动物衣原体病诊断与防控.pdf

临床兽医96 2023.110 引言在我国畜禽动物中，衣原体病患病概率较高，会严重影响牛、羊、猪以及鸡、鸭等动物的繁殖能力，会对动物健康造成较大危害，相关行业人员有必要深度剖析动物衣原体病的临床症状和病理变化，加大对动物衣原体病的诊断和防控力度，以促进动物健康发育，有效保证经济效益。1 病原动物衣原体病属于自然疫源性传染病，由于感染各类衣原体所致，感染动物常见禽类动物、哺乳类动物等。动物衣原体病呈现地方流行特征，较易带来严重危害，造成一定经济损失。尤其动物感染流产嗜衣原体后，会发生组织炎症或损伤，进而导致动物流产。动物衣原体主要来源哺乳类动物，呈球状，体积较小，以二分裂形式增殖，不仅具有DNA，也具有RNA，能在碱性染料作用下上色。衣原体抗原包括2种，一种是耐热性抗原，另一种是非耐热性抗原，大多数衣原体都会产生毒素，导致患病动物死亡。收稿日期：2023-09-04基金项目：自治区重点研发项目宁夏奶牛养殖区域重大疾病综合防控技术集成与创新（项目编号：2021BEF02019）作者简介：殷海燕（2000-），山东青岛人，在读硕士研究生，主要从事预防兽医学学习。*通信作者简介：李知新（1981-），男，宁夏隆德人，博士，高级兽医师，研究方向：畜禽疾病诊断。殷海燕，王晓亮，邸静，等动物衣原体病诊断与防控J现代畜牧科技，2023，102（11）：96-99doi：10.19369/ki.2095-9737.2023.11.026YIN Haiyan，WANG Xiaoliang，DI Jing，et alDiagnosis and Control of Animal ChlamydiaJModern Animal Husbandry Science&Technology，2023，102（11）：96-99动物衣原体病诊断与防控殷海燕1，王晓亮1，2，邸静2，尹才2，周海宁2，马龙2，林邱雄1，李知新1，2*（1.宁夏大学农学院，宁夏 银川 750021；2.宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心，宁夏 银川 750011）摘要：动物衣原体病是由动物感染动物源性衣原体所致的一种常见人畜共患病。在自然界中不依赖人类的存在而存在，是一类典型的自然疫源性传染病。该病呈地方流行，常对养殖业和公共卫生造成很大危害。羊衣原体感染使少数发病羔羊前肢或后肢腕关节、跗关节出现关节炎，使母羊在最后1个月发生流产、死胎和产出病弱羔羊。该文重点探究动物衣原体病的诊断方法和防控方法，以期指导相关行业人员在深入了解动物衣原体病临床症状、病理变化等方面的基础上，通过使用多种方法进行诊断，并采取合适的治疗措施加以防控，以保障动物健康。关键词：动物衣原体病；衣原体；诊断；防治措施中图分类号：S855文献标识码：Bdoi：10.19369/ki.2095-9737.2023.11.026Diagnosis and Control of Animal ChlamydiaYIN Haiyan1，WANG Xiaoliang1，2，DI Jing2，YIN Cai2，ZHOU Haining2，MA Long2，LIN Qiuxiong1，LI Zhixin1，2*（1.Shool of Agriculture，Ningxia University，Yinchuan Ningxia 750021，China；2.Ningxia Hui Autonomous Region Center for Animal Disease Control and Prevention，Yinchuan Ningxia 750011，China）Abstract：Animal chlamydia is a common zoonosis caused by animal infection with animal-derived chlamydia.It does not depend on the existence of human beings in nature，and it is a kind of typical natural infectious diseases.The disease is endemic and often does great harm to aquaculture and public health.Chlamydia trachomatis infection caused arthritis in the wrist and tarsal joints of a few diseased lambs，resulting in miscarriage，stillbirth and the birth of sick and weak lambs in the last month.This paper focuses on the diagnosis and prevention and control methods of animal chlamydia，in order to guide people in related industries to make diagnosis by using a variety of methods on the basis of in-depth understanding of the clinical symptoms and pathological changes of animal chlamydia disease.and take appropriate treatment measures to prevent and control，in order to protect animal healthKeywords：animal chlamydia，chlamydia，diagnosis，prevention and control measures临床兽医972023.112 临床症状动物种类不同、年龄不同及流行株毒力强弱不同，患病后通常产生不同的症状。羊、牛、猪等动物患病后，以流产、死产为主，感染衣原体后，羊、牛、猪的流产率最高可达90%，且多在怀孕后期发生流产。患病动物生产后，可能滞留部分胎衣，进而导致动物子宫内膜感染，最终死亡。公牛感染衣原体后，以生殖部位炎症现象为主，如睾丸炎、精囊炎等，公牛发病率在10%左右；公猪感染衣原体后，以睾丸炎、尿道炎现象为主；公羊感染衣原体后，较易发生结膜炎，表现为眼结膜充血水肿、溃疡穿孔等，其原因在于患病后，羊眼结膜细胞中会生成衣原体原生小体，进而导致羊眼睛感染。幼牛、幼猪、幼羊等感染衣原体后，通常出现咳嗽、流泪、鼻子下方分泌粘性液体、支气管炎等症状，部分幼牛、幼羊会伴随多发性关节炎。动物患衣原体病后，体温会显著上升，缺少进食欲望，部分动物关节部位会肿大，出现站立不稳现象1。3 病理变化动物衣原体病发生后，出现流产现象的患病动物会产生一定症状，如腹腔内部积液、流产胎儿水肿等。患病动物流产胎儿心内膜通常存在出血点，且肝脏处于肿大状态，胎儿皮肤表面存在淤血斑等。通过检查相应组织可发现，患病动物流产胎儿肝脏出现局部性细胞增生。如果动物本身患有脑脊髓炎，在感染衣原体初期，其胸腔、腹腔及心包处会渗出浆液，通过检查相应组织可发现，患病动物的脑脊髓存在神经原坏死现象。如果幼畜患衣原体病，往往会伴随卡他性胃肠炎出现，部分幼畜肺部会产生病灶，而部分幼畜会发生胸膜炎。如果动物本身患有多发性关节炎，在感染衣原体初期，关节部位会有浆液性发炎，且关节周围肌肉会发生水肿，严重情况下甚至充血、出血2。4 诊断4.1 病原学诊断方法第一，直接涂片镜检法。在无菌情况下对病料进行采集，包括动物血液、动物病变脏器以及动物流产胎儿等，完成采集后制片，使用Gimenez加以染色，如果衣原体具有感染能力，则呈现紫红色；相反，则呈现蓝绿色。在观察病理组织切片时，可见不规则形状或圆形形状衣原体包涵体存在于细胞之中。第二，鸡胚分离法。按0.4 mL/胚的剂量接种于7日龄鸡胚卵黄囊，并设对照组，38 条件下培养，逐日观察鸡胚存活情况，提取卵黄囊膜进行涂片，放在显微镜下检查，如果发现有较多衣原体存在，则完成诊断。第三，幼鼠接种法。取0.5 mL左右病料悬液，在大约3日龄小鼠脑中或腹腔内注入，待7 d后提取脑膜或将腹腔渗出液放在显微镜下检查，完成诊断。第四，细胞培养法。首先，使用血清和抗生素制成培养液，其中，血清来自具备衣原体抗体的胎牛，且抗生素对衣原体不产生抑制作用。其次，利用培养液对盖玻片单层细胞进行培养。最后，取0.5 mL左右病料悬液注入细胞中。37 培养2448 h后，能在细胞核旁见到幼龄包涵体。待7 d后使用Gimenez加以染色放在显微镜下检查，完成诊断3。4.2 血清学诊断方法第一，补体结合试验。该诊断方法在动物衣原体病检查中应用较为广泛，其原理在于以免疫溶血机制为基础，通过利用已知抗原进行指示系统制作，进而分析抗体存在情况。国外有专家学者在野禽血清抗体检测中采用该方法，但这种诊断方法存在非完全特异性的缺点。第二，间接血凝试验。在我国动物医院体病诊断技术标准中，补体结合试验和间接血凝试验是所规定的主要诊断方法。间接血凝试验是利用红细胞作为载体，通过在红细胞表面吸附抗原抗体，将红细胞置于合适的电解质环境条件下，判断是否存在被动特异性凝集现象，进而分析感染情况。这种诊断方法操作较为简单，对设备专业性要求较低，通常以间接血凝试剂盒形式进行检查即可。第三，免疫荧光试验。该诊断方法是对抗原进行荧光标记后，检测抗原与抗体特异性结合情况，进而分析是否存在衣原体感染。为使衣原体抗原和抗体的检测灵敏性加强，在临床诊断中适用，应保证标记抗体质量。在回顾性诊断中，常用微量免疫荧光法，但通过实验证明，仅将诊断滴度标准提高无法达到加强特异性的效果，由于克隆抗体的刺激作用也会导致结果阳性的出现，这种方法在肺炎嗜衣原体的诊断中应用敏感性最高。第四，免疫胶体金技术。该诊断技术属于新型免疫标记技术，主要在抗原抗体诊断中利用胶体金进行示踪标志，操作较为简便，大约15 min即可得到诊断结果，但在动物衣原体病的诊断中应用较少。第五，酶联免疫吸附试验。这种诊断方法主要将检测抗原或抗体与存在于固相载体表面的已知抗原或抗体进行反应，进而把通过酶标记的抗原或抗体加入其中，反应后在固相载体表面固定，继续将酶反应底物加入其中，经酶催化作用后形成有色产物，结合显色情况开展定量分析和定性分析4。5 治疗5.1 抗生素治疗动物衣原体病是由衣原体引起的一种常见传染病，多发生于冬季和早春，在潮湿、温暖的环境中更易发临床兽医98 2023.11生。临床上以发热、眼结膜充血、关节肿大和卡他性炎症为特征，呈急性或慢性经过。常见的症状发热、关节肿大、咳嗽和哮喘。衣原体病治疗原则：抗生素治疗为首选，主要用于轻型病例。抗生素选择：主要使用青霉素类药物，如阿莫西林等；根据衣原体的敏感性不同，按说明书推荐剂量使用，一般为710 d为1个疗程；通常建议在第1次使用抗生素后7 d内再用1次。抗生素可选择青霉素类或头孢菌素类药物。本品与磺胺类药、氨基糖苷类药联合使用疗效更佳。常用的有头孢哌酮/舒巴坦、阿奇霉素、克拉霉素等。预防用药：平时加强饲养管理，注意卫生，消除传染源。一旦出现该病后应及时治疗，可采用青霉素、四环素、红霉素等口服，也可注射或滴注抗菌药物。在治疗药物使用过程中，可以采用口服以及注射的方式，口服需要使用混饲四环素类抗生素进行治疗，用药约1个月后可起到显著效果。对于感染衣原体病的妊娠羊，需要使用长效土霉素进行治疗，提高患病羊体内的细胞活性，同时还可肌内注射加强霉素，以作进一步的治疗。在治疗过程中要保持良好的卫生和饮食卫生，避免与患羊接触，防止传播给其他羊。同时，患病动物圈舍应该注意卫生情况，经常消毒处理。虽然抗生素治疗是动物衣原体病的常用方法之一，但并不是唯一的治疗方法。如果患病动物存在其他疾病或症状，还要结合其他诊断和治疗方式。5.2 中医药治疗中医药治疗衣原体病具有一定的疗效，中医药的成分复杂，因此在动物衣原体病的治疗中可以起到较好的作用5，不容易产生耐药性。以下是一些常见的中药成分和治疗方法。黄柏：黄柏是一种中药材，具有清热、解毒、消炎的作用。可以用来治疗动物衣原体病，减轻症状。柴胡：柴胡是一种中药材，具有疏肝、解郁、清热等作用。板蓝根：板蓝根是一种常见的中药材，具有清热解毒的作用。蒲公英：蒲公英是一种中药材，具有清热解毒、利尿等作用。而且在治疗过程中，当野兔感染衣原体病时，可以使用黄连解毒汤作为主要的中医药种类对其进行治疗。在治疗后发现，经过高剂量的药物使用。野兔自身的衣原体病症状大大缓解6，对其抗肺炎衣原体有明显效果。同时还可以使用大青叶60 g、白术40 g、苍术20 g、黄芩30 g、连翘30 g、苦参30 g、白芍15 g、丹参30 g、甘草10 g或者黄柏、栀子各15 g，红花15 g。水煎服也可对衣原体病起到良好的治疗作用。同时发现，在针对沙眼衣原体治疗的过程中，可以使用清热利湿类型的中医药作为主要的药物类型，其中大黄提取物在临床试验过程中表现出了极好的体外抗沙眼效果，其能在衣原体病治疗中起到较好的效果。黄苓苷是一种中药成分，具有清热解毒、消炎止痛的作用。可以用于治疗动物衣原体病，减轻症状。阿莫西林是一种常用的抗生素，可有效治疗动物衣原体病。将阿莫西林与黄苓苷混合使用，可以提高药物的疗效。将四环素与黄苓苷混合使用，可以缓解疾病的严重程度。中医药治疗衣原体病具有一定的疗效，可以缓解症状、减轻症状和治疗疾病。在使用中药时，需要注意药物的用量和副作用，选择适当的药材和配方，避免对动物造成不良影响。5.3 生物活性因子治疗干扰素能对衣原体的复制进行抑制，进而使衣原体生长发育受到阻断，达到控制衣原体原体和网状体形成的作用。同时，对于沙眼衣原体，干扰素能诱导形成异形包涵体，使之处于持续感染状态，去除异形包涵体诱因后，又能恢复正常发育，导致感染复发。但有试验证明，小鼠衣原体可基于对Irgb10与IRG蛋白进入包涵体的限制而避免干扰素反应。白细胞介素，具有免疫抑制作用和免疫刺激作用，其能降低单核细胞表面相容性抗原的呈递效果，使淋巴细胞活性下调，对细胞免疫应答予以抑制，致使宿主更易感染衣原体。据试验证明，对于沙眼衣原体，在诱导白细胞介素产生的情况下，可能会使STAT3蛋白活化，进而对炎症因子的产生加以抑制7。白细胞介素抑制剂能治疗动物衣原体病。在补体成分中，C3含量最高，其能有效激活补体8。Hall R T等9研究发现，沙眼衣原体表面聚集着C3，在单核细胞摄取衣原体的过程中直接参与，并产生细胞因子。Drouin S M等10通过开展C3基因敲除鼠试验发现，相较于野生型小鼠，缺少C3的小鼠更易感染鹦鹉热衣原体，而且即便感染剂量较低，但随着时间延长，病情也会越来越重。5.4 抗菌肽治疗在腺体和黏膜中，存在大量内源性抗菌肽，其具备广谱抗菌效果，能抑制衣原体感染11。Lazarev V N等12在亚蜘蛛毒中发现抗菌肽，可对衣原体感染予以抑制。对于沙眼衣原体、肺炎衣原体，抗菌肽也能产生抑制作用。同时，抗菌肽能使抗生素抗菌效果加强，所以在动物衣原体病治疗中，可结合应用抗菌肽和抗生素。6 预防在动物衣原体病预防中，可采取综合性防治方法。针对疫区内的羊、牛、猪等动物，在配种时期进行衣原体性流产疫苗的接种，疫苗免疫期限通常在1年左右。其中，种羊和母羊：配种前30 d左右，对种羊注射疫苗2 mL，注射方式为颈部皮下或肌肉，配种后大约10 d和60 d时，对母羊注射疫苗2 mL，注射方式为颈部皮下或肌肉。种牛和母牛：配种前30 d左右，对种牛注射疫苗4 mL，注射方式为颈部皮下或肌肉，配种后大约60 d，临床兽医992023.11对母牛注射疫苗3 mL，注射方式为颈部皮下或肌肉。种猪和母猪：配种前30 d左右，对种猪注射疫苗2 mL，注射方式为颈部皮下或肌肉，配种后大约40 d和60 d时，对母猪注射疫苗2 mL，注射方式为颈部皮下或肌肉。在动物衣原体病发生后，应严格隔离发病动物，对于病情较严重的动物予以淘汰处理，并有效消毒受到污染的圈舍和动物用具，通过深埋或化制方式处理病死动物和流产动物胎儿、胎衣，并无害化处理动物粪便。为预防动物衣原体病，应注重卫生条件，实行全进全出制度，防止直接接触感染和间接接触感染现象的发生，同时，可在动物饲料中加入四环素和金霉素进行防治，或采用中草药，如车前草、早莲草等，为加强防治效果，可结合应用中西药物。7 结论动物衣原体病发生后，会对动物繁殖能力造成较大影响，使养殖户利益受到损害。所以，有必要对动物衣原体病加大控制力度。一方面，行业技术人员应掌握必要的动物衣原体病诊断技术；另一方面，应合理应用动物衣原体病治疗方法，采取有效的预防措施，以降低动物衣原体病感染概率，达到保障动物健康、保证经济效益的目的。参考文献1王磊，王俊菊，史艳艳，等动物衣原体病疫苗研究技术及应用进展J中国动物保健，2021，23（10）：46，542李韦，郭磊，龚振兴，等动物鹦鹉热衣原体病流行情况及防治进展J动物医学进展，2023，44（6）：105-1103李小军，邓海燕，黄洁莹，等禽衣原体病实验室诊断技术研究进展J中国动物检疫，2022，39（12）：104-1114石露莎，李琴，高志存，等奶山羊暴发流产衣原体病的流行病学调查及诊断J上海畜牧兽医通讯，2022（5）：62-65，715王金福，张永霞，顾剑新，等复方中药体外抗猪衣原体活性研究J家畜生态学报，2014，35（8）：70-716吴辉，刘煜德，吴伟，等清热解毒法对肺炎衣原体感染致兔动脉粥样硬化的干预作用J广州中医药大学学报，2006（2）：151-155，1847臧洪英猪衣原体病的发病症状及其防治和净化策略分析J中国动物保健，2022，24（7）：17-188Kopf M，Abel B，Gallimore A，et alComplement component c3 promotes t-cell priming and lung migration to control acute influenza virus infectionJNat Med，2002，8（4）：373-3789Hall R T，Strugnell T，Wu X，et alCharacterization of kinetics and target proteins for binding of human complement component c3 to the surface-exposed outer membrane of chlamydia trachomatis serovar l2JInfect Immun，1993，61（5）：1 829-1 83410 Drouin S M，Corry D B，Hollman T J，et alAbsence of the complement anaphylatoxin c3a receptor suppresses th2 effector functions in a murine model of pulmonary allergyJJ Immunol，2002，169（10）：5 926-5 93311 罗翔宇内源性抗菌肽LL-37与女性生殖道沙眼衣原体感染的相关性分析J临床研究，2020，28（11）：129-13012 Lazarev V N，Shkarupeta M M，Polina N F，et alAntimicrobial peptide from spider venom inhibits chlamydia trachomatis infection at an early stageJArch Microbiol，2013，195（3）：173-179编辑：韩若