资源描述
单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,考点,1,微生物分离和培养,专题八生物技术实践,第1页,1.,理清培养基制备与微生物纯化技术,关键点整合,第2页,(1),为了确定培养基灭菌是否合格，微生物学试验普通会设置空白对照：随机取若干灭菌后空白平板培养基在适宜条件下培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成。,(2),观察菌落需用固体培养基，所以培养基要添加琼脂。,(3),倒平板温度普通在,50,左右，温度过高会烫手，温度过低培养基会凝固。,(4),平板需倒置，这么既可使培养基表面水分更加好地挥发，又能预防皿盖上水珠落入培养基，造成培养基污染。,(5),平板划线法只适合用于微生物提纯，不适合进行计数，而且在最终一次划线末端处菌种最纯。,第3页,(6),利用稀释涂布平板法估算水样中活菌数计算公式：,(CV),M(,稀释倍数,),。,(7),菌种可用甘油管藏法长久保留，保留时菌液中常添加一定量甘油。,2.,微生物分离与计数两个实例,(1),土壤中分解尿素细菌分离与计数,筛选菌株：利用以尿素为唯一氮源选择培养基筛选菌株。,测定微生物数量惯用方法：活菌计数法和显微镜直接计数法。,过程：土壤取样,样品稀释,微生物培养与观察。,判定方法：含酚红指示剂以尿素为唯一氮源培养基,细菌,指示剂变红，则该菌能分解尿素。,第4页,(2),分解纤维素微生物分离,试验原理：,即经过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。,流程：土壤取样,选择培养,梯度稀释,涂布平板,挑选菌落。,第5页,1.(,全国,，,37),将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到,M,培养基。回答以下问题：,(1)M,培养基若用于真菌筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制,_,生长，加入了链霉素培养基属于,_,培养基。,考题集训,1,2,3,4,5,6,解析,链霉素是抗生素，可抑制细菌生长，故在,M,培养基中加入链霉素作为选择培养基，可筛选出真菌。,细菌,选择,答案,解析,第6页,解析,培养基中营养成份普通包含碳源、氮源、水和无机盐等。细胞中含有氮元素生物大分子有蛋白质、核酸等，故所加入氮源可参加以上物质合成。,(2)M,培养基中马铃薯浸出液为微生物生长提供了各种营养物质，营养物质类型除氮源外还有,_(,答出两点即可,),。氮源进入细胞后，可参加合成生物大分子有,_(,答出两点即可,),。,碳源、无机盐,蛋白质、核酸,答案,解析,1,2,3,4,5,6,第7页,解析,能产生淀粉酶微生物可将淀粉分解成麦芽糖，淀粉遇碘变蓝，向加有淀粉培养基中加入碘液后培养基展现蓝色，产淀粉酶菌落周围淀粉被水解，形成透明圈，可依据透明圈大小判断产生淀粉酶多少。,(3),若在,M,培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可经过加入显色剂筛选出能产淀粉酶微生物。加入显色剂是,_,，该方法能筛选出产淀粉酶微生物原理是,_,_,。,碘液,淀粉遇碘液显蓝色，,产淀粉酶菌落周围淀粉被水解，形成透明圈,答案,解析,1,2,3,4,5,6,第8页,(4),甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：,甲同学涂布了,3,个平板，统计菌落数分别是,110,、,140,和,149,，取平均值,133,；,乙同学涂布了,3,个平板，统计菌落数分别是,27,、,169,和,176,，取平均值,124,。,有些人认为这两位同学结果中，乙同学结果可信度低，其原因是,_,。,乙同学结果中,1,个平板计数结果与另,2,个相差悬殊，结果重复性差,解析,统计菌落数时普通选择菌落数在,30,300,个平板，甲同学统计,3,个平板中菌落数在正常范围内且差距不大，比较准确；乙同学统计,3,个平板中，,1,个平板计数结果与另,2,个相差悬殊，结果重复性差。,答案,解析,1,2,3,4,5,6,第9页,1,2,3,4,5,6,选择培养基作用原理判断,(1),在培养基中加入某种化学物质。比如，加入青霉素能够分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度食盐能够得到金黄色葡萄球菌。这里,“,加入,”,是在主要营养成份完备基础上进行。,(2),改变培养基中营养成份。缺乏氮源时能够分离出固氮微生物；以石油作为唯一碳源时，能够分离出能消除石油污染微生物。,(3),改变微生物培养条件。比如，将培养基放在高温环境下培养，能够得到耐高温微生物。,方法技巧,第10页,2.(,全国,，,37),在生产、生活和科研实践中，经常经过消毒和灭菌来防止杂菌污染。回答以下问题：,(1),在试验室中，玻璃和金属材质试验器具,_(,填,“,能够,”,或,“,不能够,”,),放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。,解析,干热灭菌是指将物品放入干热灭菌箱内，在,160,170,条件下加热,1,2 h,。耐高温、需要保持干燥物品，如玻璃器皿,(,吸管、培养皿,),和金属用具等，可采取干热灭菌方法。,能够,答案,解析,1,2,3,4,5,6,第11页,(2),牛奶消毒常采取巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法优点是,_,。,解析,巴氏消毒法是在,70,75,条件下煮,30 min,或在,80,条件下煮,15 min,，能够杀死牛奶中微生物，而且使牛奶营养物质损失较少。,在到达消毒目标同时，营养物质损失较少,答案,解析,1,2,3,4,5,6,(3),密闭空间内空气可采取紫外线照射消毒，其原因是紫外线能,_,_,。在照射前，适量喷洒,_,，可强化消毒效果。,解析,接种室、接种箱或超净工作台在使用前，能够用紫外线照射,30 min,，紫外线能破坏微生物,DNA,结构，以杀死物体表面或空气中微生物。在照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，能够强化消毒效果。,破坏,DNA,结构,消毒液,第12页,(4),水厂供给自来水通常是经过,_(,填,“,氯气,”“,乙醇,”,或,“,高锰酸钾,”,),消毒。,解析,自来水通常是用氯气进行消毒。,氯气,答案,解析,1,2,3,4,5,6,(5),某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力到达设定要求，而锅内并没有到达对应温度，最可能原因是,_,。,解析,在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力到达设定要求，而锅内并没有到达对应温度，最可能原因是锅内原有冷空气没有排尽。,未将锅内冷空气排尽,第13页,1,2,3,4,5,6,三种惯用灭菌方法比较,模型构建,灭菌方法,灭菌条件,灭菌时间,适用材料或用具,灼烧灭菌,酒精灯火焰充分燃烧层,直至烧红,接种环、接种针或其它金属工具,干热灭菌,干热灭菌箱内，,160,170,1,2 h,玻璃器皿,(,吸管、培养皿,),和金属用具等,高压蒸,汽灭菌,100 kPa,121,15,30 min,培养基等,第14页,3.(,全国,，,39),空气中微生物在重力等作用下，能够一定程度地沉降。某研究小组欲用平板搜集教室空气中微生物，以了解教室内不一样高度空气中微生物分布情况。试验步骤以下：,配制培养基,(,成份：牛肉膏、蛋白胨、,NaCl,、,X,、,H,2,O),；,制作无菌平板；,设置空白对照组和若干试验组，进行相关操作；,将各组平板置于,37,恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落平均数。,1,2,3,4,5,6,第15页,1,2,3,4,5,6,解析,牛肉膏和蛋白胨都能够作为氮源；平板为固体培养基，故需要加入凝固剂琼脂。,回答以下问题：,(1),该培养基中微生物所需氮起源于,_,。若要完成步骤,，该培养基中成份,X,通常是,_,。,牛肉膏、蛋白胨,琼脂,答案,解析,第16页,1,2,3,4,5,6,解析,试验探究是教室内,“,不一样高度空气,”,中微生物分布，其中变量为不一样高度，故需在不一样高度下放置开盖平板。同时，为了确保单一变量，需要确保开盖放置时间一致。为了确保试验可靠性，需要设置多个平行组。,(2),步骤,中，试验组操作是,_,_,。,将各试验组平板分别放置在教室不一样高度,位置上，开盖暴露一段时间,答案,解析,第17页,1,2,3,4,5,6,解析,在完全正确操作情况下，空白对照组中不应出现菌落。若出现菌落，表明操作过程中存在杂菌污染，属于试验失误，全部试验数据均不应采取。,(3),若在某次调查中，某一试验组平板上菌落平均数为,36,个,/,平板，而空白对照组一个平板上出现了,6,个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了,_,现象。若将,30(,即,36,6),个,/,平板作为本组菌落数平均值，该做法,_(,填,“,正确,”,或,“,不正确,”,),。,污染,不正确,答案,解析,第18页,1,2,3,4,5,6,关注两种对照组与一个重复组,(1),将未接种选择培养基与接种选择培养基一起培养,用于确认培养基灭菌是否彻底,(,制备是否合格,),。,(2),将接种普通培养基与接种选择培养基一起培养,用于确认选择培养基是否起到,“,筛选,”,作用。,(3),进行微生物计数时，每一稀释度下涂布三个平板，即设置重复组，是为了求平均值，提升计数准确度。,方法技巧,第19页,4.(,保山第二次统测,),李斯特菌广泛存在于各类食品中，李斯特菌在李斯特菌显色培养基上培育时菌落会展现蓝绿色。在当前发觉,16,种李斯特菌中单增李斯特菌是唯一对人有致病性一个，与其它李斯特菌相比，单增李斯特菌还能合成并分泌磷脂水解酶，使培养基中磷脂被分解而在单增李斯特菌菌落周围出现白色晕环。,(1),与单增李斯特菌相比，其它李斯特菌不能合成并分泌磷脂水解酶原因是,_,。,1,2,3,4,5,6,解析,依据以上分析可知，单增李斯特菌含有磷脂水解酶基因，而其它李斯特菌不含有控制磷脂水解酶合成基因，所以其它李斯特菌不能合成并分泌磷脂水解酶。,其它李斯特菌不含有控制磷脂水解酶合成基因,答案,解析,第20页,1,2,3,4,5,6,解析,将该食品样品加入经高压蒸汽灭菌李斯特菌选择培养液中培养，以增加李斯特菌浓度，确保能从样品中分离到所需微生物。,(2),现要检测某食品中是否含有其它李斯特菌和单增李斯特菌，进行以下相关试验：,将该食品样品加入经,_,灭菌李斯特菌选择培养液中培养，培养目标是,_,。,高压蒸汽,增加李斯特菌浓度，确保能从样品中分离到所需微生物,答案,解析,第21页,1,2,3,4,5,6,解析,将经过培养菌液用无菌水进行系列稀释后，利用稀释涂布平板法接种到判定李斯特菌培养基上。判定李斯特菌培养基与李斯特菌选择培养液相比，还需额外添加显色剂、磷脂和琼脂。,将经过培养菌液用,_,进行系列梯度稀释后，利用,_,_,法接种到判定李斯特菌培养基上。判定李斯特菌培养基与李斯特菌选择培养液相比，还需额外添加显色剂、,_,和,_,。,无菌水,稀释涂布,平板,磷脂,琼脂,答案,解析,第22页,1,2,3,4,5,6,解析,若该食品中含有单增李斯特菌，则一段时间后，培养基上会出现蓝绿色且周围有白色晕环菌落。,将接种后培养基置于适宜条件下进行培养。一段时间后若培养基上出现,_,菌落，则说明该食品中含有单增李斯特菌。,蓝绿色且周围有白色晕环,答案,解析,第23页,5.(,太原高三模拟,),反刍动物如牛和山羊，含有特殊器官,瘤胃，瘤胃中生活着各种微生物，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行了研究，请回答以下问题：,1,2,3,4,5,6,第24页,解析,在样品稀释中需要使用无菌水稀释；在涂布平板操作中，需要使用酒精灯对涂布器进行灭菌，并在酒精灯火焰旁完成对培养皿涂布接种操作，所以从选项分析可知，显微镜和接种环不需要，故选,CE,。,(1),在样品稀释和涂布平板步骤中，以下选项不需要是,_(,多项选择,),。,A.,酒精灯,B.,培养皿,C.,显微镜,D.,无菌水,E.,接种环,答案,解析,1,2,3,4,5,6,第25页,解析,分装含琼脂培养基时，若试管口粘附有培养基，需要用酒精棉球擦净以防止培养基污染棉塞。,(2),向试管内分装含琼脂培养基时,若试管口粘附有培养基,需要用酒精棉球擦净原因是,_,。,防止培养基污染棉塞,答案,解析,1,2,3,4,5,6,第26页,(3),刚果红可与,_,形成红色复合物，研究人员在刚果红培养基平板上，筛选到了几株有透明降解圈菌落,(,见图,1,),。图中降解圈大小与纤维素酶,_,相关。图中降解纤维素能力最强菌株是,_(,填图中序号,),。,纤维素,答案,解析,1,2,3,4,5,6,量与活性,菌,2,第27页,解析,依据,“,刚果红能够与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心透明圈，我们能够经过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌,”,，所以在刚果红培养基平板上，能够筛选到有透明降解圈菌落，降解圈大小与纤维素酶量和活性相关。纤维素酶量越多，活性越强，分解纤维素越多，透明降解圈越大，所以图中降解纤维素能力最强菌株是菌,2,。,1,2,3,4,5,6,第28页,解析,在,20,长久保留菌株时，菌液中常需加入一定量甘油保藏。,(4),纤维素酶高产菌株在,20,长久保留时，菌液中常需加入一定量,_,保藏。,甘油,答案,解析,1,2,3,4,5,6,第29页,(5),研究人员用筛选到纤维素酶高产菌株,A,和,B,，在不一样温度和,pH,条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性结果如图,2,，推测菌株,_,更适适用于人工瘤胃发酵，理由是,_,_,。,B,答案,解析,1,2,3,4,5,6,发酵过程会产热和产酸，,B,菌株在较高温度和,酸性环境下酶活性更高,第30页,1,2,3,4,5,6,解析,因为胃部,pH,值较低，依据题意和图示分析可知，发酵过程会产热和产酸，,B,菌株在较高温度和酸性环境下酶活性更高，所以推测菌株,B,更适适用于人工瘤胃发酵。,第31页,6.(,新乡高三第二次模拟,),回答以下与微生物培养与应用相关问题：,(1),微生物培养需要使用培养基，不一样培养基配方不一样，但普通都含有,_,。在配制从土壤中筛选纤维素分解菌培养基时，需加入,_,作为唯一碳源。,答案,解析,1,2,3,4,5,6,解析,培养微生物不一样培养基，即使其配方不一样，但普通都含有碳源、氮源、水和无机盐。在配制从土壤中筛选纤维素分解菌培养基时，需加入纤维素作为唯一碳源。,碳源、氮源、水和无机盐,纤维素,第32页,解析,图示中产生每个菌落最初细菌数为,1,个才是最理想。采取平板划线接种时，经过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线操作，将聚集菌种逐步稀释分散到培养基表面，在数次划线后，就能够得到单菌落，据此分析图示可知：划线次序依次是,。,(2),下列图中产生每个菌落最初细菌数为,_,个才是最理想。据图分析，在培养基上划线接种时，划线次序依次是,_(,用编号和箭头表示,),。,1,答案,解析,1,2,3,4,5,6,第33页,解析,所用稀释液体积为,0.2 mL,，在稀释倍数为,10,4,培养基中测得平板上菌落数平均值为,25.6,，则每毫升样品中活菌数是,25.6,10,4,0.2,1.28,10,6,(,个,),。,(3),依据土壤样品稀释倍数和接种稀释液体积，统计平板上菌落数就能大约推测出样品中活菌数。某同学在稀释倍数为,10,4,培养基中测得平板上菌落数平均值为,25.6,，则每毫升样品中活菌数是,_,个,(,所用稀释液体积为,0.2 mL),。,1.28,10,6,答案,解析,1,2,3,4,5,6,第34页,解析,刚果红可与纤维素形成红色复合物，但并不和纤维素水解后纤维二糖和葡萄糖发生颜色反应，所以若要判别纤维素分解菌，可用刚果红染色法。在细菌分解尿素化学反应中，细菌合成脲酶将尿素分解成了氨，氨会使培养基,pH,升高，酚红指示剂将变红，所以若要判别尿素分解菌，可在培养基中加入酚红指示剂。,(4),若要判别纤维素分解菌，可用,_,法；若要判别尿素分解菌，可在培养基中加入,_,。,刚果红染色,酚红指示剂,答案,解析,1,2,3,4,5,6,第35页,
展开阅读全文
浙ICP备2021020529号-1 | 浙B2-20240490 
