尿样中氧氟沙星含量测定大全(医学PPT课件).ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,尿样中氧氟沙星的含量测定,组员：胡帆、周凡漪,实验目的：,1.,分析临床上广泛用于治疗泌尿系统，呼吸系统感染的药物氧氟沙星。,2.,比较,LC-UV,与,LC-,荧光分析氧氟沙星的区别。,背景资料：,氧氟沙星是第三代喹诺酮类新型广谱抗菌药,并具分布广,吸收好,半衰期长等特点,临床广泛应用具有广谱抗菌作用。,尿样采集：,受试者空腹饮水,200,ml,排尿,留取,1,h,后尿样作空白,一次口服,OFLX,片600,mg,收集,1，2，3，4，5,小时后的尿样，做好标记。,LC-UV,法分析尿样中氧氟沙星的含量,一、实验条件：,1.1,实验仪器,Agilent,高效液相色谱仪，,G1314B-VWD,紫外检测器，色谱柱，量瓶,1.2,实验试剂,氧氟沙星片剂，甲醇,(,色谱纯,),，尿样，空白尿样，,HAc,溶液,1.3,色谱条件,色谱柱,:,C18 5m(250 mm 416 mm),流动相,:,甲醇,/0.05%,HAC=80：20,流速,:1,ml/min,进样量：,20,l,柱温：室温,检测波长：在,250400,nm,处扫描，选取有最大吸收度处作为检测波长。实际过程中选用,294,nm,作为检测波长。,二、实验方法,2.1,尿液的预处理,取空白尿样和尿样，,13000,r/min,离心,10,min，,取上清液经,0.45,m,的水相滤膜过滤，保留滤液。,2.2,氧氟沙星标准液的配制,精密称取氧氟沙星片剂,200,mg,置50,ml,容量瓶中,以流动相稀释至刻度,配成,4.0,mg/ml,的储备液，用流动相稀释,400,倍，吸取,20,l,作为进样品,。,2.3,标准曲线的制作,测定时，取标准液,0.5，1，1.5，2，2.5,ml,用流动相稀释于,10,ml,量瓶，吸取,20,l,作为进样品，记录色谱图，以氧氟沙星标准浓度对峰面积进行回归，得到回归方程。,2.4,空白尿样的配制,取空白尿液滤液,1,ml,用流动相稀释,20,倍，吸取,20,l,作为进样品。,2.5,尿样的配制,取尿液滤液,1,ml,用流动相稀释,20,倍，吸取,20,l,作为进样品。,2.6,进样,先进,1,针标准品观察流动相配置是否合适,合适后,进1,针空白尿样观察有无杂质在测定波长处影响左氧氟沙星的吸收,然后进样标准品与待测样品,标准品进样,5,针来检验仪器精密度。,2.7,回收率实验,取浓度为,0.5，1，1.5,g/ml,的氧氟沙星尿样，称取氧氟沙星标准品，配置为相同浓度，通过峰面积比值，测定回收率。,2.8,精密度实验,取浓度为,0.52.5,g/ml,的氧氟沙星标准品，,1,d,内重复测定,5次,测得日内,RSD，,隔日测定,5 次,测得日间,RSD。,紫外检测测定尿液中左氧氟沙星的含量,紫外检测测定尿液中左氧氟沙星的含量，实验操作方法除检测器设定与荧光检测器不同外（检测波长：,294,nm），,其余设置和操作均与荧光检测时相同。,三、实验结果,荧光法测定尿样中左氧氧氟沙星浓度标准曲线图,紫外法测定尿样中左氧氟沙星浓度标准曲线图,精密度,日内、日间,RSD,测量,荧光法 日内,RSD=2.6%,日间,RSD=3.3%,紫外法 日内,RSD=0.8%,日间,RSD=2.9%,回收率实验,回收率,荧光,98.7%、101.4%、101.2%,；,紫外,99.6%、98.4%、99.1%,。,荧光法测定尿样中排出左氧氟沙星量（,g）-,时间曲线,紫外检测测定尿样中排出左氧氟沙星量（,g）-,时间曲线,荧光法测定尿样中排出左氧氟沙星的累计量（,g）-,时间曲线,紫外检测测定尿样中排出左氧氟沙星的累计量（,g）-,时间曲线,讨论,1,、采用,LC-UV,法与,LC-,荧光法分别测定尿样中氧氟沙星的含量，并且比较两种方法测量结果的不同，因此要求测量过程具有对照性：待测样品，标准品，空白样品的浓度两者均相同，流动相也相同，都采用外标法，但因为分析方法的不同，检测波长不同。,2,、实验中所采用的尿液因为新鲜尿液，如果无法做到这点，因在尿液中加入二甲苯等防腐剂，避免尿液因细菌繁殖造成混浊，影响试验效果。而且尿样中的药物会分解，影响实验结果，因而最好是现取，实验过程中不使用时放入冰箱保存,3,、由于没有标准品对照，在测定时以左氧氟沙星片作为标准品使用。而事前没有对其中左氧氟沙星的实际含量进行过标定，也不能排除片剂中的其他成分（如辅料中的抗氧化剂等）对实验结果的影响。,4,、实验本来应该统计每次的尿液量，计算出每次排尿中含有的左氧氟沙星的含量，然后制的排出药物量,-,时间曲线，因为本次实验中没有精密的容器量尿液体积，只能大概估计尿液量，测算出尿液中药物的量。,5、实验中考虑到出峰时间和分离度以及实际操作的便利程度，最终选择的流动相甲醇：0.05%冰醋酸溶液=80：20，但是还是有脱尾现象，在荧光检测中特别明显。,6、从实验数据，我们可以认为荧光检测器作为检测装置，灵敏度、专属性好（没有杂质峰），较紫外检测器优。,标准品中左氧氟沙星出峰图（紫外检测器检测）,尿样中左氧氟沙星出峰图（紫外检测器检测）,标准品中左氧氟沙星出峰图（荧光检测法）,尿样中左氧氟沙星出峰图（荧光检测器）,谢谢,