DB32∕T 3855—2020 构树组织培养技术规程(江苏省).pdf

ICS 65.020.20 B 61 DB32 江苏省地方标准 DB 32/ XXXXX2020 构树组织培养技术规程 Technical regulation for tissue culture of Broussonetia papyrifera 2020 - XX - XX 发布 2020 - XX - XX 实施 江苏省市场监督管理局 发 布 DB32/T XXXX2020 I 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准由江苏省林业局提出并归口。 本标准由江苏省林业科学研究院起草。 本标准主要起草人：陈庆生、黄婧、张敏、蒋泽平、周鹏、陆青、薛欢。DB32/ XXXXX2020 1 构树组织培养技术规程 1 范围 本标准规定了构树组织培养的母株选择、外植体选择与灭菌、诱导培养、增殖培养、瓶外生根培养、增殖苗扦插、插后管理和记录。 本标准适用于构树的组织培养。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。 凡是注日期的引用文件， 其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 LY/T 18822010 林木组织培养育苗技术规程 NY/T 3932013 绿色食品 农药使用准则 3 母株选择 选取生长健壮、无病虫害的构树单株。 4 外植体选择与灭菌 4.1 外植体采集 在4月7月，选择连续3 d 以上的晴天，采集母株上萌发的嫰枝作为外植体。 4.2 外植体表面灭菌 4.2.1 清洗 用中性洗洁精将外植体洗净，并用自来水冲洗 15 min 20 min。 4.2.2 灭菌 在超净工作台上，用 75 %乙醇溶液消毒外植体 5 s10 s，无菌水漂洗 1 次2 次；再用 10 %次氯酸钠溶液浸泡外植体 6 min8 min，无菌水漂洗 4 次6 次，每次 5 min；将漂洗后的外植体置于无菌滤纸上吸干表面水分。 5 诱导培养 5.1 培养基 诱导培养基参见附录A。培养基制备按照LY/T 18822010规定进行。 5.2 接种 DB32/ XXXXX2020 2 将外植体修剪为2 cm的带芽茎段，垂直接种到诱导培养基上。 5.3 培养条件 诱导培养的温度控制在2325，光照强度为1500 lx3000 lx，光照时间为8 h/d12 h/d，培养室湿度为70 %80 %。 5.4 转接 诱导培养25 d30 d后，转接到6.1增殖培养基上进行增殖培养。 6 增殖培养 6.1 培养基 增殖培养基参见附录A。培养基制备按照LY/T 18822010规定进行。 6.2 接种 将诱导培养的试管苗剪成1 cm2 cm的带芽茎段，接种到增殖培养基上。 6.3 培养条件 增殖培养的温度控制在2325，光照强度为1500 lx3000 lx，光照时间为10 h/d16 h/d，培养室湿度为70 %80 %。 6.4 继代培养 增殖培养25 d35 d后，转接至新鲜的增殖培养基。 7 瓶外生根培养 7.1 设施 宜在温室进行培养。 7.2 容器 宜采用塑料穴盘，穴孔呈倒锥形，口径约4.5 cm，高约5 cm。旧穴盘需经消毒后才可使用。 7.3 基质 基质选用pH 6.2pH 6.8的草炭，用0.1 %高锰酸钾溶液将基质淋透消毒，分装到穴盘内。 8 增殖苗扦插 8.1 插条处理 选择生长健壮、高 6 cm8 cm 且叶片展开的增殖苗，清水洗净，剪去芽苗根部膨大部分，按单株剪下， 每株剪成 3 cm4 cm 带芽茎段作为插条。 插条基部 （0.5 cm1.0 cm） 速蘸 1000 mg/L 萘乙酸 （NAA）溶液 5s 以促进生根。 DB32/ XXXXX2020 3 8.2 扦插 用镊子将插条基部插入基质，扦插深度以 1 cm 为宜。 8.3 覆膜 扦插后浇透水，在穴盘上方覆盖塑料薄膜或保鲜膜。 9 插后管理 9.1 环境管理 穴盘置于温室中培养，温度为20 30 ，以25为宜，光照强度为2000 lx2500 lx，光照时间为12 h/d13 h/d，空气湿度75 %80 %。 9.2 揭膜 培养10 d15 d后撤去塑料薄膜或保鲜膜。 9.3 水肥管理 每隔3 d浇水1次，每两周喷一次叶面肥。 9.4 病虫害防治 每月喷1次药剂，宜采用75%百菌清可湿性粉剂700800倍液，50%马拉松乳剂1000倍液。防治方法按照NY/T 3932013规定执行。 9.5 出苗 苗高15 cm20 cm，活叶片数4片以上，根系生长健壮，无病虫害，即可出苗。 10 记录 根据组织培养技术规程内容进行记录，按时填写，做到准确无误，记录保存2年以上。 DB32/ XXXXX2020 4 附 录 A （规范性附录） 构树组织培养基配方 表A.1 构树组织培养基配方表 母液名称 药品名称 诱导培养基（mg/L） 增殖培养基（mg/L） 大量元素 KNO3 1800 1800 NH4NO3 720 720 KH2PO4 500 500 CaCl2 2H2O 100 100 MgSO4 7H2O 370 370 微量元素 MgSO4 4H2O 22.3 22.3 ZnSO4 7H2O 8.65 8.65 H3BO3 6.2 6.2 NaMoO4 2H2O 0.25 0.25 KI 0.83 0.83 CuSO4 5H2O 0.025 0.025 CoCl2 6H2O 0.025 0.025 铁盐 FeSO4 7H2O 27.8 27.8 Na2EDTA 37.2 37.2 有机质 氨基乙酸 2.0 2.0 盐酸硫胺素（VB1） 0.1 0.1 盐酸吡哆醇（VB6） 0.5 0.5 烟酸（VB3） 0.5 0.5 肌醇 100 100 糖 蔗糖 30000 30000 植物生长调节剂 6-苄氨基嘌呤（6-BA） 0.2 1.0 萘乙酸（NAA） 1.0 0.2 凝固剂 卡拉胶 6000 6000 注：FeSO4 7H2O应先与Na2EDTA配制成络合物，然后才与其他溶液混合。 _