实验二微生物培养与鉴定.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,之前我们介绍过传统的微生物分类鉴定，由于是以形态、生理生化等特征为依据，因此实验过程比较繁琐，时间也比较长。,微生物的快速鉴定和自动化分析技术,如何使微生物的鉴定快速、准确、简易和自动化，一直是微生物工作者的研究热点。随着微电子、计算机、分子生物学、物理、化学等先进技术向微生物学的渗透和多学科的交叉，这方面的技术在微生物鉴定中被广泛使用，推动了微生物学的发展。,1,1微量多项试验鉴定系统,微量多项试验鉴定系统（细菌的自动化鉴定）是建立在数值（编码）鉴定的基础上的。,常规(传统)分类鉴定需要测定项目众多，不能适应快速的需求，尤其临床病原菌的鉴定。因此，应运而生的出现多种类型成套鉴定系统及编码鉴定方法。,2,该方法的基本原理是针对微生物生理生化特征，配制各种培养基、反应底物、试剂等，分别微量（约0.1mL）加入各个分隔室中（或用小圆纸片吸收），冷冻干燥脱水或不干燥脱水，各分隔室在同一塑料条或板上构成检测卡。,3,下面给大家介绍API/ATB系统中的API20E系统。,API20E系统主要用于肠杆菌科细菌的鉴定，可在24小时内鉴定革兰氏阴性的杆菌108种或项（肠杆菌科、弧菌科、非发酵革兰氏阴性杆菌）。,肠杆菌科在环境中及动物产品中非常普遍，其中部份是致病性(沙门氏、耶尔森氏等,),6,该系统的鉴定卡是一块有20个分隔室的塑料条，分隔室由相连通的小管和小杯组成，各小管中含有不同的脱水培养基、试剂或底物等，每一分隔室可进行一种生化反应，个别的能进行两种反应。,（上图为阳性反应。下图为阴性反应）,7,8,API 20 E,需额外补充氧化酶结果,孵育18-24 小时，37,o,C,鉴定可使用,阅读表,编码手册,APILAB PLUS软件,9,试验过程:,按照要求，将菌液加入每一分隔室,培养(有的还需要添加试剂),观察鉴定卡上20个分隔室中的反应变色情况，判定阳性或阴性,编码(,每三个反应项目编为1组，共有7组，每组中每个反应项目定为一个数值，依次为1、2、4，各组中试验结果判定为阳性的记为“+”，并写下其所定的数值，反应为阴性的记为“”，并写为0，每组中的数值相加，便是该组的编码数，这样便形成了7位数的编码),查阅API20E系统的检索表或输入计算机检索，就能鉴定出该菌是什么菌种或生物型。,10,11,API 试剂盒及其配套试剂(API 20E),培养盒,保持潮湿环境,石腊油,(,容量,:125ml),覆盖在指定小孔上,悬浮液,(,容量,:5ml),用於调菌液,附加试条,加进指定的生化孔内,API 20E,试条,每个小孔载有风乾的底物,PSIpettes,接种管,挑菌落，混匀及接种,安培架,操作步骤 1 (,API 20E),分离单个菌落,挑单个可疑菌落,尽量避免使用高度选择性培养基,调制菌液,悬浮液,(,容量,:5ml),操作步骤 2 (,API 20E),将菌液接种到小管或小管及小杯,(CIT,VP,和,GEL),将试条放进培养盒内,将,5ml,无菌水放进培养盒里,利用石腊油覆盖指定的生化孔,(,有划线的孔,),ADH,ODC,H2S,URE,把培养盖盖上（防水份蒸发）,操作步骤 3 (,API 20E),把试条放进孵育箱内，利用指定温度及时间,API20E:35-37,o,C,，,18-24,小时,按操作说明书规定，将附加试剂加进适当小孔内,api20E 试剂,18-24 小时後,阅读结果,利用编码手册,或,APILAB,PLUS,软件进出分析,根据说明书上，或彩图的指示，记录结果於报告单上。,17,18,目前国际上常用的,6,种微量多项试验鉴定系统的优缺点比较见下表：,19,2,自动化的微生物鉴定仪,应用较早的而普遍的有法国,Bio-Merieux Vitex Inc,公司生产的微生物鉴定仪（,auto microbial sysytem,，简称,AMS,）。,还有半自动化的鉴定仪，也是,Bio-Merieux,公司生产的,ATB(automatic testing bacteriology),。,另外还有美国安普中心生产的,biolog,仪。,20,环境生物实验室目前所拥有的微生物自动鉴定系统是,Bio-Merieux,公司生产的,ATB Expression,仪。,21,22,最后介绍一下选条：,无论是自动条还是人工条，在实验开始前，必须正确选择合适的鉴定条，这是十分重要的。,选择的方法是：通过对几个简单的特征（革兰氏染色、形态观察、氧化酶和接触酶等）的测定，来确定鉴定条。,23,24,本实验要求每个学生在实验结束后独立完成并提交实验报告。实验报告的具体要求如下：,1、实验报告的格式要求,实验报告应由如下部分组成：,实验目的、实验原理、实验材料、实验过程（步骤）以及实验结果和讨论。,附录：实验报告要求,25,2、在实验报告的实验结果和讨论部分，应该说明以下问题：,本人在本实验中鉴定细菌的实验结果是什么？,所得到的实验结果该如何解释？,实验所给出的鉴定结果是否可信？理由何在？,与标准手册上所描述的该种细菌特性相比？你所鉴定的细菌菌株有什么差异？造成这种差异的原因是什么？,如果本实验所给出的鉴定结果不满意，应该如何继续下一步的实验？,26,自主实验：,同学们可以将自行分离得到的细菌菌株，利用本实验室提供的鉴定仪和鉴定条进行鉴定。,对菌株的要求：,革兰氏阴性、杆状、氧化酶阳性或阴性,27,