罗氏HE试剂性能评估综述.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,罗氏,HE4,试剂性能评估综述,中山大学附属肿瘤医院,刘万里,内容,罗氏,HE4,检测原理,Elecsys HE4 SFDA,注册研究概况,Elecsys HE4,性能评估,Elecsys HE4,性能小结,内容,罗氏,HE4,检测原理,Elecsys HE4 SFDA,注册研究概况,Elecsys,HE4,性能评估,Elecsys,HE4,性能小结,标记免疫电化学发光检测,ECL(IA)Technology,E,Electro,C,Chemo,L,Luminescence,I,Immuno,A,Assay,方法、仪器、试剂三位一体的特定自动化,分析，系统解决了大规模样本检测稳定、高效、快速等,问题。是医学超微量分析的一次战略性革命,Roche HE4,检测试剂设计,双抗体夹心一步法,原理：双抗体夹心法,检测时间：,18,分钟,1st,孵育,:,分钟,10L,血样,生物素标记,HE4,特异性单克隆抗体，钌标记,HE4,特异性单克隆抗体，形成抗原抗体复合物,2nd,孵育,:,分钟,加入链酶亲和素包被的磁珠，通过生物素和链酶亲和素反应，形成复合物,检测,:,反应复合物送入测量池，磁珠结合至电极表面，未结合的反应物通过,ProCell,清除,通过对电极增加电压触发化学发光光电子释放，后者通过光电倍增管检测,Roche HE4,检测试剂设计,HE4,检测原理,生物素标记的,HE4,单克隆抗体,Ru,待检样本中的,HE4 (10,L),钌标记的,HE4,单克隆抗体,Ru,链酶亲和素,包被的磁珠,Ru,进行检测,9 min,9 min,Roche HE4,试剂成分,试剂,工作溶液,M:,包被链酶亲和素的微粒（透明盖），,1,瓶，,6.5 mL,：包被链霉亲和素的微粒,0.72 mg/mL,；防腐剂,R1:,生物素化抗人,HE4,抗体（灰盖），,1,瓶，,10 mL,：生物素化单克隆抗,HE4,抗体（小鼠）,0.75 mg/L,，磷酸盐缓冲液,100 mmol/L,，,pH,值,6.5,；防腐剂,R2:,钌复合物标记的抗人,HE4,抗体（黑盖），,1,瓶，,10 mL,：钌复合物标记的单克隆抗,HE4,抗体（小鼠）,1.5 mg/L,；磷酸盐缓冲液,100 mmol/L,，,pH,值,7.4,；防腐剂,Roche HE4,试剂成分,需要的材料,试剂名称,货号,规格,Elecsys HE4,05950929 190,100,测试,Elecsys HE4 CalSet,05950945 190,4x1mL,PreciControl HE4,05950953 190,2x1mL each of PreciControl HE41 and 2,试剂名称,货号,规格,Elecsys CA 125 II,11776223 322,100 tests per rackpack,Elecsys CA 125 II CalSet,11776240 322,4x1mL,PreciControl Tumormarker,11776452 122,2 x 3 mL each of PreciControl Tumormarker 1 and 2,卵巢癌肿瘤标志物,提供,HE4,和,CA125,检测的厂家,HE4,CA 125,Roche(Elecsys,cobas e),Abbott(Architect),Beckman(Access),Siemens(Immulite,Centaur,Vista),Diasorin(Liaison),B.R.A.H.M.S(Kryptor),Becton Dickinson(TriPath),planned,CanAg,（,ELISA,）,罗氏所有免疫平台均可以同时提供,CA125,和,HE4,的检测,内容,罗氏,HE4,检测原理,Elecsys HE4 SFDA,注册研究概况,Elecsys,HE4,性能评估,Elecsys,HE4,性能小结,Elecsys,HE4 SFDA,注册研究,研究概况,研究时间：,2011.12011.6,研究中心,中国医学科学院肿瘤医院,浙江大学医学院附属妇产科医院,华中科技大学同济医学院附属同济医院,山西省肿瘤医院,Elecsys,HE4 SFDA,注册研究,研究目的一：,与康乃格公司,HE4(,酶联免疫法,),进行,比对检测，评价试验结果,研究目的二：,盆腔肿块,患有,卵巢癌风险的评估,：,Elecsys HE4,和,Elecsys 125II,联合检测,计算,ROMA,指数，评估风险高低,研究目的三：,血清,血浆对比试验,，验证不同类型样本结果的一致性,Elecsys,HE4 SFDA,注册研究结果,共入组,1487,例样本,标本类型,医科院肿瘤,浙大妇产,武汉同济,山西肿瘤,合计,卵巢上皮癌,103,49,40,45,237,疑似样本（盆腔包块患者）,61,191,68,68,388,其他肿瘤（子宫内膜癌、肺癌、乳腺癌、消化道癌、膀胱癌等）,62,136,36,48,282,表观健康人群,120,125,110,82,437,RF,阳性,11,10,9,10,40,溶血,10,10,10,11,41,脂血,10,11,10,11,42,黄疸,10,0,0,10,20,合计,387,532,283,285,1487,Elecsys,HE4 SFDA,注册研究结果,各研究中心不精密度结果,CV,（低浓度）,CV(,中浓度,),医科院肿瘤,医院,2.21%,4.35%,浙,江,大,学,妇产,医院,1.05%,1.11%,武汉,同济,医院,1.06%,0.62%,山西,省,肿瘤,医院,1.61%,0.66%,选取中、低浓度的样品各一份，分别检测,10,次，计算,CV,值,Elecsys,HE4 SFDA,注册研究结果,各研究中心质控结果良好,参比试剂,考核试剂,CA125,医院,名称,质控名称,HE4,质控名称,PreciControl HE4,质控名称,PC TM,质控批号,27964,27092,27093,15608000,15608100,靶值,47.5pmol/L,391.5pmol/L,45pmol/L,341pmol/L,32.6(U/mL),101(U/mL),范围,33-62,313-470,35.0-53.6,262 402,25.7639.44,79.79122.21,医科院肿瘤,检测结果,43.78,447.4,46.18,340.8,28.7,101.7,浙大妇产,检测结果,41.34,367.74,47.8,344.5,29.02,80.24,武汉同济,检测结果,39.59,360.5,42.74,321,33.62,91.94,山西肿瘤,检测结果,50.98,441.71,43.43,343.9,32.96,86.91,Elecsys,HE4 SFDA,注册研究结果,与参与试剂有良好的一致性,y=1.0942x+2.7976,相关系数,r,0.949,回归系数,R,2,0.8997,Elecsys,HE4 SFDA,注册研究结果,ROMA,指数可将盆腔肿块患者进行风险分级,绝经前,:,PI=-12,0+2,38*LNHE4+0,0626*LNCA125,绝经后,:,PI=-8,09+1,04*LNHE4+0,732*LNCA125,582,例样本被正确分入高,/,低风险组,ROMA(%)=,Exp(PI)x 100,1+Exp(PI),注：风险指数,PI,（,Predictive Index,）,LN,为自然对数,内容,罗氏,HE4,检测原理,Elecsys HE4 SFDA,注册研究概况,Elecsys,HE4,性能评估,Elecsys,HE4,性能小结,病例报告,患者，女，,45,岁，,B,超检查发现卵巢肿块，罗氏试剂电化学发光法检测血清,HE4,浓度，结果为,136 pmol/L,。,如何判断这患者,HE4,结果是否异常？,临床判断,HE4,检测结果应考虑的问题,参考值,HE4,实验室检测误差,样本检测前误差：,标本采集影响,标本保存的影响,干扰物质的影响,人生理变异,治疗措施的干扰（药物）,其他疾病的干扰,三组各年龄段,HE4,浓度比较,a,均值,标准差,pmol/l,（例数,）；青年组：,45,岁；中年组：,45-59,岁；老年组：,60,岁。,*LSD,检验；,#,经随机区组设计方差分析,组别,总计,a,(323),青年组,a,(34),中年组,a,(108)#,老年组,a,(181)#,OC,组,337.5156.4(160),304.6143.2(19),334.7156.4(60),373.3132.5(81),良性组,72.038.7(54)*,50.616.3(10),68.712.6(18),96.638.7(26),健康组,59.222.9(109)*,42.28.9(5),58.77.6(30),76.85.6(74),1,、参考值,HE4,在不同观察组间的差异,OC,组，不同年龄的,HE4,良性病变组，不同年龄的,HE4,健康对照组组，不同年龄的,HE4,年龄因素对,HE4,浓度的影响,HE4,在各年龄,组参考值的设定和诊断价值评估,所有病例的,ROC,曲线,青年组的,ROC,曲线,AUC,Cutoff,点,(PM),敏感性,特异性,总体,0.839,82,67.3%,93.6%,青年组,0.946,75,83.4%,92.6%,HE4,在各年龄,组参考值的设定和诊断价值评估,中年组的,ROC,曲线,老年组的,ROC,曲线,AUC,Cutoff,点,(PM),敏感性,特异性,中年组,0.870*,80,75.0%,93.1%,老年组,0.775*,130,50%,93.2%,2,、实验室检测误差,日间精密度（罗氏）,日间精密度（验证）,在三个研究中心进行的重复性检测的结果：不精密度（,CV),低值（,44.3,）,CV=2.1%,高值（,1317,）,CV=1.9%,2,、实验室检测误差,初步结论,实验室检测误差,5%,样本检测前误差,血清、血浆（,EDTA,、肝素）,样品保存（,24h,内）,血清血浆，血清,24h,内检测，,HE4,无显著性差异,样本检测前误差,干扰物质影响（罗氏）,药物的影响（罗氏）,回收率均,10%,结论：上述浓度下的干扰物质和药物对,HE4,检测无显著影响。,样本检测前误差,对,HE4,浓度分别在,65 pmol/L,和,155 pmol/L,进行检测，判,断与乳清酸性蛋白家族其他,成员的交叉反应性,Elafin:,弹性蛋白酶特异性抑制剂,SLPI,：分泌性白细胞蛋白酶抑制剂,干扰物质的影响 ：交叉反应（罗氏）,结论：交叉反应对,HE4,结果的影响可忽略不计。,样本检测前误差,HE4,生理变异的影响（,n=2),初步结论,:,HE4,个体日间变异度,10%,样本检测前误差,肺部疾病的影响,肾功不良的影响,结论：肺部疾病，尤其是,肾衰,显著影响,HE4,水平,总结,1,、,HE4,的参考值需按年龄段设定,2,、,HE4,实验室检测误差,5,2,、,HE4,个体日间变异度约,10,3,、肺部疾病和肾衰,HE4,水平显著升高,4,、其他样品前检测影响因素对,HE4,的影响不显著,5,、,HE4,结果,超过参考值上限,20,判断为异常,，对高于,正常参考限但未大于,20,的患者，应连续追踪观察。,患者,HE4,结果的初步判断,患者，女，,45,岁，,B,超检查发现卵巢肿块，罗氏试剂电化学发光法检测血清,HE4,浓度，结果为,136 pmol/L,肾功正常，无肺部疾病,病理诊断：卵巢癌,实验室检测误差约,136x5,6.8,个体变异,36x10%=13.6,预计该患者,HE4,的结果为,115.6,156.4,范围内,该年龄组参考限为,80pmol/L,结论：该患者,HE4,异常增高,内容,罗氏,HE4,检测原理,Elecsys HE4 SFDA,注册研究概况,Elecsys,HE4,性能评估,Elecsys,HE4,性能小结,Elecsys,HE4,性能参数,小结,Elecsys,HE4,性能参数,检测时间,18 min,检测原理,一步三明治 法,校准,2,点定标,溯源性,HE4 EIA from Fujirebio Diagnostics,Inc.,样本类型,采用含有分离胶标准样本管采集的血清,肝素锂，,K,2,-EDTA,和,K,3,-EDTA,抗凝的血浆,样本量,10 L,空白最低限,(LoB),5 pmol/L,检测范围,(LoD),15 1500 pmol/L,总不精密度,cobas e 411 analyzer,E2010:2.7 4.3%,cobas e 601/e 602 modules,E170:2.8 3.4%,可重复性,cobas e 411 analyzer,E2010:1.3 1.8%,cobas e 601/e 602 modules,E170:1.5 1.9%,Elecsys,HE4,来自巴塞罗纳,Dr.Molina,的评价,.Elecsys HE4,提供准确的方法学检测，并拥有优秀的精密度,.“,.,临床表现,.,显示与其他方法有良好的一致性,“,.HE4,是卵巢癌高灵敏度和特异性的优秀标志物,“,.,与卵巢癌的分期明确相关,“,.,结果稳定可靠，操作简单，结果精确,.“,Elecsys,HE4,结论,整个检测范围均呈现优秀的精密度,所需样本量低,血清和血浆均适用,一管血同时检测,HE4,和,CA125,两项指标,溯源至,HE4 EIA Fujirebio,临床相关的,Cut-off,值具有良好的有效性,临床研究数据适用于良性疾病，卵巢癌的监测和风险评估,谢谢！,