抗核抗体的检测.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,抗核抗体,（antinuclear antibody，ANA）又称抗核酸,抗原,抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分如脱氧核糖核蛋白（DNP）、DNA、可提取的核抗原（ENA）和RNA等作为靶抗原的,自身抗体,的总称，能与所有动物的细胞核发生反应，主要存在于,血清,中，也可存在于胸水、关节滑膜液和尿液中。,ANA细胞靶抗原成份模式图,真核细胞,高尔基体,分泌颗粒,粗面内质网,核仁,核粒子,糖原颗粒,溶酶体,细胞骨架蛋白,细胞膜,线粒体,滑面内质网,中心粒,抗核抗体在多种自身免疫病中均呈不同程度的阳性率，如,系统性红斑狼疮（SLE，95%100%）、,类风湿性关节炎（RA，10%20%）、,混合性结缔组织病（MCTD，80%100%）、,干燥综合症（SjS,10%40%）、,全身性硬皮病（85%90%）、,狼疮性肝炎（95%100%）、,原发性胆汁性肝硬化（95%100%）等，,但经皮质激素治疗后，阳性率可降低。,利用一定波长的激发光对样品进行激发，产生一定波长的荧光，对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。,荧光显微镜的工作原理,荧光显微镜的结构,三 操作步骤,1.抗原片的制备,处死小鼠,取肝脏,找到肝门静脉用生理盐水清洗干净,切下切面为0.5-1cm,2,的肝组织,印片,晾干,加丙酮固定10-15min,2.荧光染色,在做好的肝印片上加待测血清 阴阳性对照各50l,把加好的血清的肝印片放于37湿盒中温育30min,PBS洗涤5次，再用蒸馏水洗3次,晾干后每孔加50l 荧光标记抗体,37湿盒中温育30min,PBS洗涤5次，再用蒸馏水洗3次,晾干后甘油封片,3.镜检,阴性：没有荧光,阳性：黑色背景下出现黄绿色荧光,非特异性的染色：模糊 较暗 块状 片状荧光,特点：,核质均匀染色，分裂期浓 缩染色,ANA：均质型,特点：,核质呈藕孔状,ANA：斑点型,相关疾病：,SLE、药物狼疮等,相关疾病：,SLE、MCTD、SS等,五 注意事项,1.抗原片不宜太厚，否则容易出现非特异性荧光,2.滴加血清或者荧光标记抗体一定要覆盖抗原片，否则容易出现假阴性,3.染好的片子要及时观察,六 临床意义,