免疫荧光细胞化学.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,免疫荧光细胞化学,免疫荧光细胞化学,第1页,抗体,(,或抗原,),荧光抗体（或抗原）,荧光素,对应抗原（或抗体）,复合物,原理,免疫荧光细胞化学,第2页,再发射约,10-9s,内发生称为荧光,免疫荧光细胞化学,第3页,免疫,荧光,细胞化学技术,用免疫荧光技术显示和检验细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞（或组织）化学技术。,直接法、夹心法、间接法、补体法。,免疫荧光细胞化学,第4页,检验抗原法,检验抗体法,直接法,免疫荧光细胞化学,第5页,检验抗原法,这是最早方法，用已知,特异性抗体,与,荧光素,结合，制成,荧光特异性抗体,，直接与细胞或组织中对应抗原结合，在荧光显微镜下即可见抗原存在部位展现特异性荧光。此法很特异和简便，但一个荧光抗体只能检验一个抗原，且敏感性较差,免疫荧光细胞化学,第6页,双,重,免疫,荧,光,标,记,法,在同一细胞组织标本上需要同时检验两种抗原时，要进行双重荧光染色，普通均采取直接法，将两种荧光抗体（如抗,A,和抗,B,）以适当百分比混合，加在标本上孵育后，按直接法洗去未结合荧光抗体，,抗,A,抗体,用异硫氰酸荧光素标识，发黄绿色荧光；,抗,B,抗体,用,TMRITC,或,RB200,标识，发红色荧光，能够明确显示两种抗原定位。,免疫荧光细胞化学,第7页,检验抗体法（夹心法）,先用特异性抗原与细胞或组织内抗体反应，再用此抗原特异性荧光抗体与结合在细胞内抗体上抗原相结合，抗原夹在细胞抗体与荧光抗体之间，故称夹心法。,间接法,免疫荧光细胞化学,第8页,用已知抗原细胞或组织标本切片，加上待检血清，假如其中含有切片中某种抗原抗体，抗体便沉淀结合在抗原上，再用,间接荧光抗体,（特异性,IgG,荧光抗体）与结合在抗原上抗体反应（如检测人血清中抗体必需用抗人,IgG,荧光抗体等），在荧光显微镜下可见抗原抗体反应部位展现明亮特异性荧光。,免疫荧光细胞化学,第9页,检验抗原法,(,双薄片,),先用特异性（对细胞或组织内抗原）抗体（或称第一抗体）与细胞标本反应，随即用缓冲盐水洗去未与抗原结合抗体，再用间接,荧光抗体,（也称第二抗体）与结合在抗原上抗体（是第二抗体抗原）结合，形成,抗原,-,抗体,-,荧光抗体,复合物。,间接法,免疫荧光细胞化学,第10页,直接检验组织内免疫复合物法,间接检验组织内抗原法,补体法,免疫荧光细胞化学,第11页,将新鲜补体与第一抗体混协议时加在抗原标本切片上，经,37,孵育后，如发生抗原补体抗体反应，补体就结合在此复合物上，再用,抗补体荧光抗体,与结合补体反应，形成,抗原抗体,抗补体荧光抗体,复合物，此法优点是只需一个荧光抗体可适合用于各种不一样种属起源第一抗体标识显示,间接检验组织内抗原法,免疫荧光细胞化学,第12页,Thanks a lot,免疫荧光细胞化学,第13页,