1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考，不能作为科学依据。本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢。本资料仅供参考!,4.3 特殊变异菌筛选方法：,1/18,以,温度敏感突变,为例：,筛选方法,：,用途,：惯用于提升代谢物产量,原因：,是因为某一酶蛋白结构改变后，在高温下活力丧失,主要性：,假如此酶为蛋白质、核酸合成路径中所需酶，则此变异株在高温下表型就是营养缺点型。,4.3.1条件抗性突变型筛选,2/18,举例：,由谷氨酸产生菌乳糖发酵短杆菌2256，经诱变处理得到温度敏感变异株Ts
2、88:,30培养时能正常生长,40是死亡，但能在富含生物素培养基中积累谷氨酸（而野生型却受生物素反馈抑制）。,在富含生物素培养基中进行发酵时：,先在30（允许条件）中进行培养以得到大量菌细胞，适当初间后提升温度（40，非允许条件），即能取得谷氨酸过量生产。,3/18,方法：梯度平板法（gradient plate）,4.3.2抗药性突变株筛选,抗药性突变株应用：,作为菌株遗传标识,作为生产菌种（结构类似物抗性变异株）,4/18,4.3.3抗生素抗性变异株筛选：,5/18,与营养缺点突变相关三类遗传型个体：,营养缺点型,：,经诱变产生一些合成能力出现缺点，而必须在培养基内加入对应有机养分才能正常
3、生长变异菌株。,如：lys,-,，bio,-,野生型,：,自然界分离到任何微生物，在其发生营养缺点突变前原始菌株，为该微生物野生型。,如：lys,+,;bio,+,;,原养型,：,指营养缺点型突变菌株回复突变或重组后产生菌株，与野生型表型相同。,4.3.4 营养缺点型(,auxotroph,)筛选,6/18,与筛选营养缺点型突变株相关三类培养基,基本培养基,（,MM,）-：,凡是能,满足野生型菌株营养要求最低成份,合成培养基,。,完全培养基,（,CM,）+：满足一切,营养缺点,型,菌株,生长天然或半,合成,培养基。,补充培养基,（,SM,）x：在MM中有针对性地加入一或几个营养成份以满足对应,
4、营养缺点,型,菌株,生长,合成,培养基。,7/18,营养缺点型诱变筛选步骤及方法,auxo判定,诱变处理,auxo浓缩,auxo检出,8/18,缺点,型,浓缩：,抗生素法,原理：青霉素、制霉菌素等抗生素作用于生长着微生物细胞，对休止态细胞无作用。,方法：将菌培养在含抗生素MM基中,9/18,菌丝过滤法,适合用于：,丝状（放线菌、霉菌）,原理：,基本培养基上只有发育成菌丝；auxo孢子可经过滤膜，野生型菌丝不能经过。,10/18,逐一检出法：,缺点,型,检出：,11/18,影印平板培养法,12/18,夹层培养法,13/18,生长谱法,方法简便；,回变和污染不影响,结果,测定物质可为粉末,或纸片,
5、缺点型,判定,：,测定普通应分两阶段：,第一阶段：测定是哪类物质缺点,型；,第二节段：依据第一阶段确定范围，深入确定是哪种详细化合物,缺点,型；,14/18,组合营养物法：,步骤（以氨基酸缺点型判定为例）：,a.将各种营养因子编组；,b.将组合液纸片放在涂菌基本培养基上培养；,c.结果分析；,如：一组：,1,2 3 4 5 二组：2,6,7 8 9 三组：3 7,10,11 12 四组：4 8 11,13,14 五组：5 9 12 14,15,营养因子分组编排时注意；,1）每组内无重复营,养因子,2）每组中应包含只出,现一次因子,3）每组中其它因子应,分别出现二次,15/18,一组：,1,2 3 4 5 二组：2,6,7 8 9 三组：3 7,10,11 12 四组：4 8 11,13,14 五组：5 9 12 14,15,16/18,组合补充培养基法：,将待测菌点种到各种补充培养基上，逐一分析各菌,缺点,类型，或快速分离出所需,缺点,类型菌株。,A,B,F,E,D,C,H,G,17/18,缺点型,应用,作为菌株遗传标识：进行基因工程、诱变育种、,研究代谢过程时用作亲本标识；,作为生产菌种：aa、核苷酸等生产菌种；,作为aa、维生素、碱基测定菌株。,18/18,
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