[1]细胞生物学-第三版.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,2025/10/21 周二,1,第十二章 细胞增殖及其调控,细胞增殖（,cell proliferation,）是细胞生命活动的重要特征之一，,是生物繁育的基础。细胞增殖是多细胞生物繁殖基础。成体生物仍然需要细胞增殖，主要取代衰老死亡的细胞，维持个体细胞数量的相对平衡和机体的正常功能。机体创伤愈合、组织再生、病理组织修复等，都要依赖细胞增殖。,细胞周期概述,细胞分裂,细胞周期的调控,2025/10/21 周二,2,细胞周期,(cell cycle),概述,细胞周期,细胞周期中各个不同时相及其主要事件,细胞周期长短测定,细胞周期同步化,特殊的细胞周期,2025/10/21 周二,3,细胞周期,概念：从一次细胞分裂结束开始，经过物质积累过程，直到下一次细胞分裂结束为止，为一个细胞周期。,细胞周期时相组成：细胞沿着,G,1,期,S,期,G,2,期,M,期周期性运转，含有,4,个不同时相的细胞周期为标准的,细胞周期,。,细胞周期时间：不同细胞的,细胞周期时间差异,很大，,S+G,2,+M,的时间变化较小，细胞周期时间长短主要差别在,G1,期，,M,期持续时间更为恒定。,根据增殖状况，细胞分类三类,2025/10/21 周二,4,根据增殖状况，细胞分类三类,周期中细胞,(cycling cell),：,细胞连续分裂；,静止期细胞（,quiescent cell,）：,既,G,0,细胞，暂时离开细胞周期，停止细胞分裂。,终末分化细胞：分化程度很高，一旦生成后，终生不再分裂。,G,0,期细胞和终末分化细胞的界限有时难以划分，有的细胞过去认为属于终末分化细胞，目前可能被认为是,G,0,期细胞。,2025/10/21 周二,5,细胞周期中不同时,相,及其主要事件,G1,期,S,期,G2,期,M,期,M,期即细胞分裂期，真核细胞的细胞分裂主要包括两种方式，即体细胞的有丝分裂（,mitosis,）和生殖细胞的减数分裂（,meiosis,）。,遗传物质和细胞内其他物质分配给子细胞。,2025/10/21 周二,6,G,1,期,与,DNA,合成启动相关，开始合成细胞生长所需要的多种蛋白质、糖类、脂质等，同时染色质去凝集。,G1,期的晚期阶段有一个特定的时期，细胞继续分裂，可以通过这个特定的时期，进入,S,期。这一特定的时期称为限制点（,R,点）或检验点；,影响,R,点的外部因素包括营养供给和相关激素刺激；内在因素与一些细胞分裂周期基因调控过程相关。,检验点也存在于细胞周期的其他时相。,2025/10/21 周二,9,细胞周期长短测定,脉冲标记,DNA,复制和细胞分裂指数观察测定法,：应用,3,H-TdR,短期饲养细胞，数分钟至半个小时后将,3,H-TdR,洗脱，置换新鲜培养液继续培养；定期取样，放射自显影观察,S,期均被标记，最先进入,M,期细胞是被标记,S,期最晚细胞，经历时间为,G,2,期，从被标记,M,期细胞开始出现到占,M,期细胞比例最大值所经历的时间为,M,期，被标记的,M,期细胞占,M,期细胞总数的,50%,开始，历经最大值再到,50%,为,S,期，从被标记的,M,期细胞开始出现并逐渐消失，到被标记的,M,期细胞再出现为一个细胞周期总时间。,流式细胞仪测定法（,Flow Cytometry,）；,缩时摄像技术，可以得到准确的细胞周期时间及分裂间期和分裂期的准确时间。,2025/10/21 周二,10,细胞周期同步化,自然同步化：如有一种粘菌的变形体,plasmodia,，某些,受精卵早期卵裂,。,人工选择同步化：,有丝分裂选择法：用于单层贴壁生长细胞。优点是细胞未经任何药物处理，细胞同步化效率高。缺点是分离的细胞数量少。,密度梯度离心法：根据不同时期的细胞在体积和重量上存在差别进行分离。优点是方法简单省时，效率高，成本低。缺点是对大多数种类的细胞并不适用。,药物诱导法,条件依赖性突变株在细胞周期同步化中的应用：将与细胞周期调控有关的条件依赖性突变株转移到限定条件下培养，所有细胞便被同步化在细胞周期中某一特定时期,。,2025/10/21 周二,11,药物诱导法,DNA,合成阻断法,G1/S-TdR,双阻断法：最终将细胞群阻断于,G1/S,交界处。优点是同步化效率高，几乎适合于所有体外培养的细胞体系。缺点是诱导过程可造成细胞非均衡生长；,分裂中期阻断法：秋水仙素可以通过抑制微管聚合来抑制细胞分裂器的形成，将细胞阻断在细胞分裂中期。优点是操作简便，效率高。缺点是这些药物的毒性相对较大,2025/10/21 周二,12,特殊的细胞周期,特殊的细胞周期是指那些特殊的细胞所具有的与标准的细胞周期相比有着鲜明特点的细胞周期。,爪蟾早期胚胎细胞的细胞周期,酵母细胞的细胞周期,植物细胞的细胞周期,细菌的细胞周期,2025/10/21 周二,13,爪,蟾,早期胚胎细胞,的细胞周期,细胞分裂快,G,1,期,G,2,期非常短，,S,期也短（所有复制子都激活）,以至认为仅含有,S,期和,M,期；,无需临时合成其它物质；,子细胞在,G,1,、,G,2,期并不生长，越分裂体积越小；,细胞周期调控因子和调节机制与一般体细胞标准的细胞周期基本是一致的。,2025/10/21 周二,14,酵母细胞的细胞周期,酵母细胞的细胞周期与标准的细胞周期在时相和调控方面相似；,酵母细胞周期明显特点,:,酵母细胞周期持续时间较短；,封闭式细胞分裂，即细胞分裂时核膜不解聚；,纺锤体位于细胞核内；,在一定环境下，也进行有性繁殖。,2025/10/21 周二,15,植物细胞的细胞周期,植物细胞的细胞周期与动物细胞的标准细胞周期非常相似，含有,G,1,期、,S,期、,G,2,期和,M,期四个时期。,植物细胞不含中心体，但在细胞分裂时可以正常组装纺锤体。,植物细胞以形成中板的形式进行胞质分裂,2025/10/21 周二,16,细菌的细胞周期,慢生长细菌细胞周期过程与真核细胞周期过程有一定相似之处。其,DNA,复制之前的准备时间与,G,1,期类似。分裂之前的准备时间与,G,2,期类似。再加上,S,期和,M,期，细菌的细胞周期也基本具备四个时期；,细菌在快速生长情况下，如何协调快速分裂和最基本的,DNA,复制速度之间的矛盾。,细胞分裂,有丝分裂,有丝分裂过程,前期,(prophase),前中期,(prometaphase),中期,(metaphase),后期,(anaphase),末期,(telophase),胞质分裂,(cytokinesis),与有丝分裂直接相关的亚细胞结构,有丝分裂过程中染色体运动的动力机制,减数分裂,2025/10/21 周二,17,2025/10/21 周二,18,前期,（,prophase,）,标志前期开始的第一个特征是染色质开始浓缩，形成有丝分裂染色体；染色体由,两条染色单体,构成；,每条染色单体上，都含有一段着丝粒,DNA,，所在部位为着丝粒，着丝粒处形成主缢痕；在前期末，染色体主缢痕部位形成一种蛋白复合物称为,动粒,。,第二个特征是中心体发生剧烈变化，间期动物细胞含一个,MTOC,，即中心体，在间期进行复制；当前期开始时，,2,个中心体移向细胞两极，确定细胞分裂极，并同时组织微管生长，由两极形成的微管通过微管结合蛋白在正极末端相连，最后形成,有丝分裂纺锤体,，中心体与其周围的的微管一起被称为星体。,Golgi,体和,ER,消失。,2025/10/21 周二,19,前中期,(prometaphase),核膜破裂成小的膜泡，这一过程是由核纤层蛋白中特异的,Ser,残基磷酸化导致,核纤层解体,，界膜消失，解聚成核纤层蛋白，核骨架剧变，染色体进一步浓缩；,纺锤体微管与染色体的动粒结合，星体微管向核内侵入，有的星体微管捕获染色体，并于染色体一侧的动粒结合，形成动粒微管；或两极的星体微管形成极性微管；动粒微管、极性微管和辅助分子共同组成,前期纺锤体,。,纺锤体赤道面直径收缩，两极距离拉长，不断运动的染色体开始移向赤道板。,2025/10/21 周二,20,中期,(metaphase),所有染色体排列到赤道板,(,Metaphase Plate,),上，标志着细胞分裂已进入中期；,纺锤体呈现典型的纺锤样，染色体两侧的动粒微管长度相等，作用力均衡。,是什么机制确保染色体正确排列在赤道板上？,着丝粒微管动态平衡形成的张力,2025/10/21 周二,21,后期,(anaphase),排列在赤道面上的染色体的姐妹染色单体分离形成子代染色体，产生向极运动；,后期,(anaphase),大致可以划分为连续的两个阶段，即后期,A,和后期,B,：,后期,A,：动粒微管去装配变短，染色体向两极运动；,后期,B,：极性微管长度增加，两极之间的距离逐渐拉长，介导染色体向极运动。,染色体向两极运动依靠纺锤体微管的作用。,2025/10/21 周二,22,末期,(telophase),染色单体到达两极，即进入了末期，动粒微管消失，极性微管加长；到达两极的染色单体开始去浓缩；,核膜开始重新组装，核膜前体小泡结合到染色单体表面，小膜泡融合形成较大的双层核膜片段，再融合成完整的核膜，核孔复合体同时开始装配；,Golgi,体和,ER,重新形成并生长；,核仁也开始重新组装，,RNA,合成功能逐渐恢复，有丝分裂结束。,2025/10/21 周二,23,胞质分裂,(Cytokinesis),胞质分裂,(cytokinesis),开始于细胞分裂后期，在赤道板周围细胞表面下陷，形成环形缢缩，称为,分裂沟,(furrow),。分裂沟的位置与纺锤体极性微管和钙离子浓度升高的变化有关；,在分裂沟的下方，除肌动蛋白之外，还有微管、小膜泡等物质聚集，共同形成一个环状致密层,中间体（,midbody,）；,胞质分裂开始时，大量肌动蛋白和肌球蛋白在中间体处组装成微丝并相互组成微丝束，环绕细胞，称为,收缩环,（,contractile ring),。收缩环收缩、收缩环处细胞膜融合并形成两个子细胞。,与有丝分裂直接相关的亚细胞结构,中心体,：与微管组装和细胞分裂密切相关的细胞器。动物细胞通常含有一个中心体，由一对位于中央的中心粒和周围的无定型物质构成，两个中心粒互成直角排列。,动粒与着丝粒,：附着于着丝粒上的一种细胞结构，外侧附着纺锤体微管，内侧与着丝粒相互交织。每条中期染色体含有两个动粒，位于着丝粒两侧。,纺锤体：细胞分裂过程中的一种与染色体分离直接相关的细胞装置，由微管和微管结合蛋白组成。纺锤体两端为星体，组成纺锤体的微管有,三种类型,（星体微管、动粒微管和极性微管）。,有丝分裂过程中染色体运动的动力机制,染色体整列：,Mad,和,Bub,蛋白可以使动粒敏感化，促使微管与动粒接触。两种蛋白位于前期和中期染色体的动粒上。染色体被纺锤体微管捕获，两种蛋白就会从动粒上消失。染色体不被微管及时捕获，蛋白不能从动粒上消失，后期不能启动，染色体不能分离。,染色体分离,：后期,A,和后期,B,两个阶段，动粒微管变短是由于动粒段解聚所致，解聚是由于马达蛋白沿动粒微管向极部运动的结果。,2025/10/21 周二,26,减数分裂,(Meiosis),减数分裂的概念：减数分裂是细胞仅进行一次,DNA,复制，随后进行两次分裂，染色体数目减半的一种特殊的有丝分裂。,减数分裂的意义：确保世代间遗传的稳定性；增加变异机会，确保生物的多样性，增强生物适应环境变化的能力；减数分裂是生物有性生殖的基础，是生物遗传、生物进化和生物多样性的重要基础保证。,前减数分裂间期,减数分裂过程,减数分裂过程的特殊结构及其变化,2025/10/21 周二,27,前减数分裂间期,S,期持续时间较长,；,减数分裂间期的,S,期仅复制,DNA,总量的,99.7,99.9%,，剩余的要等到减数分裂前期,才进行复制；,大多数生物的前减数分裂间期的细胞核大于体细胞核，根据生物种类不同，前减数分裂间期的,G,2,期的长短变化较大。,2025/10/21 周二,28,减数分裂前,S,期与有丝分裂前,S,期长度比较,物种,减数分裂,前,S,期,有丝分裂,前,S,期,蝾螈,10d,12h,小鼠,14h,56h,小麦,12h,3.8h,酵母,1h,0.5h,减数分裂的过程,减数分裂,：,前期,：分为细线期，偶线期，粗线期，双线期和终变期等五个阶段。,中期,：纺锤体组装，四分体排列在赤道面上。,后期,：同源染色体彼此分离并向两极移动，到达两极的染色体数目为细胞内染色体总数的一半。,末期,，胞质分裂,和减数分裂间期,：,染色体到达两极，逐渐凝集，核膜重现，形成两个间期子细胞；,不回复到间期，立即准备第二次减数分裂。,减数分裂,：与有丝分裂过程相似，经过减数分裂前期,、中期,、后期,、末期,和胞质分裂,。,经过减数分裂共形成,4,个子细胞,。,2025/10/21 周二,29,2025/10/21 周二,30,前期,细线期：染色质纤维逐渐折叠，螺旋化，变短变粗，形成细纤维样染色体结构；,偶线期：发生同源染色体配对，形成二价体，又称四分体，同源染色体配对的过程为,联会,，在联会的部位形成,联会复合体,，与基因重组有关；,粗线期：染色体浓缩，变粗变短，在联会复合体中间出现重组节，发生,等位基因之间部分,DNA,片段的交换和重组,，产生新的等位基因；,双线期：重组结束，同源染色体相互分离，仍然有联系的部位称为交叉，双线期持续时间一般较长；（灯刷染色体）,终变期：染色体开始重新凝集，交叉向染色体臂的端部移行,端化，同源染色体仅在端部和着丝粒处相互联接。,减数分裂过程的特殊结构及其变化,性染色体的分离：,XX,染色体可以像常染色体一样进行配对、交换和分离；,XY,染色体在前期,可以进行配对，在分裂中期,排列在赤道面上，而后随常染色体分离而分离。,联会复合体和基因重组,：联会复合体是同源染色体在减数分裂前期联会时所形成的一种临时性结构。沿同源染色体长轴分布，由位于中间的中央成分和位于两侧的侧成分构成，侧成分外侧为配对的同源染色体。蛋白质和,DNA,片段是联会复合体的主要组成成分，另外还含有,RNA,。,2025/10/21 周二,31,2025/10/21 周二,32,细胞周期的调控,（,Cell-Cycle Control,）,MPF,的发现及其作用,p34,cdc2,激酶的发现及其与,MPF,的关系,周期蛋白,CDK,激酶和,CDK,激酶抑制物,细胞周期运转调控,其他内在和外在因素在,细胞周期,调控中的作用（癌基因和抑癌基因）,2025/10/21 周二,33,MPF,的发现及其作用,MPF,（卵细胞促成熟因子,Maturation-promoting factor,，细胞促分裂因子,Mitosis-promoting factor,）的发现及其生化实质：,细胞融合与,PCC,（染色体超前凝集,Premature chromosomal condense,）,爪蟾卵子成熟过程,MPF,的发现,在成熟的卵细胞中，,MPF,已经存在，处于非活化状态的前体。主要含有,p32,和,p45,两种蛋白，表现出蛋白激酶的活性。,2025/10/21 周二,34,p34,cdc2,激酶的发现及其与,MPF,的关系,酵母中与细胞分裂和细胞周期调控有关的的基因称之为,cdc,（,cell division cycle,）,基因；,cdc2,是裂殖酵母细胞最重要的基因，该基因突变导致细胞停留在,G,2,/M,交界处。,p34,cdc2,激酶是,cdc2,基因表达的产物，具有蛋白激酶的活性，在细胞周期调控中，起关键性调节作用；,p34,cdc28,激酶在,G,2,/M,转换过程中起中心调节作用，同时对,G,1,/S,转换也是必需的。,p34,cdc2,和,p34,cdc28,只有与有关的蛋白才能表现激酶的活性。,MPF,中的,p32,可以被,p34,cdc2,特异抗体所识别，并且,p34,cdc2,多肽片段可以增强,MPF,的活性，两者为同源物。,MPF,是一种使多种底物蛋白磷酸化的蛋白激酶，含有两个亚单位,cdc2,和周期蛋白。,2025/10/21 周二,35,周期蛋白在细胞周期表达的时期有所不同，执行的功能也多种多样。,G1,周期蛋白只在,G1,期和,S,期转换过程中执行调节功能，在细胞周期中存在时间较短，,M,期周期蛋白在间期表达和积累，但在,M,期调节，在细胞周期中相对稳定。,周期蛋白有共同的分子结构特点,含有一段相当保守的氨基酸序列,周期蛋白框（,cyclin box,）,周期蛋白框约有,100,个氨基酸残基，介导周期蛋白与,CDK,结合。不同的周期蛋白框识别不同的,CDK,，组成不同的周期蛋白,-CDK,复合体，表现不同的,CDK,激酶活性。,M,期周期蛋白分子结构近,N,末端含有一段,9,个氨基酸残基的破坏框，该框参与由泛素介导的周期蛋白,A,和,B,的降解，,G1,周期蛋白,C,末端,PEST,序列与更新有关。,周期蛋白,（,cyclin,）,2025/10/21 周二,36,CDK,激酶和,CDK,激酶抑制物,CDK,激酶,（周期蛋白依赖性蛋白激酶）：含有一段类似的氨基酸序列，都可以与周期蛋白结合，并将其作为调节亚单位，进而表现出蛋白激酶的活性；,不同的,CDK,激酶结合不同的周期蛋白，执行不同的调节功能。,CDK,分子均含有一段类似的,CDK,激酶结构域，其中一小段,PSTAIRE,序列相当保守，可能与周期蛋白结合有关，另外，,CDK,分子中发现磷酸化修饰位点，对,CDK,激酶活性起调节作用。,CDK,激酶抑制物（,CDKI,）：对,CDK,激酶活性起负调控的蛋白。分别归为,Cip/Kip,家族和,INK4,家族。,细胞周期运转调控,G,2,/M,期转化与,CDK1,激酶的关键性调控作用,M,期周期蛋白与分裂中期向分裂后期转化,G,1,/S,期转化与,G,1,周期蛋白依赖性,CDK,激酶,DNA,复制延搁检验点与调控,S/G,2,/M,期转化：,细胞中存在检查,DNA,复制进程的检控机制，,DNA,复制不完成，,M,期,CDK,激酶的活性不能表达，,Weel,（抑制作用）和,Cdc25e,（激活作用）参与了,DNA,复制延搁检验点的调控过程。,某些,CDK,与周期蛋白的配对关系及执行功能的时期,2025/10/21 周二,38,CDK,可能结合的周期蛋白,执行功能的可能时期,CDK1(P34,cdc2,),A,B1,B2,B3,G,2,/M,CDK2,A,D1,D2,D3,E,G,1,/S,S,CDK3,G,1,/S,CDK4,D1,D2,D3,CDK5,D1,D3,G,1,/S,CDK6,D1,D2,D3,CDK7,H,CDK8,C,CDK9,T1,T2a,T2b,K,CDK10,G,2,/M,2025/10/21 周二,39,G,2,/M,期转化与,CDK1,激酶的关键性调控作用,CDK1,激酶（,MPF,）由,p34,cdc2,蛋白和周期蛋白,B,结合而成，,CDK1,激酶的活性依赖于周期蛋白,B,的积累，,MPF,随,Cyclin,浓度变化而变化,。,激酶与磷酸酶的调节,：,CDK1,激酶通过使某些蛋白质磷酸化，改变下游的某些蛋白质的结构和启动其功能实现对细胞周期的调节（表,12-3,）。,CDK1,激酶活性受多种综合因素调节,，周期蛋白和,CDK,结合是先决条件，而后,Weel/Mikl,激酶和,CDK,激活激酶（,CAK,）催化,CDK,磷酸化，,CDK,在磷酸酶,Cdc25c,的催化下去磷酸化后，才表现激酶的活性。,功能,：启动细胞从,G2,期进入,M,期的相关事件。,2025/10/21 周二,40,M,期周期蛋白与分裂中期向分裂后期转化,M,周期蛋白,A,和,B,在分裂中期后通过,泛素化途径,（,Ubiquitination pathway,）降解；,后期促进复合物,Anaphase Promoting Complex(,APC,),支持周期蛋白,B,通过泛素化途径降解：,APC,至少有十五种成分组成。,APC,也调节其他一些与细胞周期调控有关的非周期蛋白类蛋白质的降解。,APC,活性受多种因素调控，,Cdc20,为正调控因子位于染色体动粒上，为姐妹染色体分离所必需。纺锤体组装不完全，动粒不能被动粒微管全部捕捉，,APC,不能被激活。,Mad2,的作用与,Cdc20,结合而抑制,APC,的活性。,纺锤体组装完毕，动粒微管全部捕捉动粒，,Mad2,消失，,Cdc20,抑制解除，,APC,活化,，才启动细胞向后期转换。,2025/10/21 周二,41,G,1,/S,期转化与,G,1,周期蛋白依赖性,CDK,激酶,G,1,期的周期蛋白主要包括周期蛋白,D,、,E,或许还有,A,，与,G,1,期周期蛋白结合的,CDK,激酶主要包括,CDK2,和,CDK6,；周期蛋白,D,与,CDK4,和,CDK6,结合，周期蛋白,E,与,CDK2,结合；周期蛋白为细胞,G,1,/S,期转化所必需。,周期蛋白,E,在,G,1,期晚期合成，一直持续到细胞进入,S,期，周期蛋白,E-CDK2,激酶活性为,S,期启动所必需。,周期蛋白,A,也可以与,CDK2,结合，形成周期蛋白,A-CDK2,激酶。周期蛋白,A,的合成开始于,G,1,/S,转化期，进入,S,期后，周期蛋白,A-CDK2,激酶成为主要的,CDK,激酶，与,DNA,复制有关。,G,1,期周期蛋白到达,S,期后，通过泛素化途径降解。,2025/10/21 周二,42,2025/10/21 周二,43,2025/10/21 周二,44,Experimental demonstration of the coordinated,Synthesis of DNA and hitones.,2025/10/21 周二,45,2025/10/21 周二,46,2025/10/21 周二,47,2025/10/21 周二,48,2025/10/21 周二,49,2025/10/21 周二,50,2025/10/21 周二,51,2025/10/21 周二,52,2025/10/21 周二,53,2025/10/21 周二,54,2025/10/21 周二,55,.,MT behavior during formation of the metaphase plate.Initially,MT from opposite poles are different in length,.,Experimental demonstration of the importance of mecha-nical tension in metaphase checkpoint control.,2025/10/21 周二,56,2025/10/21 周二,57,2025/10/21 周二,58,2025/10/21 周二,59,2025/10/21 周二,60,2025/10/21 周二,61,2025/10/21 周二,62,2025/10/21 周二,63,2025/10/21 周二,64,2025/10/21 周二,65,2025/10/21 周二,66,a.,Electron micrograph of SC of human pachytene bivalent.(K:kinetochore;arrow:recombination nodules);,b.,Schematic diagram of SC;,c.,Electron micrograph of SC after treatment with DNase to remove chromasomal fibers.,2025/10/21 周二,67,2025/10/21 周二,68,Visible evidence of crossing over,2025/10/21 周二,69,2025/10/21 周二,70,2025/10/21 周二,71,人,M,期细胞与袋鼠（,Ptk,）,G1,、,S,、,G2,期细胞融合诱导,PCC,：提示,M,期细胞存在诱导,PCC,的因子；,2025/10/21 周二,72,处于第六期的爪蟾卵母细胞（,RD,前期,I,），具生发泡,GV,。,2025/10/21 周二,73,注射实验表明：孕酮诱导卵母细胞成熟；成熟卵细胞质中，含有卵母细胞成熟的因子，称做,MPF,。,2025/10/21 周二,74,2025/10/21 周二,75,2025/10/21 周二,76,2025/10/21 周二,77,2025/10/21 周二,78,CDK1,的调节与活化,;CAK=CDK1-Activiting Kinase,2025/10/21 周二,80,2025/10/21 周二,81,2025/10/21 周二,82,2025/10/21 周二,83,2025/10/21 周二,84,2025/10/21 周二,85,2025/10/21 周二,86,2025/10/21 周二,87,2025/10/21 周二,88,2025/10/21 周二,89,2025/10/21 周二,90,2025/10/21 周二,91,