH,释放,多巴胺可双相调节,GnRH,释放,GnRH,对促性腺激素分泌的调节：,促进促性腺激素的,分泌,促进促性腺激素的,合成,（二）甾体激素的反馈调节,GTH,的合成与分泌受,2,个反馈系统调节：,性腺甾体激素系统,雌激素、孕激素、雄激素,激活素,-,抑制素,-,卵泡抑制素系统,激活素、抑制素、卵泡抑素,与,GnRH,的脉冲调节重叠，起,抑制作用,。,1.,甾体激素,雌激素：,小剂量雌激素抑制,GTH,的基础分泌，还降低,GnRH,的分泌频率；,大剂量,(200pg/ml,，持续,50h,时,),雌激素促进,GTH,释放。,排卵前成熟卵泡释放大量的雌二醇，引起,LH,、,FSH,峰，这是,GnRH,与雌二醇协同作用的结果。,孕激素,黄体期：抑制大剂量雌激素引起的,LH,、,FSH,释放，使其维持低水平分泌状态。,黄体期注射雌激素不出项,LH,峰；,排卵前：孕激素水平较低时，促进,LH,的分泌，与雌二醇一起促进,LH,峰的形成。,雄激素,对下丘脑：抑制,GnRH,分泌,对垂体：对,LH,作用很小（）,提高,FSH,分泌（提高,FSH,亚单位,mRNA,水平,）,2.,激活素,-,抑制素,-,卵泡抑制素系统,卵泡液中提取的多肽（在卵巢、睾丸、胎盘、垂体、中枢神经、肾上腺和骨髓中都发现），根据其对,FSH,基因表达的作用不同而命名：,抑制素（,inhibin,）,激活素（,activin,）,卵泡抑素（,follistatin,）,作用：,抑制素（,inhibin,）,选择性抑制垂体分泌,FSH,。（精液、卵泡液）,激活素（,activin,）,刺激,FSH,合成、分泌（垂体细胞产生、分泌）,刺激颗粒细胞表面,FSH,受体的合成（卵巢）,卵泡抑素（,follistatin,）,与激活素的,亚单位结合，使之刺激,FSH,合成、分泌的活性丧失。,血清抑制素在月经周期中的变化,在整个周期中，血清抑制素在,1001500 IU/L,之间波动。,卵泡期：维持低水平,FSH,基因表达增加,黄体期：急剧增高达峰值；之后迅速下降，,FSH,开始升高,在月经周期中血清激活素、卵泡抑素维持稳定,三、,LH,、,FSH,代谢与排泄,代谢：肝。,LH,、,FSH,、,亚基中结合的糖蛋白去掉唾液酸后代谢加快，作用时间缩短。,排泄：肾,第三节,FSH,、,LH,的受体和作用机制,一、分布,性腺细胞（卵巢，睾丸）,非性腺细胞（子宫内膜和子宫肌层、输卵管、大脑）,二、蛋白结构和基因,LH,受体的蛋白与基因,LH,和,hCG,与同一受体结合，,LH,受体又称,LH/CG,受体。,LH/CG,受体是含有,674,（卵巢）、,669,（睾丸）个氨基酸的多肽；定位于,2,号染色体,FSH,受体基因,含有,678,个氨基酸，定位于,2,号染色体，其跨膜区与,LH/CG,受体序列有,80%,同源性。,三、,GTH,受体第二信号转导,四、脱敏作用,GTH,连续作用于受体后，受体对,GTH,的反应性降低，称受体的脱敏作用,(desensitization),。,快速脱敏：,解耦联,-,受体分子的翻译后的修饰发生改变，导致活性下降。,缓慢脱敏：,降调节,-,初期受体胞吞增加，降解加速；后期,mRNA,减少，受体合成下降。,五、,GTH,的生理作用,FSH,对女性：,促进卵泡成熟,促进颗粒细胞增生，合成并分泌性激素；,增加颗粒细胞中芳香化酶活性，使雄激素转化为雌激素；,调节卵泡期细胞产生抑制素；,调节,FSHR,的表达：卵泡期增加，排卵期减少；,诱导颗粒细胞中,LH/CG,受体生成,在,LH,的配合下促进卵泡细胞分泌雌激素、孕激素和雄激素,FSH,对男性：,促进生精上皮发育，促进精子成熟,诱导青春期精子发生的启动；,与睾酮一起维持睾丸内精子的发生，对保持精子的数量和质量至关重要；,LH,：,促进甾体激素生成，形成并维持第二性征,对女性：与,FSH,协调，促进卵泡成熟并分泌激素。,增加,LH/CG,受体数量（卵泡内膜细胞、颗粒细胞）；,促进黄体形成和孕酮分泌，维持黄体功能；,增强雌激素的正反馈作用；,LH,峰触发排卵；,对男性：作用于睾丸间质细胞，促进睾酮生成,。,促进睾丸,Leydig,细胞成熟；,促进睾丸,Leydig,细胞分泌雄激素。,思考题：,1.,促性腺激素有哪些？,2.LH,、,FSH,、,hCG,主要由哪分泌？其基本结构是什么？,3.,Gn,分泌受哪些因素调节？如何调节？,4.,Gn,的作用机制是什么？,5.,简述,FSH,、,LH,的作用。,第四节,GnRH,的结构、合成、分泌和释放,1971,年，,Schally,和,Guillemin,分别从下丘脑提取了能刺激腺垂体释放,LH,和,FSH,的活性物质，称黄体生成素释放激素,(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH,),或促性腺激素释放激素,(,gonadotropin,-releasing,hormone,GnRH,),。,GnRH,由下丘脑内侧基底区的弓状核和视前区的,GnRH,细胞合成，转运到正中隆起，进入垂体门静脉，到达腺垂体，作用到促性腺细胞，使之分泌、合成,LH,和,FSH,。,Roger Guillemin,（吉尔曼）、,Andrew V.Schally,（沙利）,1971,年 从猪和羊的下丘脑分离提取黄体生成素释放激素（,10,肽）。,1977,年获诺贝尔生理学和医学奖,一、,GnRH,的结构,焦谷,组,色,丝,酪,甘,亮,精,脯,甘酰肽,活性部位,结合部位,B,B,B,C,A,A:,焦谷氨酸肽酶,B,：中性肽链内切酶,C:,脯氨酸后碳链裂解酶,二、,GnRH,的合成与分泌,基因定位：,8,号染色体的短臂上，长,4.5kb,，含,4,个外显子，,3,个内含子；转录的,mRNA,长,0.6kb,。,GnRH,原,GnRH,10aa,信号肽,23aa,GAP,56aa,Gly,Lys,Arg,GnRH,的分泌呈脉冲式释放,(,pulsatile,release),分泌时间短，间歇时间长，血中难检测,(,血中,T,1/2,=24 min),；,检测,LH,血中水平，推断,GnRH,水平。,时期,GnRH,脉冲频率间隔时间,脉冲频率快有利于,LH,分泌，,脉冲频率慢有利于,FSH,分泌。,卵泡早期,94 min,卵泡晚期,71 min,黄体晚期,216 min,垂体对,GnRH,的反应性是先升高随后逐步下降。此时垂体细胞内仍含有一定量的,Gn,，但其对,GnRH,的刺激处于不应答状态。,可能与垂体促性腺细胞表面,GnRH,-R,活性下降，使细胞脱敏有关。,三、,GnRH,合成与分泌的调节,GnRH,的调节：,长反馈调节,生殖腺分泌产物（,性激素,）,短反馈调节,垂体分泌产物（,LH,、,FSH,）,中枢神经系统调节,多种神经递质（,NE,、神经肽,Y,、,DA,和内啡肽,）,（一）性激素的调节,GnRH,的脉冲分泌受性激素的反馈抑制的影响。,雌二醇（,E,2,）,GnRH,脉冲频率增加（大剂量）,孕 酮（,P,）,GnRH,脉冲频率减慢,雄激素（,T,）,抑制,GnRH,释放,（二）促性腺激素（,LH,、,FSH,）的调节,LH,、,FSH,能减少下丘脑,GnRH,的分泌，此种负反馈作用称短反馈。,（三）中枢神经系统的调节,NE,、,ACh,能促进,GnRH,分泌；,5-HT,、,DA,、内啡肽,能抑制,GnRH,分泌；,PGE,能刺激,GnRH,分泌。,1.NE,相关神经元位于脑干区，刺激,GnRH,分泌，控制精神状态。此神经细胞也能产生,5-HT,。,2.,神经肽,Y,双相调节,是脑在饥饿或营养不良时分泌的神经蛋白，能刺激,GnRH,分泌。,但在雌激素缺乏的情况下，抑制,GnRH,分泌。,神经性厌食症患者，脑脊液中含有高水平神经肽,Y,，但,GnRH,分泌量极低，提示此肽与生殖系统高度相关,。（可能与营养素摄入不足，蛋白合成减少有关）,3.DA,系统,神经元位于弓状核内部，分泌进入正中隆起，作为催乳素抑制因子，,减少催乳素的释放。,多巴胺神经元兴奋，可使内啡肽分泌加速，,抑制,GnRH,的释放。,下丘脑性闭经对,DA,拮抗剂有反应，能增加,LH,脉冲的频率。,4.,内生性阿片系统,阿片类神经元，分泌阿片肽（,-,内啡肽、脑啡肽），抑制,GnRH,分泌。,GnRH,神经元上没有雌激素受体，雌激素对,GnRH,的负反馈作用与雌激素刺激内啡肽形成，内啡肽抑制,GnRH,的分泌。,四、,GnRH,的体内代谢,下丘脑分泌的,GnRH,仅存于垂体门脉循环中，外周血中含量极低。血中没有特异性蛋白与之结合，故其,t,1/2,极短，在血中检测出,GnRH,困难。,代谢酶：焦谷氨酸肽酶、中性肽链内切酶、脯氨酸后碳链裂解酶。,外源性,GnRH,t,1/2,=4min,在肝代谢，肾排泄。,第五节,GnRH,的受体和作用机制,一、,GnRH,受体,GnRH,-R,由,327,个氨基酸构成，分子量为,37684,，是,G,蛋白藕联的细胞膜受体。,GnRH,-R,定位,于染色体,4q13.21.1.,GnRH,-R,分布,于：,垂体、,卵巢、睾丸、大脑、前列腺、乳腺、胎盘等正常组织；垂体瘤、人乳腺癌、人卵巢上皮癌等肿瘤组织。,下丘脑门脉中的,GnRH,主要与腺垂体促性腺细胞膜表面的,GnRH,-R,结合。,GnRH,-R,的数量受,GnRH,频率和其他激素的调控。,GnRH,-R,浓度的变化与促性腺激素对,GnRH,的反应性有关。垂体内,GnRH,-R,浓度在,GnRH,频率为,30min,时最高，,2h,时较低。,二、,GnRH,的作用机制,GnRH,与,GnRH,-R,结合，使,G,蛋白活化，激活,PLC,（磷脂酶,C,）和,PLD-PC,（磷脂酰胆碱,-,特异性磷脂酶,D,），促进,DAG,和,IP,3,生成，激活内质网上的,Ca,+,通道，使,Ca,+,向细胞浆内移动，细胞浆内的,Ca,+,与,CM,结合，激活,PLA,2,，水解细胞膜磷脂生成,AA,，,AA,及其非,PG,衍生物刺激,LH,的释放。,脉冲式释放,GnRH,是下丘脑对腺垂体促性腺细胞的适宜刺激。,持续给予,GnRH,，在初始阶段会增加促性腺细胞释放,LH,、,FSH,，随后对,LH,、,FSH,的产生呈负调节，减少其分泌。,这主要是由促性腺细胞膜,GnRH,-R,减少所致。,三、,GnRH,的生理作用,（一）调控,LH,、,FSH,释放,给药后，,LH,明显升高，,FSH,轻度升高。,GnRH,不仅促进,Gn,释放，还促进其合成。,（二）自我激发作用,GnRH,可提高垂体促性腺细胞对,GnRH,的敏感性。给大鼠脉冲注射,GnRH,，间隔数小时后再次给药时，垂体细胞的反应性明显增强。,机制不清：第一次给药使其合成,Gn,增加，第二次给药后释放增加。第一次给药后促进细胞膜,GnRH,-R,合成，使其数量增加，故第二次给药后反应增强。,三、,GnRH,的生理作用,（三）对性腺的直接作用,GnRH,通过垂体调节性腺的功能，还直接作用于性腺。,大鼠性腺上有,GnRH,-R,；大量,GnRH,及其激动剂对性腺轴系有抑制作用，使,E,2,、,T,水平降低，性腺重量减轻，雌性停止排卵，雄性精子减少。,但对人主要是通过对垂体的抑制而发挥作用。,（四）对行为的影响,GnRH,对下丘脑及其以外的神经元有兴奋和抑制两种作用。,兴奋视前区和下丘脑神经元。,介导性行为，诱发交配行为。雄性,-,睾酮；雌性,-,雌二醇。,第六节 促性腺激素,(,Gn,),对性腺的调节,LH,、,FSH,作用的靶细胞,卵巢：颗粒细胞、卵泡膜细胞,睾丸：支持细胞、间质细胞,LH,、,FSH,作用的方式,与细胞膜上的,GTH-R,结合，激活受体，产生效应,LH,、,FSH,与其他激素协同作用产生效应,LH,、,FSH,作用的效应,促进性腺的发育，性激素的生成，性细胞的成熟,一、卵泡成熟的调节,卵泡中期，大卵泡中含有高水平的,FSH,。,卵泡刺激素,(FSH),：,诱导颗粒细胞增生，激活颗粒细胞中的芳香化酶，促进雌激素的合成；诱导颗粒细胞产生抑制素。,调节,FSH,受体,mRNA,表达：卵泡期,mRNA,增加，排卵期,mRNA,减少。,诱导,LH/CG,受体形成,黄体生成素,(LH),：,进一步增加卵泡内膜细胞上,LH/CG,受体数量，使受体的数量随卵泡的成熟而增加，增加卵泡内膜细胞中,P450c17,的表达，促进雄激素在卵泡内膜细胞中合成，合成的雄激素进入颗粒细胞转化生成雌激素。,刺激优势卵泡颗粒细胞上孕酮受体的表达，促进黄体形成和早期孕酮的产生，减慢颗粒细胞的增生。,二、月经中期的调节,大量的,Gn,（,LH,、,FSH,）释放，通过血液循环到达卵泡。,FSH,刺激颗粒细胞产生,LH,受体，使卵泡转变为黄体，开始分泌黄体酮。,促进卵泡内,纤溶酶原,活化为,纤溶酶,溶解卵丘。,对尚未发育的小卵泡有启动作用。,LH,促进休止期的卵子完成减数分裂，进入成熟期。,刺激,LH,受体产生黄体，开始分泌黄体酮。,与,FSH,共同促进卵泡内,纤溶酶原,活化为,纤溶酶,溶解卵丘。,增加环氧酶活性，促进,PG,合成，,PG,使新生血管聚集，血液集中，卵泡液增加，卵泡周围平滑肌收缩，将松散的卵子与卵丘细胞排出卵泡。,LH,的高水平维持,48,50,，排卵一般在,LH,峰值的,10,12,后发生。,三、黄体期的调节,在,LH,的影响下，孕酮不断增加。,诱导,LDL,受体增加，摄取,LDL,胆固醇，提供合成孕酮的原料；,增加编码,P-450scc,和,3,-,羟甾脱氢酶的,mRNA,的表达，使合成孕酮的酶增加。,正常的黄体期有赖于,LH,，排卵后约,14,天黄体枯萎似乎与,LH,刺激的改变无关，在哺乳动物中尚未发现黄体的溶解因子。,思考题：,1.GnRH,是由哪种组织合成的？其结构有何特点？,2.GnRH,的分泌有何特点？受哪些因素的调节？,3.GnRH,的作用机制？其生理作用有哪些？,4.Gn,对处于月经周期不同时期的卵巢的调控作用有何不同？,GnRH,Signaling in Pituitary Cells,Gonadotrophin,-releasing hormone(,GnRH,)is a hypothalamus-derived,decapeptide,component of the hypothalamus-pituitary-,gonadal,axis that regulates the biosynthesis and secretion of the,gonadotrophins,luteinizing hormone(LH)and follicle-stimulating hormone(FSH)by pituitary,gonadotrope,cells through high-affinity,GnRH,receptor(,GnRHR,).,Gn,-releasing factor is released from the hypothalamus in an estrous cycle-linked,pulsatile,pattern.LH and FSH are,heterodimers,that share an alpha subunit,but have unique beta subunits.The secretion and expression level of the-subunits of LH and FSH,-heterodimers,are regulated differentially throughout the menstrual cycle by the frequency and amplitude of,GnRH,pulses from the hypothalamus.This differential signaling for LH versus FSH synthesis and secretion is linked to the density of surface expressed,GnRH,-receptors.High levels of,GnRH,-receptor density correlate with increase levels of LH beta subunit mRNA and lower levels with increase FSH beta subunit mRNA.,Gn,-releasing factor receptors are G-protein coupled receptors(GPCR)that are coupled to the,pertussis,toxin-insensitive G-protein alpha q/11(Gq/11)family which link to,inositol,phospholipid,turnover via,phospholipase,Cbeta,(,PLCbeta,).,PLCbeta,cleavage of PIP2 promotes the mobilization of calcium and the activation of protein,kinase,C,isoforms,followed by sequential activation of,phospholipase,D and,phospholipase,A2.PKC activation leads to activation of the MAP-,kinases,ERK,JNK and p38.The elevation of,cAMP,and activation of PKA via,GnRH,-receptor activation is G-protein subunit-independent and believed to result from activation of a calcium/,calmodulin,activated,adenylyl,cyclase,downstream from G-protein activation.,