鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验医学PPT课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Ames,试验,Ames,试验，即污染物致突变性检测，也称为鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验,污染物对人体的潜在危害，引起人们的普遍关注。世界上已发展了百余种短期快速测试法，检测污染物的遗传毒性效应。,B.N.Ames,等经十余年努力，于,1975,年建立并不断发展完善的沙门氏菌回复突变试验（亦称,Ames,试验）已被世界各国广为采用,。,原理：检测受试物诱发,鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株,(his,-,),回复突变成野生型,(his,+,),的能力。即组氨酸突变菌,(his,-,),在不含组氨酸的最低营养平皿上不能生长；回复突变成野生型,(his,+,),，可在不含组氨酸的最低营养平皿上生长。,是应用最广泛的检测,基因突变,的体外试验。,Ames,试验,标准试验菌株,(,配套菌株,),：有四种,TA98,、,TA97,：检测移码突变,TA100,：检测碱基置换突变,TA102,：对醛、过氧化物及,DNA,交联剂较敏感,这四个试验菌株除了含有,his,-,突变，还有一些附加突变，以提高敏感性,Ames,试验,不加,S9,混合液得到阳性结果，说明受试物是直接致突变物,加,S9,混合液才得到阳性结果，说明该受试物是间接致突变物,Ames,试验,Ames,试验,常规方法：,斑点试验,平板掺入试验,Ames,试验,斑点试验：,1,、吸取测试菌增菌培养后的菌液,0.1ml,，注入融化并保温,45,左右的上层软,琼脂,中，需,S9,活化的再加,0.3ml,0.4mlS9,混合液，立即混匀，倾于底平板上，铺平冷凝。,2,、用灭菌尖头镊夹灭菌圆滤纸片边缘，纸片浸湿受试物溶液，或直接取固态受试物，贴放于上层培养基的表面。同时做溶剂对照和阳性对照，分别贴放于平板上相应位置。,3,、平皿倒置于,37,温箱培养,48h,。在纸片外围长出密集菌落圈，为阳性；菌落散布，密度与自发回变相似，为阴性。,Ames,试验,平板掺入试验：,1,、将一定量样液和,0.1ml,测试菌液均加入上层软琼脂中，需代谢活化的再加,0.3ml,0.4ml S9,混合液，混匀后迅速倾于底平板上铺平冷凝。,2,、同时做阴性和阳性对照，每种处理做,3,个平行。试样通常设,4,个,5,个剂量。选择剂量范围开始应大些，有阳性或可疑阳性结果时，再在较窄的剂量范围内确定剂量反应关系。培养同上。,3,、同一剂量各皿回变菌落均数与各阴性对照皿自发回变菌落均数之比，为致变比（,MR,）。,MR,值,2,，且有剂量,-,反应关系，背景正常，则判为致突变阳性。,鼠伤寒沙门氏菌,野生型（,his,）,鼠伤寒沙门氏菌,突变型（,his,）,正向突变,回复突变,受试物,试验菌种,(his,-,),S,9,试验菌种,(his,-,),S,9,Ames,试验原理,结果判断,:,只要在一种试验菌株得到阳性结果，即认为受试物是致突变物,仅当四种试验菌株均得到阴性结果，才认为受试物是非致突变物,Ames,试验,Ames,试验,应用,1,斑点试验只局限于能在琼脂上扩散的化学物质，大多数多环芳烃和难溶于水的化学物质均不适宜用此法。此法敏感性较差，主要是一种定性试验，适用于快速筛选大量受试化合物。,2,平板掺入试验可定量测试样品致突变性的强弱。此法较斑点试验敏感，获阳性结果所需的剂量较低。点试获阳性结果的浓度用于掺入试验（每皿,0.1ml,），往往出现抑（杀）菌作用。,3,致变作用迟缓或有抑菌作用的试样，培养时间延长至,72h,。,Ames,试验,应用,4,挥发性的液体和气体试样，可用干燥器内试验法进行测试。,5,目前，,Ames,试验作为检测环境诱变剂的一组试验中的首选试验，广泛应用于致突变化学物的初筛。但是，与今天快信息、高效率的社会要求相比，该试验程序还嫌繁琐，方法不够简便，有待于创建新的更为快速灵敏、简单易行的环境诱变剂短期生物测试法。,