毛细管气相色谱法测定血清非洛地平浓度.doc

毛细管气相色谱法测定血清非洛地平浓度（全面版）资料

毛细管气相色谱法测定血清非洛地平浓度

摘要　采用毛细管气相色谱电子捕获检测器，以尼群地平为内标物质，对人血清中非洛地平的测定方法进行了初步的研究。实验结果，样品与内标的峰高比(Hs/Hi)同样品浓度间线性良好，线性范围0.5～40ng.ml-1，回归方程C=7.576Hs/Hi-0.0432，r=0.9989。最低检测限0.4ng.ml-1(信噪比3∶1)；精密度试验，日内误差RSD＜6.3%，日间误差RSD＜7.5%；方法平均回收率为80.4%。结果显示，本法适于血清中非洛地平原形药物的测定。
关键词　非洛地平，毛细管气相色谱，电子捕获检测器，人血清
　　非洛地平(Felodipine)是二氢吡啶类钙离子拮抗剂，具有高度血管选择的药理特性，临床广泛应用于各类高血压病人。对于二氢吡啶类药物的定量方法，国外报道有气相色谱法，配合使用质谱测定器、电子捕获检测器、热导检测器或火焰离子化检测器；也有采用高压液相色谱法，配合使用分光光度法测定［1］；还有采用同位素标记法进行测定［2］。本文采用毛细管气相色谱配以电子捕获检测器，对人血清中非洛地平的测定方法进行了研究，报告如下。
1　方法和材料
1.1　药品和材料　非洛地平标准品(河北医科大学合成提供)；尼群地平标准品(北京制药厂提供)；甲苯(分析纯，重蒸馏)。
1.2　仪器　VISTASP-6000气相色谱仪(Varian公司)；电子捕获检测器63Ni-ECD(Varian公司)；进样器：分流/不分流进样器(Varian公司)；SP4290积分仪(Varian公司)；色谱柱：SE-30石英毛细管柱，12m×0.3mm(惠普公司)；LD4-2离心机(北京医用离心机厂)；高速离心机(美国雅培公司)。
1.3　色谱分析条件　采用不分流进样(1min以后分流)，进样器温度270℃；程序升温，初始温度150℃，保持2min，后以20℃.min-1的速度升到220℃，保持8min；检测器温度300℃，载气和补充气均为高纯氮气，柱头压力0.7kg -2，补充气流速30ml.min-1；进样量3μl。
1.4　标准溶液和内标溶液的制备　(1)贮备液：精密称取非洛地平标准品于容量瓶中，用甲苯配成500μg.ml-1的贮备液；同法配制尼群地平200μg.ml-1的贮备液，再用甲苯配成5μg.ml-1的标准液。以上标准液均置于4℃冰箱避光保存。(2)标准溶液：取非洛地平贮备液逐步稀释成浓度为0.5，1，5，10，20，40ng.ml-1的标准溶液，分别加入5μg.ml-1的内标溶液20μl，使内标在标准溶液中浓度均为10ng.ml-1。以上标准液在冰箱4℃保存，供气相色谱用。
1.5　样品的预处理　精密吸取健康人血清0.3ml，置刻度离心管中，加入10μl适当浓度的非洛地平甲苯标准溶液、10μl内标溶液(相当于10ng.ml-1)、0.3ml蒸馏水、0.3ml甲苯，于振荡器上充分振荡萃取10min，10000r.min-1离心5min，-40℃冷冻2h后分取有机层，即可直接进样分析。
2　实验结果
2.1　血清中非洛地平的色谱　见附。非洛地平与内标分离度R=1.732。

附　血清中非洛地平色谱
(1)非洛地平　(2)尼群地平
2.2　标准曲线　以样品峰高(Hs)与内标峰高(Hi)的比值为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标作。回归方程C=7.576Hs/Hi-0.0432，r=0.9989，线性范围0.5～40ng.ml-1(1.3～104nmol.L-1)。
2.3　最低检测限　该法最低检测浓度为0.4ng.ml-1(检测量为1.2pg，信噪比为1∶3)。
2.4　方法精密度　配制高、中、低3种浓度的样品，同日内等间隔测定3次，计算日内相对标准偏差(RSD)；隔日重复测定3次，计算日间RSD(见表1)。
表1　日内、日间RSD测定

样品浓度
(ng.ml-1)
日内(n=3)
日间(n=3)
±s
RSD(%)
±s
RSD(%)
5
0.77±0.05
6.32
0.75±0.06
7.53
20
2.66±0.06
2.38
2.53±0.12
4.82
40
5.06±0.23
4.59
5.09±0.06
1.22

2.5　方法回收率　取健康人血清0.3ml，分别加入已知浓度的非洛地平甲苯溶液10μl，使血清药物浓度相当于5，20，40ng.ml-1，按样品预处理项下操作，然后进行测定。3种不同浓度测得的平均回收率是80.38%，RSD为2.26%(见表2)
表2　回收率的测定

投入量(pg)
检出量(pg)
回收率(%)
(%)
RSD(%)
15
12.25
81.65

60
48.72
81.20
80.38
2.26
120
93.96
78.30

2.6　分离度考察　本试验使用SE-30毛细管柱，在其它条件不变情况下考察了不同终止温度下样与内标分离度的变化(见表3)。
表3　终止温度对分离度的影响

终止温度(℃)
分离度
峰　形
200
2.57
宽峰
210
1.98
较宽峰
220
1.73
尖峰
240
0.99
峰基有重叠

3　讨论
3.1　非洛地平作为新型的心血管治疗药，其血中药物浓度很低，给药后吸收峰值一般在20～40nmol.L-1(7.7～15.4ng.ml-1)，而且该类药物在进样系统及毛细管柱中易氧化，因此，对测定方法有较高的要求。
3.2　鉴于本法灵敏度较高，对试剂纯度要求相应亦高，将所用甲苯重蒸馏，可以减少样品峰前的杂峰干扰。在样品提取过程中，萃取混合及高速离心后，放置-40℃下低温冷冻，血清部分冷冻，从而与有机萃取相完全分离，这样适于样品量较少的提取分离，操作较为便易。
3.3　毛细管柱的选用对测定的影响很大。试验中我们通过对长度50(OV-1)、25(OV-101)、10m(SE-30)的3种毛细管柱分别考察，发现选用SE-30毛细管柱较为理想，柱长缩短不仅使样品滞留时间缩短，而且受柱温影响较小，稳定性增加。
3.4　选择不同的升温程序，对样品与内标的分离有很大影响。实验结果发现，终止温度在200℃、210℃时，虽然样品与内标分离较好，但保留时间过长，峰形宽；终止温度在240℃，分离效果较差，并且由于柱温升高增加了不稳定因素；终止温度为220℃时，既可达到完全分离，又可保持尖锐的峰形，因此，认为此条件最佳。
3.5　本实验与国外文献同类方法进行比较，同为GC-ECD法，我们使用内标法定量，无需样品衍生化［1］或同位素标记［2～4］。实验结果，Anoff所做RSD为5%，最低检测限为0.4～0.8ng.ml-1，Larsson和Regardh所做RSD为15%，最低检测限为0.5nmol.l-1［3.4］。
　　结果表明，本法适用于体内非洛地平浓度的测定分析，特别对本品的药动学研究有实用意义。
作者单位：蒋燕萍　张相林　任家佩　刘红星　北京中日友好医院　北京　100029
参考文献
1　M Ahnoff. Determination of felodipine in plasma by capillary gas chrom atography with electron capture detection. J Pharm Biomed Analys, 1984, 2:519
2　Edgar B, Regardh CG, Johnsson G, et al. Felodipine kinetics in healty man. Clin Pharmacol Therap, 1985, 38:205
3　Rutger Larsson, Bengt E. Karlberg, et al. Acute and steady-state phar macokinetics and antihypertensive effects of felodipine in patients with normal and impaired renal function. J Clin Pharmacol, 1990, 30:1020
4　Rgardh CG, Edgar B, Olsson R, et al. Pharmacokinetics of felodipine in patients with liver disease. Eur J Clin Pharmacol, 1989, 36:473
(1997年1月20日收稿)

毛细管区带电泳法快速测定人血清中氯氮平含量

摘要　目的:建立用毛细管区带电泳快速测定血清中氯氮平含量的方法。方法:采用33.5 mmol.L-1磷酸盐缓冲液(pH6.47)，用紫外检测器在254 nm波长处检测，以外标法定量。结果:线性范围0.1～10 μg.ml-1,最低检测限0.1 μg.ml-1。平均回收率(97.47±2.8)%。日内与日间RSD分别为2.63%和3.81%。结论:毛细血管带电泳法是快速测定人血清中氯氮平含量的较好方法。
关键词　毛细管区带电泳；氯氮平；血清浓度
中分类号：927.2　　文献标识码：A
文章编号：1001-5213(2000)01-0016-03
Determination of clozapine level in serum by capillary zone electrophoresis
Zhang Shining,Liu Yang,Xiao Hong
(Nanjing Brain Hospital,Naijing Medical University，Jiagsu Nanjing 210029)
ABSTRACT　OBJECTIVE：To establish a method for rapid determination of clozapine lever in serum with capillary zone electrophoresis.METHODS：33.5 mmol.L-1 phosphate buffer solution (pH6.47) was used，UV-detector at 254 nm,clozapine leve was determined by means of external standard method.RESULTS：The linear range was 0.1～10 μg.ml-1 (r=0.997),detection limit 0.1 μg.ml-1,the average recovery (97.4±2.8)% with RSD 2.63% and 3.81% for within-day and day-to-day test respectively.CONCLUSIONS：Determination of clozapine level in serum by capillary zone electrophoresis is a good method.
KEY WORDS　capillary zone electrophoresis;clozapine；serum concentration
　　氯氮平为目前临床常用广谱抗精神病药，其疗效高，但不良反应也明显，且个体血药浓度水平相差较大。因此需要对血药浓度进行检测。目前临床常用高效液相色谱法进行血药浓度检测［1.2］。毛细血管区带电泳作为一种新颖的分离测定方法，具有分离效率高，分析速度快，操作成本低，试样量少等特点，在药物分析中得以日趋广泛应用［3］。而毛细管区带电泳检测氯氮平血药浓度的方法未见报道。我们建立起毛细管区带电泳检测血清氯氮平浓度的方法，现报道如下。
1　仪器与材料
1.1　仪器　美国Beckman公司P/ACE5010型毛细管电泳仪。IBM电脑配以Windows控制和数据处理，未涂层石英毛细管柱(Beckman生产)，柱长47 cm，柱径75 μm，检测温度20℃，波长254 nm。
1.2　试剂和血样　氯氮平标准品(由南京小营制药厂提供)。其他试剂为分析纯，水为本所生产重蒸去离水子。空白血清来自江苏省血站。病人血样来自本院单服氯氮平1月以上患者，清晨6时抽血3 ml，分离血清备用。
2　方法与结果
2.1　标准曲线的制备　在空白血清中加入氯氮平标准品配制成浓度分别为0.1，0.2，0.4，0.8，1，2，4，8，10 μg.ml-1系列浓度标准血清各0.5 ml，加入1 mol.L-1氢氧化钠0.5 ml及乙醚3 ml，振荡1 min，离心(3 000 r.min-1)5 min，取上层乙醚液于另一试管中，在40℃水浴中挥干，残渣用500 μl去离子水溶解备用。用33.5 mmol.L-1磷酸缓冲液(pH6.47)作为运行缓冲液，先冲洗石英柱2 min后，气压进样10 s，于18 kV电压下分离10 min。同一试样平行测定3次，取平均值。更换试样后依次用0.1 mol.L-1氢氧化钠溶液和水冲洗毛细管柱2 min，以血清药物浓度对峰面积作标准曲线，求出回归方程为C=2.13×10-2+0.75×10-3A相关系数r=0.997，线性范围为0.1～10 μg.ml-1。最低检出浓度为0.1 μg.ml-1。
2.2　回收率实验　用空白血清配制氯氮平浓度为0.4，2.0，8.0 μg.ml-1的标本各5份，按2.1节方法处理测定峰面积，计算回收率，算得平均回收率为(97.4±2.8)%，见表1。
表1　血清中氯氮平的回收率(n=5)

浓度/μg.ml-1
测得值/μg.ml-1
回收率/%
平均回收率/%
0.4
0.386
96.51

2.0
1.947
97.36
97.4±2.8
8.0
7.858
98.23

2.3　精密度实验　用空白血清配制氯氮平浓度为0.4，2.0,8.0 μg.ml-1的标本，分别于同一日内和不同日间按2.1节方法处理测定峰面积，计算日内，日间精密度，如表2所示。
表2　日内和日间精密度结果(n=5)

加入浓度
μg.ml-1
日　内
日　间
测得浓度
μg.ml-1
RSD/%
平均
RSD/%
测得浓度
μg.ml-1
RSD/%
平均
RSD/%
0.4
0.391
2.52

0.389
3.68

2.0
1.942
3.13
2.63
1.883
4.32
3.81
8.0
7.798
2.24

7.875
3.43

2.4　患者血清氯氮平浓度测定　分别取口服氯氮平200，400 mg.d-1患者血清各6份，测得平均血清浓度分别为(235.8±38.8) ng.ml-1和(499.0±80.5) ng.ml-1。
3　讨论
　　氯氮平的治疗窗浓度在0.3～0.6 μg.ml-1［1］。我院氯氮平中毒患者血清浓度一般也在5 μg.ml-1以内，均在本检测方法线性范围内。因此毛细管区带电泳可用于快速测定血清氯氮平浓度。
　　电泳电压从5 kV增至20 kV时，氯氮平迁移时间以指数下降，使用18 kV时，电泳电流为85 μA。迁移时间大约为3.5 min。继续升高电压对提高分析速度收效不大，电流却迅速上升，从而产生大量的焦耳热，不利于电泳体系的恒温，故选用18 kV。
　　缓冲液浓度升高，氯氮平的迁移时间显著增大，不利于快速分析。经过比较，采用33.5 mmol.L-1磷酸盐溶液作为分离缓冲液，以兼顾缓冲容量和分析速度。采用去离子水作为溶剂溶解残渣，溶液pH在5.5左右。毛细管区带电泳要求缓冲液pH在所测溶液pH±1.5单位内，分离效果好。在此采用pH6.47。
　　本方法日内、日间RSD均小于4%，重现性好，且进样量少，在实际操作中可用于极微量标本的检测。因此，用毛细管区带电泳检测血清中氯氮平含量是一种较好的方法。
作者单位：张石宁（南京医科大学附属脑科医院研究所,江苏 南京 210029）
　　　　　刘阳（南京医科大学附属脑科医院研究所,江苏 南京 210029）
　　　　　肖红（南京医科大学附属脑科医院研究所,江苏 南京 210029）
参考文献：
［1］盛小奇，华卡，阎翰等.氯氮平治疗精神分裂症血药浓度与剂量、疗效及副反应关系的研究［J］.中国神经精神病杂志，1990，16(2)：90
［2］顾牛范，殷金龙，张冲等.氯氮平的药物动力学及其临床应用［J］.中华神经精神科杂志，1988，21(5)：259
［3］刘志松，方肇伦.高效毛细管电泳在药物分析中的应用［J］.色谱，1996，14(5)：364
收稿日期：1999-03-31

MV_RR_CNG_0172 毛细管法熔点测定仪
1. 毛细管法熔点测定仪说明
编号JJG701-1990
名称(中文毛细管法熔点测定仪
(英文Verification Regulation of Melting-Point-Measuring Instruments
with Capillary Method
归口单位天津市技术监督局
起草单位天津市计量技术研究所
主要起草人贾瑞华 (天津市计量技术研究所
张大建 (天津市计量技术研究所
批准日期1990年7月13日
实施日期1991年1月1日
替代规程号
适用范围本检定规程适用于新制造、使用中和修理后的毛细管法熔点测定仪 (以下简称仪器 的检定。
主要技术要求1 仪器的级别按准确度划分为:0.2、0.5、1.0、1.5四种级别。
2 外观检查
3 绝缘电阻
4 基本误差
5 示值重复性误差
6 线性升温速率误差
是否分级 否
检定周期(年 1
附录数目 6
出版单位中国计量出版社
检定用标准物质
相关技术文件
备注
2. 毛细管法熔点测定仪摘要
一概述
仪器用于测量结晶性化学制品、药品的毛细管熔点或热力学熔点。
仪器测量原理:加热毛细管中的试样,观察其相变过程或相变时透光率的变化以确定熔点。
仪器主要由加热、控温、测温等部分组成。传温介质可以是液体或固体。
二技术要求
1 仪器的级别按准确度划分为:0.2、0.5、1.0、1.5四种级别。
2 外观检查
2.1 仪器名称、型号、制造厂、出厂日期、编号应齐全清晰。
2.2 外观完好,附件齐全,连接可靠。各调节旋钮或按键应能正常工作。
3 绝缘电阻
仪器在不工作且电源开关接通的状态下,电源插头的相线、中线与机壳及外露金属部件之间的绝缘电阻应不小于20 MΩ。
4 基本误差
4.1 当仪器按第12条规定的方法进行检定时,仪器的基本误差在指定的量程范围内应不超过表中的规定。
4.2 对于具有热力学熔点测量功能的仪器,对其基本误差也应进行检定。
5 示值重复性误差
仪器示值的重复性误差按第13条规定的方法进行检定时,不应超过表中的规定。
6 线性升温速率误差
仪器的线性升温速率误差按第14条规定的方法进行检定时,在指定的量程范围内应不大于所规定升温速率的±10%。
允 许 误 差 表

三检定条件
7 检定用标准物质

7.2 仪器的传温介质为液体时,使用a型毛细管封装的熔点标准物质;传温介质为固体时,可使用b型毛细管封装的熔点标准物质。
8 检定用设备
8.1 秒表或其它计时装置:分辨力0.1 s。
8.2 标准铂电阻温度计:二等标准铂电阻温度计。
8.3 数字温度测量仪:分辨力0.01℃。该仪器与二等标准铂电阻温度计配套使用。
8.4 兆欧表:实验电压500 V。
9 检定环境
9.1 检定的实验室应有排风装置。
9.2 电源电压: 220 V±10%,频率50±1 Hz。
9.3 环境温度:23±5℃,检定时室温波动不大于±2℃。
9.4 相对湿度:≤85%。
9.5 实验室应无强电磁场干扰。
四检定项目和检定方法
10 外观检查
按第2条要求进行观察、试验。
11 绝缘电阻检定
用兆欧表在相对湿度≤85%时进行试验,应符合第3条要求。
12 基本误差检定
12.1 毛细管试样的制备:取一长约800 mm的干燥、洁净的玻璃管,直立于瓷板或玻璃板上。将装有标准物质的毛细管自上口放入,使其自由落下,反复投落数次,使标准物质粉末紧密集结于管底,其高度应为3 mm。
12.2 仪器的起始温度设定在低于熔点值2℃ (升温速率为0.2℃/min或10℃ (升温速率为1.0℃/min处。当加热介质达到稳定的设定温度后,将毛细管置于加热介质合适的位置中,按设定的升温速率升温进行检定。
12.3 对于采用铂电阻温度计测温的仪器,可采用三种熔点标准物质检定,分别在50~ 100℃,100~200℃,200℃以上三个温度范围内各选一种;对于采用玻璃液体温度计测温的仪器,根据温度计测温范围的不同,每支温度计一般需采用两种熔点标准物质检定。
12.4 仪器以0.2℃/min的升温速率升温。测量3~8种熔点标准物质的毛细管熔点 (全熔点。各重复测量三次,其三次测量的平均值与相应速率的标准物质的毛细管熔点 (全熔点 标准值之差值为仪器的基本误差。
基本误差=平均值-毛细管熔点 (全熔点 标准值。
对无0.2℃/min升温速率控制的仪器,可选择1.0℃/min升温速率进行基本误差的检定。
12.5 目视判断毛细管熔点 (全熔点 的准则: 毛细管内试样全部液化 (澄明 时的温度称为全熔温度或称全熔点。
12.6 对于具有热力学熔点测量功能的仪器,以0.2℃/min的升温速率升温,测量3~8种熔点标准物质的热力学熔点。各重复测量三次,其三次测量的平均值与相应标准物质的热力学熔点标准值的差值为仪器的热力学熔点测量基本误差。
基本误差 (热力学熔点 =平均值-热力学熔点标准值。
12.7 对于采用玻璃液体温度计测量的仪器,根据温度计浸没方式的不同,应作示值修正。
13 示值重复性检定
13.1 毛细管试样的制备:同12.1条规定。
13.2 仪器起始温度设定在113℃处。当加热介质达到稳定的设定温度后将毛细管置于加热介质合适的位置中。
13.3 仪器以1℃/min的升温速率升温。测量熔点标准物质苯甲酸的毛细管熔点(全熔

S
式中:S——标准偏差;
n——测量次数;
x i——第i个测量值;
x-——n个测量值的算术平均值。
14 线性升温速率检定
14.1 仪器在量程范围内选择接近最高和最低量限的两点进行线性升温速率的检定。
14.2 仪器以1℃/min的升温速率进行升温。经过3~5 min后开始计时,每分钟记录一次测量值,连续测量5 min,其测量值均不应大于第6条规定。
新制造的仪器还要对3℃/min的升温速率进行检定。使用中的仪器可根据用户要求进行检定。其测量值均不应大于第6条规定。
14.3 加热介质为固体并带有数字温度显示 (分辨力≤0.1℃ 的仪器,使用仪器本身的数字温度计测量温度,以秒表计时,检定线性升温速率;加热介质为液体的仪器,使用标准铂电阻温度计和数字温度测量仪检定线性升温速率。
五检定结果处理和检定周期
15 经检定合格的仪器,发给检定证书,检定不合格的仪器发给检定结果通知书并注明不合格项目。
16 仪器的检定数据应记入原始记录内,保存时间为2年。
17 根据检定结果判为不合格的仪器,允许调修,修理后重新检定定级。降到下一级时,必须符合该级别仪器的各项要求。
18 仪器的检定周期为一年。
注:需要查阅全文,请与出版发行单位联系。
第29卷第4期2021年4月　　　　　　　　　分析测试学报FENX I CESH I XUEBAO (Journal of I nstrumental Analysis 　　　　　　　　　Vol 129No 14382~385
收稿日期:2021-11-13;修回日期:2021-03-09
项目: 水体污染控制与治理科技重大专项资助项目(2021ZX07101-006-05;环保公益资助项目(202109102
第一作者:孔德洋(1977-,男,山东滕州人,助理研究员,博士研究生,Tel:025-********,E -mail:kongdeyang@hot m ail 1com
萘乙酸残留的高效液相色谱法测定
孔德洋1,石利利1,单正军1,葛　峰1,高士祥
2(1.环境保护部南京环境科学研究所,江苏　南京　210042;2.南京大学　环境学院　
污染控制与资源化 重点实验室,江苏　南京　210093
摘　要:建立了水稻植株及环境样品中萘乙酸的快速分析方法。以二氯甲烷为提取溶剂,对试样进行加速溶
剂萃取,自动凝胶渗透色谱仪净化,高效液相色谱分离,二极管阵列(P DA 检测器测定,外标法定量。萘乙
酸的质量浓度在0105~20210mg/L 范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。萘乙酸在土壤及水稻样品中的检
出限为0105mg/kg,土壤中的添加水平为0105、1100mg/kg 时,回收率为92%、86%,相对标准偏差为
119%、313%;植株中添加水平为0110、1100mg/kg 时,回收率为76%、83%,相对标准偏差为215%、219%。该方法的灵敏度及重复性均符合农药残留分析的要求。关键词:萘乙酸;加速溶剂萃取;凝胶色谱法;农药残留;高效液相色谱
中图分类号:O65717;O6251512　　文献标识码:A 　　文章编号:1004-4957(202104-0382-04

Deter m inati on of α2Naphthylacetic Acid by ASE -GPC Coup led with HP LC
K ONG De 2yang 1,SH IL i 2li 1,SHAN Zheng 2jun 1,GE Feng 1,G AO Shi 2xiang 2
(1.Nanjing I nstitute of Envir on mental Science,M inistry of Envir on mental Pr otecti on of the Peop le πs Republic of
China,Nanjing 　210042,China;2.State Key Laborat ory of Polluti on Contr ol and Res ource
Reuse,School of the Envir on ment,Nanjing University,Nanjing 　210093,China
Ab s trac t:A rap id detecti on method has been established t o deter m ine the residues of α2naphthylace 2tic acid in rice p lants and the envir onmental sa mp les by high perfor mance liquid chr o mat ography
(HP LC in combinati on with accelerated s olvent extracti on (ASE and aut o gel per meati on chr oma 2
t ography (GPC .The sa mp le was extracted by ASE with dichl or omethane as extracti on reagent and
cleaning up by aut o GPC .The extract was analyzed by HP LC with phot odi ode array (P DA detect or .
The results showed that the calibrati on curve was linear over the concentrati on of α2naphthylacetic acid
in the range of 0105-20210mg/L.The li m its of detecti on (LOD s of α2naphthylacetic acid in s oil
and rice p lant were both 0105mg ・kg -1
.The recoveries of α2naphthylacetic acid in s oils sa mp le for 2
tified with 0105and 110mg /kg were 92%and 86%,res pectively,and the RS D s were 119%and
313%,res pectively .The recoveries in rice p lant sa mp le f ortified with 0110and 1100mg/kg were
76%and 83%,res pectively,with RS D s of 215%and 219%.The sensitivity and repeatability of the
method could meet the analysis require ments of pesticide residues .
Key wo rd s:α2naphthylacetic acid;accelerated s olvent extracti on (ASE ;gel per meati on chr oma 2
t ography (GPC ;pesticide residue;HP LC 萘乙酸(α2Naphthylacetic acid 是一种具有生长素类性质的生长调节剂,可以调节植物的生长和发
育[1]。由于其毒性小,增产效果明显,且采用萘乙酸浸泡种子,能使小麦、水稻、玉米等作物的幼苗
变粗壮[2-3],因此在农业上得到广泛应用。日本、美国对其在农产品中的残留均有严格限量[4]。因此,建立快捷准确对环境中萘乙酸残留的分析方法是研究的重点。
目前国内对萘乙酸在水果和蔬菜中的残留检测已有报道。检测方法主要有分光光度法、气相色谱
法、高效液相色谱法等[5-8]。加速溶剂萃取(ASE 、固相萃取(SPE 和凝胶渗透色谱(GPC 法是目前
研究应用最多、最有效的前处理技术[9-15]。本文采用加速溶剂萃取技术、凝胶渗透色谱净化,液相色
383第4期孔德洋等:萘乙酸残留的高效液相色谱法测定
谱分离测定,分析了水稻植株及环境土壤中萘乙酸的残留状况,结果满意。
1　实验部分
111　仪器与试剂
W aters2695高效液相色谱仪、W aters2996二极管阵列紫外检测器、W aters凝胶色谱仪(美国W a2 ters公司;快速溶剂萃取仪(美国D i onex公司;旋转蒸发仪;氮吹仪;液相色谱柱:Sy mmetry C18柱(5μm×416mm×250mm,美国W aters公司。
农药标准品:萘乙酸纯度9910%(江苏省农药检定所提供;乙腈、二氯甲烷为色谱纯试剂;二氯甲烷、磷酸、氯化钠(140℃烘烤4h、碳酸氢钠、无水硫酸钠(130℃烘烤4h、硅藻土为分析纯试剂。
112　样品提取
土壤、植株:分别称取20g待测样品,添加少量活性炭,加入无水硫酸钠碾磨混匀,以二氯甲烷为提取剂,在80℃、10134MPa条件下于快速溶剂萃取仪中静态循环萃取2次。
ASE条件:温度80℃;预热1m in,加热5m in,静态提取5m in;50%溶剂快速吹扫样品,氮气吹扫萃取池的时间60s;压力:10134MPa;循环2次,收集全部溶剂。提取液经旋转蒸发浓缩至5 mL,进GPC凝胶色谱仪净化。
113　样品净化
GPC净化条件:Envir ogel T M GPC Cleanup色谱柱(19mm×300mm;流动相为二氯甲烷(色谱纯,流速5mL/m in;收集1515~1615m in出峰的组分5mL,氮气吹干,用甲醇定容至2mL,过0145μm 滤膜,进液相色谱测定。
114　液相色谱测定条件
色谱柱:Sy mmetry C
柱(5μm×416mm×250mm;流动相:体积比70∶30的甲醇-水(磷酸调
18
pH值为310,流速为1mL/m in,进样量20μL。
115　加标回收率与检出限
分别称取2021g空白土壤、植株样品,加入一定量的农药标准溶液,混匀,按上述方法进行前处理、提取、净化,分别设置5组平行处理,进行加标回收率实验。
2　结果与讨论
211　ASE提取条件的优化
分别考察了丙酮、石油醚、乙腈和二氯甲烷4种萃取溶剂对土壤及水稻植株中萘乙酸残留的提取效果。结果发现,石油醚和乙腈的提取效率低于65%,而丙酮后期净化过程复杂,用二氯甲烷提取可保证萘乙酸的回收率达70%以上,因此选用二氯甲烷作为萃取溶剂进行提取。
考察了提取温度分别为40、60、80、100℃时,加速溶剂萃取仪对样品的提取效率。结果发现, 80℃时样品的萃取回收率达75%以上,继续增大提取温度,会导致待测组分分解,且提取溶剂损失严重,因此实验选择在80℃下提取。
在植株提取过程中添加少量活性炭,可以吸附一定量的色素,有利于后期的净化[16]。
212　GPC净化条件的优化
本文采用Envir ogel T M GPC Cleanup凝胶色谱柱为分离柱,以二氯甲烷为流动相进行GPC分离。该净化方法可使色素等干扰物质与待测物达到较好的分离。空白及实际样品的液相色谱图如图1所示。由图1可以看出,该方法可使干扰组分和待测物达到良好的分离,满足分析要求。
分析测试学报第29
卷

图1　萘乙酸的实际样品测定图
Fig 11　Chr omat ogra m s of α2naphthylacetic acid in real sa mp les
A.blank s oil sa mp le,
B.actual s oil samp le,C .blank p lant sa mp le, D.p lant sa mp le; 1.α2naphthylacetic acid
213　方法的线性关系
农药标准溶液用甲醇依次稀释,配成质量浓度分别为0105、0110、0120、0150、110、210、1010、2021mg/L 的工作溶液,在优化实验条件下进行液相色谱测定。萘乙酸的质量浓度在0105~20210
mg/L 范围内与色谱峰高呈良好的线性关系,其回归方程为y =19111ρ,r 2
=01999,其中y 为色谱峰高
(Hz ,ρ为萘乙酸的质量浓度(mg/L 。214　方法的回收率及检出限
考察了萘乙酸在土壤及水稻样品中的加标回收率,结果表明,在该方法条件下,土壤中萘乙酸的添加量为0105、1100mg/kg 时,回收率为92%、86%,相对标准偏差为119%、313%;植株中萘乙酸的添加量为0110、1100mg/kg 时,回收率为76%、83%,相对标准偏差为215%、219%。仪器的最低
检出量(S /N =6为2×10-10g,土壤及水稻植株样品中萘乙酸的检出限为0105mg/kg 。
3　结　论
建立了用快速溶剂萃取、GPC 净化、液相色谱法测定土壤及水稻植株中萘乙酸的方法。该方法简便有效,可以很好地去除样品中的杂质干扰,土壤、植株