免疫分析方法的研究进展.pptx

单击此处编辑标题文的格式,单击此处编辑大纲正文的格式,第二个大纲级,第三个大纲级,第四个大纲级,第五个大纲级,第六个大纲级,第七个大纲级,第八个大纲级,第九个大纲级,单击此处编辑标题文的格式,单击此处编辑大纲正文的格式,第二个大纲级,第三个大纲级,第四个大纲级,第五个大纲级,第六个大纲级,第七个大纲级,第八个大纲级,第九个大纲级,单击此处编辑标题文的格式,单击此处编辑大纲正文的格式,第二个大纲级,第三个大纲级,第四个大纲级,第五个大纲级,第六个大纲级,第七个大纲级,第八个大纲级,第九个大纲级,免疫分析方法的最新研究进展,免疫分析方法的最新研究进展,第1页,免疫是机体识别和排除进人体内抗原性异物保护性应答反应。,免疫分析法是生物酶技术、荧光光谱技术、辐射技术、免疫分析技术应用于分析领域一门新技术，是基于抗原和抗体之间特异性识别和结合反应为基础一个微量分析方法。,免疫分析方法的最新研究进展,第2页,免疫分析法起始于本世纪50 年,代,首先应用于体液大分子物质分析,1960 美国学者Yalow 和Berso n 等将放射性同位素示技术和免疫反应结合起来测定糖尿病人血浆胰岛素浓度,开创了放射免疫分析方法先河。,同,年,Oliv er 将地高辛同牛血清白蛋白结合,使之成为人工抗原,免疫动物后成功取得了抗地高辛抗体,从而开辟了用免疫分析法测定小分子药品新领域。,免疫分析方法的最新研究进展,第3页,免疫分析法经过对半抗原或抗体进行标识，利用标识物生物或物理或化学放大作用来进行工作，它集测定高灵敏性和抗体反应强特异性于一体。,优点：操作简单、快速、灵敏度高、特异性强、价廉、样品所需量少,免疫分析方法的最新研究进展,第4页,免疫分析方法,非标识免疫分析技术,标识免疫分析技术,免疫扩散,免疫电泳,标识免疫分析技术,标识免疫分析技术,标识免疫分析技术,胶体金免疫技术,发光免疫技术,铁蛋白免疫技术,荧光免疫技术,放射免疫分析,酶免疫分析,免疫分析方法,免疫电泳,免疫分析方法,胶体金免疫技术,发光免疫技术,铁蛋白免疫技术,荧光免疫技术,放射免疫分析,酶免疫分析,免疫电泳,免疫分析方法,胶体金免疫技术,发光免疫技术,铁蛋白免疫技术,荧光免疫技术,放射免疫分析,酶免疫分析,免疫电泳,免疫分析方法,胶体金免疫技术,发光免疫技术,铁蛋白免疫技术,荧光免疫技术,放射免疫分析,酶免疫分析,免疫电泳,免疫分析方法,胶体金免疫技术,发光免疫技术,(CLIA),铁蛋白免疫技术,荧光免疫技术,(FIA),放射免疫分析（,RIA,）,酶免疫分析（,EIA,）,免疫电泳,免疫分析方法,免疫分析方法的最新研究进展,第5页,免疫分析标识技术,免疫分析标识技术是指以抗原抗体间特异性反应为基础,研究标识以各种标识物,(,定量信号,),来对某种物质进行定性或定量检测研究。,至,年，,应用于免疫分析检测中各种标识技术,:,放射物标识、酶标识、发光标识、荧光标识、金标识和超顺磁粒子标识等,免疫分析方法的最新研究进展,第6页,放射免疫分析,放射免疫分析是以放射性同位素为示踪物,与免疫反应相结合一个分析方法,提供检测信号是不停发出放射线。,常见来标识放射性同位素有,3,H,、,14,C,、,25,N,、,121,I,、,125,I,等。,优点：准确灵敏、特异性强,仪器试剂价格低廉、技术成熟。,缺点：药盒使用寿命短,批间、批内变异较大，难进行自动化分析。,免疫分析方法的最新研究进展,第7页,酶免疫分析方法,酶免疫分析是一个非放射性标识免疫分析技术,以酶标识抗原或抗体作为示踪物,由高活性酶催化底物显色或发光,到达定量分析目标。,到当前为止,酶标识法所用酶大多是辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等。酶经过与自己特殊作用底物反应,而产生经典有色沉淀物。,免疫分析方法的最新研究进展,第8页,优点：防止对人体放射性伤害,环境污染 酶标识物较稳定,半衰期可超出,1,年,.,酶免疫反应通常不需要温育，不需将与抗体结合标识药品同游离标识药品分开,.,产生信号用普通可见一紫外分光光度计就可测定,不需昂贵仪器没备。,缺点：标识酶不像同位素标识物,荧光标识物那样能直接产生信号,而必须要何其它试剂,如酶底物,辅酶参加,才能完成酶反应,引发吸收光谱等改变后方可进行测定,.,免疫分析方法的最新研究进展,第9页,荧光免疫分析法,荧光免疫分析法是以荧光物质标识抗原或抗体,形成标识物发生免疫反应后,引发荧光强度发生改变,从而到达定量分析目标。,当前为止认为比较满意标识物有,:,异硫氰酸荧光素,(FITC),、二氯三嗪氨基荧光素,(DTAP),、四乙基罗丹明,(RB200),和四甲基异硫氰酸罗丹明,(TMR ITC),。,免疫分析方法的最新研究进展,第10页,化学发光免疫分析法,化学发光免疫分析是将高灵敏度化学发光测定技术与高特异性免疫反应相结合,借以检测抗原或抗体分析技术。它兼有发光分析高灵敏度和免疫反应特异性。,优点：灵明度高，线性范围宽，光信号连续时间长，分析方法简便快速，结果稳定、误差小，安全性好，使用周期长。,免疫分析方法的最新研究进展,第11页,方法,优 点,缺 点,放射免疫,试剂成本低，灵敏度较高,操作复杂，放射性污染，使用期短,酶联免疫,试剂成本低，操作简单,灵敏度低，适适用于定性和半定量测定,化学发光,操作简单，成本较低，灵敏度较高，试剂较稳定,工作曲线随时间漂移,时间分辨,灵敏度较高，试剂较稳定,操作复杂，发光时间短，试剂成本高，仪器维护费用较高,电化学发光,灵敏度较高，试剂较稳定,操作复杂，试剂成本高，仪器维护费用较高，有本底干扰,免疫分析方法的最新研究进展,第12页,化学发光免疫分析含有免疫分析和化学发光分析,2,个系统。免疫分析系统是将化学发光物质或酶作为标识物,直接标识在抗原或抗体上,经过抗原与抗体反应形成抗原,-,抗体免疫复合物。化学发光分析系统是在免疫反应结束后,加入氧化剂或酶发光底物,化学发光物质在碱性介质中经氧化剂氧化时释放大量自由能,产生激发态中间体，该激发态中间体由最低振动能级回到稳定基态，各个振动能级时产生辐射，同时产生能量，多出能量即为发射光子，从而产生发光现象。发光强度能够利用发光信号测量仪器进行检测、分析接收光量子产量，依据化学发光标识物与发光强度关系,可利用标准曲线计算出被测物含量。,免疫分析方法的最新研究进展,第13页,常见发光体系,鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物类：,免疫分析方法的最新研究进展,第14页,吖啶类化合物：,免疫分析方法的最新研究进展,第15页,（金刚烷）,-1,2-,二氧乙烷及其衍生物,免疫分析方法的最新研究进展,第16页,电化学发光体,免疫分析方法的最新研究进展,第17页,生物发光体系,北美荧火虫体内荧光素,/,荧光素酶是著名生物化学发光体系,它由虫荧光素酶、虫荧光素,D-(-)-2-6-,羧基,-2,苯并噻唑,-2-,噻唑啉,-4-,羧酸,、,ATP,、,Mg2+,及,O2,所组成。虫荧光素酶在催化时,首先与虫荧光素酰腺苷酸,(,由,Mg2+-ATP,与虫荧光素复合而成,),生成复合物,然后该复合物放出质子,酶变构造成虫荧光素氧化脱羧并发射光子。另一生物发光体系是水母发光蛋白,它不需要加入荧光素酶,只需加入,Ca2+,或,Se2+,便能经过分子内反应而发出,max,为,470 nm,蓝光。生物发光体系特点是发光效率、灵敏度、选择性均非常高。,免疫分析方法的最新研究进展,第18页,其它无机氧化剂化学发光体系,多年来，一些科学家就一些无机氧化剂直接氧化一些物质产生化学发光化学发光新体系,如高锰酸钾、铈,(),、过氧化氢、高碘酸钾、次氯酸盐和铁氰化钾等在药品分析方面应用展开了研究，并取得了一定结果。,免疫分析方法的最新研究进展,第19页,总结与展望,总之,免疫学分析技术发展也就是标识学发展。当前,各种免疫分析标识方法并存,相互竞争,相互补充,如将,EIA,与荧光技术或化学发光技术结合,形成荧光酶免疫分析,(FEIA),及化学发光酶免疫分析,(CLEIA),从而大大提升灵敏度,增大检测范围。但不论怎样,当前还没有一个免疫分析标识技术是完美无缺。所以,各种标识技术还需要不停发展和完善,而且大家还在不停研究,以开发出更新、更理想免疫分析标识技术。,免疫分析方法的最新研究进展,第20页,谢谢！,免疫分析方法的最新研究进展,第21页,