特殊变异菌的筛选方法教学课件市公开课获奖课件省名师优质课赛课一等奖课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考!,4.3 特殊变异菌筛选方法：,1/18,以,温度敏感突变,为例：,筛选方法,：,用途,：惯用于提升代谢物产量,原因：,是因为某一酶蛋白结构改变后，在高温下活力丧失,主要性：,假如此酶为蛋白质、核酸合成路径中所需酶，则此变异株在高温下表型就是营养缺点型。,4.3.1条件抗性突变型筛选,2/18,举例：,由谷氨酸产生菌乳糖发酵短杆菌2256，经诱变处理得到温度敏感变异株Ts88:,30培养时能正常生长,40是死亡，但能在富含生物素培养基中积累谷氨酸（而野生型却受生物素反馈抑制）。,在富含生物素培养基中进行发酵时：,先在30（允许条件）中进行培养以得到大量菌细胞，适当初间后提升温度（40，非允许条件），即能取得谷氨酸过量生产。,3/18,方法：梯度平板法（gradient plate）,4.3.2抗药性突变株筛选,抗药性突变株应用：,作为菌株遗传标识,作为生产菌种（结构类似物抗性变异株）,4/18,4.3.3抗生素抗性变异株筛选：,5/18,与营养缺点突变相关三类遗传型个体：,营养缺点型,：,经诱变产生一些合成能力出现缺点，而必须在培养基内加入对应有机养分才能正常生长变异菌株。,如：lys,-,，bio,-,野生型,：,自然界分离到任何微生物，在其发生营养缺点突变前原始菌株，为该微生物野生型。,如：lys,+,;bio,+,;,原养型,：,指营养缺点型突变菌株回复突变或重组后产生菌株，与野生型表型相同。,4.3.4 营养缺点型(,auxotroph,)筛选,6/18,与筛选营养缺点型突变株相关三类培养基,基本培养基,（,MM,）-：,凡是能,满足野生型菌株营养要求最低成份,合成培养基,。,完全培养基,（,CM,）+：满足一切,营养缺点,型,菌株,生长天然或半,合成,培养基。,补充培养基,（,SM,）x：在MM中有针对性地加入一或几个营养成份以满足对应,营养缺点,型,菌株,生长,合成,培养基。,7/18,营养缺点型诱变筛选步骤及方法,auxo判定,诱变处理,auxo浓缩,auxo检出,8/18,缺点,型,浓缩：,抗生素法,原理：青霉素、制霉菌素等抗生素作用于生长着微生物细胞，对休止态细胞无作用。,方法：将菌培养在含抗生素MM基中,9/18,菌丝过滤法,适合用于：,丝状（放线菌、霉菌）,原理：,基本培养基上只有发育成菌丝；auxo孢子可经过滤膜，野生型菌丝不能经过。,10/18,逐一检出法：,缺点,型,检出：,11/18,影印平板培养法,12/18,夹层培养法,13/18,生长谱法,方法简便；,回变和污染不影响,结果,测定物质可为粉末,或纸片,缺点型,判定,：,测定普通应分两阶段：,第一阶段：测定是哪类物质缺点,型；,第二节段：依据第一阶段确定范围，深入确定是哪种详细化合物,缺点,型；,14/18,组合营养物法：,步骤（以氨基酸缺点型判定为例）：,a.将各种营养因子编组；,b.将组合液纸片放在涂菌基本培养基上培养；,c.结果分析；,如：一组：,1,2 3 4 5 二组：2,6,7 8 9 三组：3 7,10,11 12 四组：4 8 11,13,14 五组：5 9 12 14,15,营养因子分组编排时注意；,1）每组内无重复营,养因子,2）每组中应包含只出,现一次因子,3）每组中其它因子应,分别出现二次,15/18,一组：,1,2 3 4 5 二组：2,6,7 8 9 三组：3 7,10,11 12 四组：4 8 11,13,14 五组：5 9 12 14,15,16/18,组合补充培养基法：,将待测菌点种到各种补充培养基上，逐一分析各菌,缺点,类型，或快速分离出所需,缺点,类型菌株。,A,B,F,E,D,C,H,G,17/18,缺点型,应用,作为菌株遗传标识：进行基因工程、诱变育种、,研究代谢过程时用作亲本标识；,作为生产菌种：aa、核苷酸等生产菌种；,作为aa、维生素、碱基测定菌株。,18/18,