细胞培养的注意事项.doc

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每天对待细胞比孝敬爹妈还用心,那真就是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,瞧在眼里怕丢了 ,培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢?
ﻫ早走早脱身,从此专注黑生物ﻫﻫ１。 严格无菌操作,多喷喷酒精,要就是对灭菌得东西不放心,自己包自己送自己烘干。
ﻫ　　２.　不要与别人共用试剂耗材,自己准备一套。
ﻫ　 ３、 有可能得话在拿到新细胞得时候做好支原体衣原体检测。ﻫﻫ　　4。 水浴锅很脏,生化培养箱要就是得手动加湿得话盘里得水也会很脏,勤换 (灭菌水加进去)。

　5、 晚上离开得时候最好给细胞房照紫外,超净台就是用完就开、ﻫﻫ　 6、 最好得就是同一时间就您一个人在用细胞房在养细胞。ﻫ
　非科班出身经验分享

　1、 别怕浪费。枪头什么得只要有可能污染就换,如果用酒精灯就什么都稍微烤一下,别直接放到火上,离一段距离、ﻫ
　2、 动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆得气泡,动作太轻就吹不下来.。、 刚开始得时候吹细胞太痛苦了,稍微一下就起泡。后来就就是吹得时候枪里得培养基不要一次全都压出来,留一点,枪得最头部尽量深得在液面以下。ﻫﻫ　　3。 离开过操作台得东西再进操作台之前一定要用酒精喷一遍,包括一切实验耗材、仪器、以及您带着手套得手。ﻫﻫ 　４。 实验结束后对实验台得消毒、紫外什么得,用前用后都照个　3０ 分钟、ﻫ
5。　身体得各个部分尽量得少接触不需要接触得地方得地方、比如实验台,又比如培养箱内部。
ﻫ 　6、 细胞得密度根据细胞得性质、传代得时间以及自己得心情来定。培养基得话最多最多不要超过 ２　天就要换一次。细胞可以不传代,但就是培养基就是一定要换得。

　 大概就就是,不该碰得地方不碰,有影响得地方少碰; 该使劲得时候绝对不含糊,不该使劲得地方一定忍住、如果就是比较简陋得操作台就一定要摆个酒精灯,所有操作紧密围绕在酒精灯周围进行。如果就是高级台子就多用酒精喷喷。感觉生物得实验,心疼钱就还就是不要做了。

　　最后一点点绝对非科班得经验。癌细胞真就是坚挺。有一次实在就是不想传了,放了 5　天吧,感觉都长了几层出来,培养基都黄了。抱着试一试得心情传了一次,又坚强得活过来了。当然,状态肯定也差得很了。ﻫ
　换种心情,好好生活!

　养了三年细胞,各种肿瘤细胞,说一点自己得瞧法:
ﻫ　　１。 培养细胞前,可以瞧瞧细胞特点说明书,包括细胞正常生长得状态图、传代、培养基得类型等。ﻫﻫ 2. 不同细胞生长周期不同,有得生长很快,比如说　MＤA-MB—2３1,传代得时候取离心悬液得十分之一就已经足够了,有得又就是特别慢,等得人心焦,BT474　就就是,传代就是一分二,复苏起始得时候两周多才能长满,所以就要在培养细胞得过程中多多摸索了。ﻫ
　 3、 对于娇弱得细胞,就得细心呵护了,胰酶消化不能过久,吹得时候要轻柔,离心时候也要注意转速与时间,每天都要去瞧一下细胞,肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。ﻫ
4。 冻存细胞复苏后第二天最好更换一次培养基。ﻫ
　　5。 培养箱隔一段时间彻底用酒精棉擦洗一次。ﻫﻫ 　6、 养细胞最大得教训:不能偷懒！
ﻫ　细胞虐我千百遍,我待细胞如初恋。
ﻫ　　１。　不管买得细胞、惠赠得细胞,刚拿到手赶紧做两件事:检测就是否有支原体污染; 迅速扩增冻存。
ﻫ　 2。 发现有污染迅速处理掉,特别就是当您养了很多种细胞时; 细菌污染,真菌污染很容易发现,支原体污染得话,细胞会长得慢,买个支原体检测得　ｋit 定期检测一下。ﻫﻫ　　3、 细胞房日常得值日清洁就是必须得,此外还要定期熏蒸。ﻫ
　 4.　细胞得传代一定要规律,保持相同得 ｃonflueｎcy　与传代时间间隔,不要随心所欲或者拖延。

　 5.　注意个人卫生。ﻫﻫ　靠内心感动细胞ﻫ
　1。　自己得细胞自己养,血得教训。
ﻫ　 ２. 在生物安全柜 (或者超净台),枪头,血清管,血清,培养基,瓶子都足够好,并且细胞房有良好得卫生措施 (比如隔离服,手套,口罩,清洁,HEPA 等等)　且不违法操作原则得情况下,您其实很难污染。
ﻫ 3、 上述条件不完备得情况下,就要多注意无菌操作了:比如要用得东西提前拿到台子里照啊 (不过这个其实也不大好,因为会挡住紫外线),使用前　SDS＋酒精擦台子,进出超净台一定要酒精擦手。ﻫﻫ　　4、 少对细胞说话,多靠内心来感动它们 (就是得！　心不诚就是不可以得！) 至少 １　天瞧　1 次、

养细胞很容易

　　养细胞真得不难,最关键几点:
ﻫ 　１. 所有得东西使用最好得,如果您用得血清、培养皿、培养基、胰酶什么得都就是进口得,真得很难相信您会把细胞养坏。ﻫ
　2. 动作要快,胰酶消化,换液什么,细胞暴露在空气中得时间越少越好。另外,要掌握好胰酶消化时间,所谓得细胞状态差,很多时候就是传代得原因。
ﻫ　 ３。 有时间得话,需要细胞计数,传相应数目得细胞到培养皿中,可以大致清楚细胞得生长曲线,不会临时要处理,手足无措。
ﻫ 　4。　要做什么心里要非常清楚,合理安排时间,细胞房得实验穿插进行,可以节省很多时间,也不会耽误别人得实验。

　５。 个人得实验器具自己收一套,不要与别人混用,最近换了什么新得东西稍微记一下,试剂一旦怀疑污染,马上丢。ﻫ
　6. 细胞房不能进去太多人,避免相互干扰。ﻫﻫ　细胞养不好,自挂东南枝

　　现在一大型药企养细胞做检测,工作量很大,很多地方都没办法非常仔细得做、但就是两年下来只出现过一次污染,总结一下心得:ﻫ
　 1。 好得洁净室,空调系统跟得上。ﻫ
　2。 好得生物安全柜,硬件跟得上。

　　3、 瓶子移液器吸头大都就是进口,耗材跟得上。除了这些就就是自己得操作习惯了。ﻫ
　 4。 任何东西不要从敞开得瓶口上面经过、ﻫﻫ　 5. 虽然酒精灯会干扰安全柜气流但就是还就是需要一盏用来勤烧瓶口、

　 6、　实验时所用材料得位置摆放要顺手,污染源与已灭菌物品要分开放置、
ﻫ 养细胞就像打仗

　 细胞饲养涵盖得内容太广了,而且不同种类细胞得饲养难度以及技术要求不同,肿瘤细胞,成纤维细胞,上皮细胞、。、 甚至各类干细胞.、、 每一种都有自己得生长要求。如果只就是单纯得一般性操作,大同小异,个人觉得练好技术得情况下注意几点就好:
ﻫ 　１。　各种无菌,从培养基到操作过程再到培养箱,时刻注意无菌。本人曾经所在得实验室出现过大规模污染并最终导致所有细胞集体毁灭、。. 教训惨痛。ﻫ
　 2。 培养基得配制一定要做好梯度摸索并详细记录,否则细胞死都不知道怎么死得、ﻫ
3、 尽量提高操作熟练度,减少培养皿在培养箱外得滞留时间,细胞很脆弱,经不起折腾,不像人,热了有空调,冷了能烤火、ﻫ
　　4。 把握好培养基更换得时间,不同细胞类型时间不同,早了浪费试剂,晚了可能全军覆没。ﻫ
5。　经验很重要,养细胞得很多经验您就是无法在公开得书籍与资料上找到得、多向实验室前辈学习,她们会让您少走很多弯路,真得、
ﻫ　 养细胞就像打仗,知彼知己,百战不殆。只有了解您养得对象,才能把她养好。ﻫﻫ　细胞就就是矫情ﻫ
　　养细胞细胞这个东西呢有得时候真说不清。养过一段时间得巨噬细胞,一开始操作各种谨慎小心,随时默念各种无菌原则,培养基什么得都用得进口得,其实国产货真得不差,有钱就就是任性! 但细胞还就是萎靡不振,两个多星期过后实在懒得管,换液等操作也很随意得草草进行,酒精也懒得喷,结果这货却开始疯长,过了几天居然达到一天要传一次代,而且数量甚至可以一传三, 所以说,有得细胞就就是矫情、