滇南血栓丸成药性制备工艺的优化.pdf

药物检测滇南血栓丸成药性制备工艺的优化刘宇，杨景然，熊学敏，毕文芝，周新东，张惠锋，胡冬雄基金项目：云南省卫生健康委医学学科后备人才培训项目（）作者单位：昆明市，云南省第一人民医院 昆明理工大学附属医院药学部（刘宇、毕文芝、周新东、张惠锋）浙江省宁波市，宁波工程学院理学院（杨景然）南昌市，江西中医药研究院中药所（熊学敏）昆明市，云南中医药大学基础医学院（胡冬雄）通信作者：张惠锋，：【摘要】目的经优化并确立滇南血栓丸成药性的最佳制备工艺，建立对工艺的质控标准。方法采用正交试验法，对水煎煮工艺中的加水量、煎煮时间及煎煮次数进行优选，同时通过测定干膏得率及黄芪甲苷转移率对工艺进行验证。以丸剂起模时对药粉细度、润湿剂选择与浓度考察 个因素进行考察。采用高效液相色谱法（），以制剂中黄芪药材的黄芪甲苷为考察指标进行定量测定。结果通过正交试验选出其提取工艺是处方量药材加入 倍量水，煎煮 次，每次 ；干膏得率为 ，其中黄芪甲苷转移率为 。制备工艺为将药材粉碎过 目筛成细粉，用 乙醇泛丸，成丸性效果好。黄芪甲苷在 （）范围内与峰面积呈良好的线性关系，其精密度和重复性试验均 ，平均加样回收率为 ，为 （）。结论实验结果表明具有良好的重现性，优选条件可行。中药制剂滇南血栓丸优选的提取与制备工艺合理、可行，质控方法可靠准确，专属性好。【关键词】滇南血栓丸；成药性工艺优化；质控标准；正交实验法；高效液相色谱法【】深静脉血栓（）是血栓相关性疾病的一种，随着现代生活的日益丰富及人口老龄化，血栓栓塞性疾病也呈逐年上升趋势。血栓多继发于各种原因导致的长期卧床、血管内瘤栓、血栓形成及机体血液成分改变等各种疾病 。血管内皮损伤、静脉回流减慢、血液高凝状态至今仍被认为是 形成的三大主要因素 。其产生原因较为复杂，与多种诱发因素与代谢记忆有关，导致静脉腔血液凝结异常、静脉腔阻塞多及静脉回流阻碍 。目前 主要的治疗方法包括抗凝、溶栓、介入血管成形治疗及手术直接取栓治疗。但手术创伤大，仅适用于急性患者；药物出血风险高，有过敏反应或费用昂贵，而使其使用受限。为此，基于中医几千年的发展历史，及其在 治疗中的独特疗效，已经成为大家关注的热点和研究方向。血栓的中医分型有多种，在中医学西汉帛书 五十二病方 中，血栓归属“血瘀”范畴，因此临床上多使用活血化瘀的药物防治血栓形成。滇南血栓丸仅针对临床上的温阳化瘀型与凉血化瘀型的血栓患者，其组方依据国家经典名方桃红四物汤的加减裁化而来，由黄芪、砂仁、红花、丹参、桃仁、三七、木姜子和水蛭等 味中药组成的复方制剂 。根据临床用药需要，选择丸剂作为该药的制剂工艺。材料与方法 仪器 液相色谱仪（日本岛津有限公司），色谱柱（，苏州赛分科技有限公司），型电子天平（赛多利斯），型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），真空干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司），旋转蒸发仪（上海申胜生物科技有限公司）。试药及试剂黄芪、砂仁、红花、丹参、桃仁、三七、木姜子和水蛭（云南白药有限责任公司，所有药材饮片符合 中国药典 版检验标准并提供检验报告书，并经云南省中医药大学药学院专家鉴定）、黄芪甲苷对照品（批号：，中国食品药品检定研究院）。乙腈和甲醇为色谱纯（色谱纯，公临床合理用药 年 月 日第 卷第 期 ，司），其余试剂均为分析纯。供试品（样品）：滇南血栓丸（云南省第一人民医院制剂，批号：、和 ）。方法与结果 正交试验优化提取工艺研究 正交试验提取工艺优化：目前中药的传统方法以水煎为主，因此本试验采取水煎煮法对处方中各中药材的有效成分进行最大程度提取。考虑到影响药材提取效率的主要因素有煎煮时间、煎煮次数及加水量，以上述三因素作为正交试验的考察因素对水煎煮工艺进行优选，见表 。表 滇南血栓丸提取工艺正交试验因素水平表水平因素（加水倍量）（提取时间，）（提取次数）（空白）根据处方比例分别称取各处方组成的药味 份，按正交试验设计进行试验，将煎煮液过滤，浓缩至相对密度为 （）。采用三因素三水平 （）正交试验对水煎煮工艺中的加水量、煎煮时间及煎煮次数进行考察。黄芪作为君药，以黄芪甲苷含量及出膏率为本试验考查指标，综合评分分数越高煎煮效果越好，利用方差分析优化出最佳水提取工艺路线。确定水煎煮最佳工艺为 ，即加水 倍量，煎煮 次，每次 ，见表 、表 。表 滇南血栓丸提取工艺优选正交试验结果序号黄芪甲苷量（）出膏率（）综合 验证实验：按 提取，对该工艺进行了次实验验证，测定干膏得率及黄芪甲苷转移率，表明其具有重现性，证明优选条件可行，见表 。表 综合评分方差分析方差来源 离均差平方和自由度方差值值 注：（，），（，）表 水提工艺验证实验结果编号干膏得率（）黄芪甲苷转移率（）平均 （）丸剂起模条件考察 润湿剂浓度及用量考察：以不同浓度乙醇为润湿剂，过 目筛，锅转速控制在 ，筛取一定粒径的颗粒，测定其粒径分布及收率，于 干燥 ；测圆整度、溶散时限、堆密度及脆碎度。表明乙醇浓度以 为宜，见表 。表 润湿剂浓度考察结果润湿剂浓度粒径分布（）圆整度（）溶散时限（）堆密度（）脆碎度（）起模药粉细度及用量考察：以 乙醇为润湿剂，分别过 目、目、目筛，锅转速控制在 ，筛取一定粒径的颗粒，测定其粒径分布及收率；取 丸粒，干燥 ，测溶散时限、圆整度、堆密度及脆碎度。结果 目、目筛药粉起模效果相当，故选用 目筛，见表 。表 起模药粉细度考察结果药粉细度粒径分布（）圆整度（）溶散时限（）堆密度（）脆碎度（）目 目 目 成药性与质量控制 色谱条件与适用性试验：版药典附录项下高效液相色谱法的技术要求。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈甲醇 磷酸缓冲临床合理用药 年 月 日第 卷第 期 ，液（）为流动相；检测波长为 ，流速 ，进样量 。理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应 。回收率考察：精密吸取含量为 的滇南血栓丸（批号 ）份，每份 ，分别置具塞锥形瓶中，精密加入黄芪甲苷对照品溶液 ，按“”项下方法操作，即得加样回收溶液。精密吸取加样回收溶液 ，注入液相色谱仪中，按“”项下方法测定。结果见表 。表 黄芪甲苷的加样回收试验（）编号取样量（）样品含量（）加入量（）实测量（）回收率（）平均回收率（）（）精密度考察：精密吸取同一供试品溶液，批号为 ，按“”项下方法进样操作，分别测定 次，记录峰面积，黄芪甲苷的 为 ，表明仪器精密度良好。重复性试验：按“”项下方法制备 份供试品溶液，批号为 ；按“”项下色谱条件进行测定，黄芪甲苷的 为 ，表明本方法的重现性较好。稳定性考察：批号为 的供试品溶液于、，按“”项下色谱条件分别测定其色谱峰面积。色谱峰面积在 内基本无变化，为 ，表明试验条件下供试品溶液较稳定。样品含量测定：取 个批号的滇南血栓丸每批取 份，精密称取 份，按“”项下方法测定，见表 。表 黄芪甲苷的含量测定结果序号含量（）平均值（）讨论中医药在 的治疗中有其独特的疗效，中医的阴阳辨证观点认为血栓性疾病为因寒致瘀，瘀血阻于血脉，痹而不通，水津外溢导致。血栓栓塞性疾病的中医分型尽管名目繁多，从阴阳辨证上归根结底分为两型：阴寒凝滞和瘀热互结 。在血瘀病因上，内经 最强调因寒致瘀，素问调经论 指出：“寒独留，则血凝泣，凝则血脉不通。”目前，很多学者均主张采用凉血散瘀的方法治疗。但笔者认为静脉血栓性疾病的本质是一种因寒导致的疾病，故主张用活血化瘀的治疗方法。为此在药味组成上选用了黄芪、三七、木姜子和水蛭等中药，在实际成药性的过程中，以多个因素水平进行考察，并对其制备工艺进行优化，依据中医理论基础，突出君药黄芪中黄芪甲苷作为质控参照评价指标，为进一步的质量控制和系统性研究做好基础准备工作。利益冲突：所有作者声明无利益冲突。参考文献 中华医学会外科学分会血管外科学组 深静脉血栓形成的诊断和治疗指南（第三版）中国血管外科杂志（电子版），（）：尹航，梁爽，何华，等 高血糖“代谢记忆”治疗策略的研究进展 药学进展，（）：刘宇，赵帅均，梅宜琴，等 一种滇南血栓丸的制备方法：中国，杜茂波，张敏，沈硕，等 黄芪中黄芪甲苷含量测定的新方法探讨 中国实验方剂学杂志，（）：梁曜华，李春，冯伟红，等 连续单因素法优化黄芪中黄芪甲苷的含量测定方法 中国中药杂志，（）：郭怡祯，庞文静，孙素琴，等 黄芪及其提取物的红外光谱鉴别 国际中医中药杂志，（）：史鑫波，唐志书，刘妍如，等 法同时测定黄芪中黄芪皂苷和黄酮类成分 天然产物研究与开发，（）：，：孙晨曦，葛鼎，王素梅，等 香菊颗粒中黄芪甲苷含量测定方法的改进及其与原方成分的一致性研究 中国药房，（）：徐文慧，常丽静，段连政，等 黄芪不同部位黄芪甲苷及毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定 吉林中医药，（）：朱琳，陆新花，薛豪 增乳口服液中黄芪甲苷含量的 测定及提取工艺优化 中国中医药科技，（）：薛丹，倪健，张鹏，等 多指标正交设计优选芪防鼻敏颗粒水提醇沉工艺 天津中医药，（）：（收稿日期：）临床合理用药 年 月 日第 卷第 期 ，