生化血脂专题知识培训.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,生化血脂专题知识培训,生化血脂专题知识培训,第1页,第一节概述,第二节血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定,本章内容概要,生化血脂专题知识培训,第2页,教学目标和要求,1,、,掌握,脂蛋白分类及其主要功效；高脂血症分型及血液生化特点；血脂、脂蛋白和载脂蛋白测定原理和方法。,2,、,熟悉,各种脂蛋白组成与结构关键点；异常脂蛋白血症原因；血脂检验前应注意问题。,3,、,了解,载脂蛋白种类与生理功效；各个检验项目标临床意义和应用。,生化血脂专题知识培训,第3页,动脉粥样硬化,(atherosclerosis,AS),冠心病急性事件,（不稳定型心绞痛、急性心肌梗死和冠脉猝死）,血脂、血浆脂蛋白及载脂蛋白检验主要性,生化血脂专题知识培训,第4页,第一节 概述,血脂及血浆脂蛋白,脂蛋白代谢紊乱,生化血脂专题知识培训,第5页,一、血脂及血浆脂蛋白,血脂：是血浆中中性脂肪（,甘油三酯和胆固醇,）和类脂（磷脂、糖脂、固醇、类固醇）总称,定义：,脂蛋白：脂类难溶于水，正常血浆脂类物质,与蛋白质结合成脂蛋白形式存在。,生化血脂专题知识培训,第6页,（一）血浆脂蛋白分类,超速离心法：,依据脂蛋白在一定密度介质中漂浮速率不一样而进行分离方法。,电泳法：,依据不一样密度脂蛋白所含蛋白质表面电荷不一样，,利用电泳将其分离，并与血浆蛋白质迁移率比较以判断其部位,。,分离方法,生化血脂专题知识培训,第7页,超速离心法：,乳糜微粒,（,chylomicron,CM,）,极低密度脂蛋白,（,very low density lipoprotein,VLDL,）,中间密度脂蛋白（,intermediate density lipoprotein,IDL,）,低密度脂蛋白,（,low density lipoprotein,，,LDL,）,高密度脂蛋白,（,high density lipoprotein,，,HDL,脂蛋白（,a,）,lipoprotein(a),Lp(a),乳糜微粒、前,-,、,和,四条脂蛋白区带,电泳法,生化血脂专题知识培训,第8页,生化血脂专题知识培训,第9页,（二）血浆脂蛋白组成与结构,组成：,蛋白质、甘油三酯、磷脂（,phospholipid,，,PL,）、游离胆固醇（,free cholesterol,，,FC,）及胆固醇酯（,cholesterol ester,，,CE,）等成份组成。,生化血脂专题知识培训,第10页,结构：,大致为球形颗粒，由两大个别组成，即疏水性内核和亲水性外壳（图,10-1,）。内核由不一样量,CE,与,TG,组成，表层由载脂蛋白、,PL,及,FC,组成，,FC,及,PL,极性基团向外露在血浆中，载脂蛋白是兼性化合物，它疏水个别掩蔽在脂蛋白中，而亲水个别突出于脂蛋白颗粒表面。,生化血脂专题知识培训,第11页,（三）载脂蛋白,脂蛋白蛋白个别称为载脂蛋白,(apolipoprotein,，,Apo),定义：,种类：,按,1972,年,Alaupovic,提议命名方法，用英文字母次序编码，分为,ApoA,、,B,、,C,、,D,、,E,、,F,、,G,、,H,、,J,等。因为氨基酸组成差异，每一型又可分若干亚型。,生化血脂专题知识培训,第12页,功效：,与脂质亲和作用而使脂质溶于水性介质中。,运转胆固醇和甘油三酯。,作为脂蛋白外壳结组成份，与脂蛋白外生物信息相联络。,以配体形式作为脂蛋白与特异受体连接物。,激活一些与血浆脂蛋白代谢相关酶类,分布及特点：略,生化血脂专题知识培训,第13页,（四）脂蛋白受体,定义：,脂蛋白受体是一类位于细胞膜上糖蛋白。它能以高,度亲和方式与对应脂蛋白配体作用，从而介导细胞对,脂蛋白摄取与代谢，深入调整细胞外脂蛋白水平。,生化血脂专题知识培训,第14页,脂蛋白与脂蛋白受体作用：,不但是运输脂蛋白至细胞所必需，也是从血和外周组织中有效去除含有潜在致动脉粥样硬化脂蛋白所必需。,种类：,已经有很各种，主要有,LDL,受体、残粒受体（,remnant receptor,）及清道夫受体,（,scavenger receptor,）。,生化血脂专题知识培训,第15页,LDL,受体：,不但能识别,ApoB100,，也可识别,ApoE,，在细胞结合、摄取和降解,LDL,及其它含,ApoB100,脂蛋白过程中起中介作用，对维持细胞和全身胆固醇平衡起主要作用。,各种脂蛋白受体功效,残粒受体：,能识别,ApoE,，是去除血液循环中,CM,残粒和,-VLDL,残粒主要受体，它也能结合含,ApoE,HDL,。,清道夫受体：,主要存在于巨噬细胞表面,介导修饰,LDL(,包含氧化,LDL,和,-VLDL),从血液循环中去除。,生化血脂专题知识培训,第16页,（五）胆固醇酯转运蛋白,定义：,血浆中脂蛋白个别含有一个特殊转运蛋白，能促进血浆各脂蛋白间胆固醇酯、甘油三酯和磷脂单向或双向转运和交换，这类特殊转运蛋白称脂质转运蛋白（,lipid transfer protein,LTP,）。,组成：,胆固醇酯转运蛋白（,cholesterol ester transfer protein,CETP,）,磷脂转运蛋白（,phospholipid transfer protein,PTP,）,甘油三酯转运蛋白（,triglyceride transfer protein,TTP,）,生化血脂专题知识培训,第17页,(,六,),血浆脂蛋白代谢,分类：,外源性代谢路径：,指食物中摄入胆固醇和甘油三酯在,小肠中合成,CM,及,CM,代谢过程,。,内源性代谢路径：,指,肝脏合成,VLDL,，然后转变为,IDL,和,LDL,，并被肝脏或其它器官代谢过程,胆固醇逆向转运：,HDL,参加将胆固醇从外周组织运输到肝脏过程。,生化血脂专题知识培训,第18页,生化血脂专题知识培训,第19页,生化血脂专题知识培训,第20页,生化血脂专题知识培训,第21页,二、脂蛋白代谢紊乱,（一）高脂蛋白血症,定义：,高脂血症（,hyperlipidemia,）是指血浆中胆固醇或,/,和甘油三,酯水平升高。血浆脂类以血浆脂蛋白形式存在，所以，高脂血症一,定时高脂蛋白血症（,hyperlipoproteinemia,）。,多年来，已逐步认识到血浆中,HDL,降低也是一个脂代谢紊乱。,生化血脂专题知识培训,第22页,生化血脂专题知识培训,第23页,生化血脂专题知识培训,第24页,分类：,1,表型分型法,主要是基于各种血浆脂蛋白升高程度不一样而进行分型。该分类法不包含病因学，故称表型分类。,（,1,）,型高脂蛋白血症：又称家族性高乳糜微粒血症,（,2,）,a,型高脂白血症,（,3,）,b,型高脂蛋白血症：,（,4,）,型高脂蛋白血症,（,5,）,型高脂蛋白血症,（,6,）,型高脂蛋白血症,生化血脂专题知识培训,第25页,生化血脂专题知识培训,第26页,2,按是否继发于全身性疾病分类,继发性高脂血症：,原发性：,继发性者由一些全身性疾病引发血脂异常，如糖尿病、肾病综合征、肾功效衰竭、甲状腺功效减退症、肝胆疾病、系统性红斑狼疮、肥胖症、饮酒等。另外，一些药品如,-,受体阻断剂、降压药等也可引发血脂异常。,在排除继发性高脂血症后，可诊疗为原发性。已知个别原发性高脂血症由先天性基因缺点所致,生化血脂专题知识培训,第27页,3,高脂血症基因分型法,表,10-5,家族性高脂血症临床特征,常 用 名,基因缺点,临床特征,表型分类,家族性高胆固醇血症,L LDL受体缺点,以胆固醇升高为主，可伴轻度甘油三酯升高，LDL显著增加，可有肌腱黄色瘤，多有冠心病和高脂血症家族史。,a,b,家族性Apo B100缺点症,ApoB100缺点,同上,同上,家族性混合型高脂血症,不清楚,胆固醇和甘油三酯均升高，VLDL和LDL都增加，无黄色瘤，家族组员中有不一样型高脂蛋白血症，有冠心病家族史。,b,家族性异常,脂蛋白血症,ApoE,异常,胆固醇和甘油三酯均升高，乳糜微粒和VLDL残粒以及IDL显著增加，可有掌皱黄色瘤，多为Apo E2（2/2）表型。,家族性高甘油三酯血症,不清楚,以甘油三酯升高为主，可有轻度胆固醇升高，VLDL显著增加。,生化血脂专题知识培训,第28页,(,二,),低脂蛋白血症,1,家族性低,-,脂蛋白血症,2,-,脂蛋白缺乏血症,3,家族性低,-,脂蛋白血症,4,Tangier,病,生化血脂专题知识培训,第29页,第二节 血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定,当前临床上开展血脂测定项目包含,TC,、,TG,、,HDL,及其亚类胆固醇、,LDL-C,、,Lp,（,a,）以及个别载脂蛋白如,ApoAI,、,ApoB,等。其中,TC,、,TG,、,HDL-C,、,LDL-C,测定是血脂测定四个基础指标。血浆,4,冰箱中过夜观察其分层现象及清澈度可初步预计各种脂蛋白改变情况。血浆脂蛋白电泳结合,TC,、,TG,水平有利于高脂血症分型。,概况：,生化血脂专题知识培训,第30页,血脂测定标准化：,血脂分析前变异起源于：,生物原因，如年纪、性别、种族等原因个体差异。,生活方式，包含饮食习惯、吸烟、运动及应激等。,临床方面包含疾病或药品引发脂代谢改变。,血标本采集与处理方面,准确测定应从分析前准备开始，包含受试者准备，标本,采集，合格试剂、校准物选取，检测方法选择。,方法学上应该采取美国疾病控制中心（,CDC,）或中华医学会检验分会推荐操作方法。,生化血脂专题知识培训,第31页,一、血清（浆）静置试验,将患者空腹,12h,后采集静脉血分离出血清置,4,冰箱中过夜，然后观察其分层现象及清澈度。,空腹血清混浊，表示,TG,升高，可放在,4,冰箱过夜后深入观察，假如上层出现奶油样且下层清澈，表明,CM,升高，,VLDL,正常，可能为,I,型高脂血症。假如上层出现奶油样且下层混浊，表明,CM,及,VLDL,均升高，可能是,V,型。空腹血清混浊，,4,冰箱中过夜后仍为均匀混浊，表明,VLDL,升高，此时应深入测定,TC,，,TC,升高者可能是,III,或,IIb,型而,TC,正常者则可能为,型。,IIa,型高脂血症血清也清澈透明。,正常空腹血清应清澈透明。,生化血脂专题知识培训,第32页,二、血清（浆）总胆固醇测定,化学法,酶法,生化血脂专题知识培训,第33页,（一）化学测定法,化学测定法通常需,抽提纯化,。显色剂主要有两类：,醋酸,-,醋酐,-,硫酸,高铁硫酸。,这些显色反应须用强酸试剂，干扰原因多，准确,测定有赖于从标本中抽提、皂化、纯化过程，因而操,作较繁，不适于分析大批量标本，且不适于自动分析。,特点：,生化血脂专题知识培训,第34页,1,Liberman-Burchard,反应,1885,年,Liberman,发觉胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显色，,1890,年,Burchard,用此反应测定胆固醇称为,L-B,反应。,1953,年,Zak,提出用硫酸、醋酸和,Fe3+,等与胆固醇作用生成紫红色化合物来测定胆固醇，称为,Zak,反应。,2,Zak,反应,生化血脂专题知识培训,第35页,(,二,),酶测定法,特点：,常规测定中现已广泛应用酶法，酶法含有特异性好，精密度和灵敏度都能很好地满足临床试验室要求，既能够手工操作，也适合自动分析，但酶法测定中出现了不一样程度,基质效应。,采取酶反应原理干化学法颇为实用，其缺点是价格高，精密度差。胆固醇酶测定法始于,70,年代。因为操作简便，试剂无腐蚀性，尤其适合用于自动生化分析，,当前已成为测定胆固醇主要方法。,生化血脂专题知识培训,第36页,CEH-COD-PAP,法,原理：,CE,H,2,O FC,FFA,FC,O,2,4-,胆甾烯酮,H,2,O,2,H,2,O,2,4-AAP,酚 醌亚胺,H,2,O,胆固醇酶测定法试剂中，除了上述三种酶、酚和,4-,氨基安替比林外，还有维持,pH,恒定缓冲液、胆酸钠、表面活性剂以及稳定剂等。胆酸钠是为了提升胆固醇酯酶活性，表面活性剂作用是促进胆固醇从脂蛋白中释放出来,生化血脂专题知识培训,第37页,评价：,主要缺点是：,优点,：本法灵敏度高、准确度高、精密度好，线性范围宽。,一些胆固醇酯酶对胆固醇酯水解不完全，不能用纯胆固醇结晶以有机,溶剂配制溶液作为,TC,分析校准液，而应以准确定值血清作为标准，,此校准液（品）相当于三级标准。,表面活性剂，如吐温,-40,能够干扰胆固醇酯酶作用，而聚乙烯醇,6000,可使结果提升,1,2,；,本法含有氧化酶反应路径共同缺点，易受到一些还原性物质如尿酸、胆红素、维生素,C,和谷胱甘肽等干扰。,生化血脂专题知识培训,第38页,【,参考值,】,血清总胆固醇适当范围：,5.20mmol/L(200mg/dl),，,边缘升高：,5.23,5.69mmol/L(201,219mg/dl),，,升高：,5.72mmol/L(220mg/dl),。,生化血脂专题知识培训,第39页,影响,TC,水平原因,年纪与性别；,长久高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使,TC,增高；,遗传原因；,其它：如缺乏运动、脑力劳动、精神担心等可能使,TC,升高。,TC,除了作为高胆固醇血症诊疗指标之外，不能作为其它任何疾病诊疗指标，对于动脉粥样硬化和冠心病而言，,TC,是一个明确危险因子，与冠心病发病率呈正相关。,【,临床意义,】,高,TC,血症：,原发和继发,低,TC,血症：,原发和继发,生化血脂专题知识培训,第40页,三、血清（浆）甘油三酯测定,化学法,酶法,生化血脂专题知识培训,第41页,基础操作：,（一）化学测定法,1,、,抽提,：,关键是选取适当抽提剂，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷,脂、游离甘油和葡萄糖等干扰物质影响。,2,、,皂化,：,甘油三酯水解生成甘油，这一步大都采取,KOH,作皂化剂,3,、,氧化,：,过碘酸在酸性溶液中将甘油氧化成甲醛和甲酸,4,、,显色,：甲醛定量主要有两种方法：,甲醛与变色酸,(4,，,5-,二羟,-2,，,7-,萘二磺酸,),在硫酸溶液中加热生成紫色化合物,甲醛与乙酰丙酮在铵离子,(NH4+),存在下生成黄色二乙酰二氢二甲基吡啶,生化血脂专题知识培训,第42页,(,二,),酶测定法,1,、磷酸甘油氧化酶法（,GPO-PAP,法）,原理,TG+3H,2,O,LPL,Glycerol+3RCOOH,Glycerol+ATP,GK+Mg2+,G-3-P+ADP,G-3-P+O,2,GPO,磷酸二羟丙酮,+H,2,O,2,2,H,2,O,2,+Phenol+4-Aminoantipyrine,POD,Chromogen+4H,2,O,计算,TG,（,mmol/L,）,=A,500nm,测定,/A,500nm,校准,校准血清,TG,浓度（,mmol/L,）,生化血脂专题知识培训,第43页,去除,FG,干扰可用以下方法：,1,、外空白法：同时用不含,LPL,酶试剂测定,FG,作空白。,2,、内空白法：又称两步法或双试剂法,将,LPL,和,4-AAP,组成试剂,2,，其余个别为试剂,1,。此法当前为中华医学会检验分会推荐方法。,生化血脂专题知识培训,第44页,2,乳酸脱氢酶法,原理：,TG+3H,2,O,LPL,Glycerol+3RCOOH,Glycerol+ATP,GK+Mg2+,G-3-P+ADP,ADP+,磷酸烯醇式丙酮酸,丙酮酸激酶,丙酮酸,+ATP,丙酮酸,+NADH,LDH,NAD,+,+,乳酸,因为反应消耗,NADH,，故可利用,NADH,在,340nm,吸光度降低来,测定甘油三脂浓度,。,生化血脂专题知识培训,第45页,评价：,本法结果准确，但灵敏度较低，试剂也不太稳定。因为血清本身存在游离甘油和丙酮酸等干扰物质，所以测定时除了要做试剂空白外，还要做标本空白,生化血脂专题知识培训,第46页,3,甘油氧化酶法,第一步：,FG+O,2,甘油氧化酶,甘油醛,+H,2,O,2,H,2,O,2,+EMAE,POD,无色物质,消除游离甘油影响，,3-5min,后进行第二步反应：,TG+3H,2,O,LPL,Glycerol+3RCOOH,FG+O,2,甘油氧化酶,甘油醛,+H,2,O,2,H,2,O,2,+4-AAP+EMAE,POD,有色化合物,注：,EMAE,作用与酚相同，是还原剂，但灵敏度比酚高。,原理,：,该法分两步完成。,生化血脂专题知识培训,第47页,血清甘油三酯普通随年纪增加而升高，体重超出标准者往往偏高。,适当范围：,1.70mmol/L(150mg/dl),，,升高：,1.70mmol/L(150mg/dl),。,【,参考值,】,生化血脂专题知识培训,第48页,【,临床意义,】,原发性高,TG,血症多有遗传原因，包含家族性高,TG,血症与家族性型高脂（蛋白）血症等。继发性高,TG,血症见于糖尿病、糖原累积病、甲状腺机能减退、肾病综合征、妊娠、口服避孕药、酗酒等。大量前瞻性研究证实，富含,TG,脂蛋白是,CHD,独立危险因子，,TG,增加表明患者存在代谢综合症，需进行治疗。甘油三酯降低比较少见，甲状腺功效亢进、肾上腺皮质功效减退和肝功效严重损伤时能够见到甘油三酯降低,生化血脂专题知识培训,第49页,四、血清（浆）脂蛋白测定,(,一,),血清脂蛋白电泳,脂蛋白电泳分析可分为预染法和电泳后染色法两大类。,预染法,操作比较简单，分离效果直观。其操作过程是先,将待测血清和苏丹黑染料按一定百分比混合进行预染处理，离心后取上清液进行电泳分析。,电泳后染色法,为用电泳方法先将血浆脂蛋白各成份分开，再用苏丹黑或油红,O,进行染色。,临床上比较常见是预染法电泳。,生化血脂专题知识培训,第50页,血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳：,-,脂蛋白：,0.30-0.40,，,前,-,脂蛋白：,0.13-0.25,，,-,脂蛋白：,0.50-0.60,，,乳糜微粒：阴性。,【,参考值,】,生化血脂专题知识培训,第51页,（二）高密度脂蛋白测定,常以测定,HDL-C,含量代表,HDL,水平。,参考方法,:,超速离心分离,HDL,，然后用化学法（,ALKB,法）或酶法测定其胆固醇含量，此法需特殊设备，而且不易常握。,生化血脂专题知识培训,第52页,常规方法,:,1,磷钨酸,-,镁法,2,HDL,直接测定法,HDL,直接测定法大致分三类，分别是,:,聚乙二醇,/,抗体包裹法,酶修饰法,选择性抑制法，又称掩蔽法，,生化血脂专题知识培训,第53页,HDL-C,适当范围：,1.04mmol/L(40mg/dl),0.91mmol/L(35mg/dl),为减低。,【,参考值,】,【,临床意义,】,流行病学与临床研究证实，,HDL-C,与冠心病发病呈负相关，,HDL-C,低于,0.9 mmol/L,是冠心病危险原因。,HDL-C,大于,1.55mmol/L,被认为是冠心病,“,负,”,危险原因。,HDL-C,下降还多见于脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高,TG,血症往往伴以低,HDL-C,，肥胖者,HDL-C,也多偏低。吸烟可使,HDL-C,下降，适量饮酒、长久体力劳动和运动会使,HDL-C,升高。,生化血脂专题知识培训,第54页,（二）低密度脂蛋白测定,1,Friedewald,公式法,LDL-C,TC,HDL-C,TG/5,（以,mg/dl,为单位时），或,LDL-C,TC,HDL-C,TG/2.2,（以,mmol/L,为单位时）。,2,聚乙烯硫酸盐沉淀法 本法并非对,LDL-C,作直接测定，而是用聚乙烯硫酸（,PVS,）选择性沉淀血清中,LDL,，再以血清,TC,减去上清液（含,HDL,与,VLDL,）胆固醇即得,LDL-C,值。,3,直接测定法,:,两类,当前各类方法测定,LDL-C,值都包含,IDL,和,LP(a),chol,在内,生化血脂专题知识培训,第55页,LDL-C,适当范围：,3.12mmol/L(120mg/dl),，,边缘升高：,3.15,3.61mmol/L(121,139mg/dl),升高：,3.64mmol/L(140mg/dl),。,【,参考值,】,【,临床意义,】,LDL-C,增高是动脉粥样硬化发生发展主要脂类危险原因。因为,TC,水平同时也受,HDL-C,水平影响，所以最好以,LDL-C,代替,TC,作为冠心病危险原因指标。美国国家胆固醇教育计划成人治疗专业组要求以,LDL-C,水平作高脂蛋白血症治疗决议及其需要到达治疗目标。,生化血脂专题知识培训,第56页,（三）脂蛋白,(a),测定,Lp(a),测定有两类方法,一是以免疫化学原理测定其所含,Apo(a),，结果以,Lp(a),质量表示，也有以,Lp(a),颗粒数,mmol/L,表示。,另一类方法测定其所含胆固醇，结果以,Lp(a)-C,表示。当前大都用免疫学方法测定。,生化血脂专题知识培训,第57页,正常人群,Lp(a),水平呈显著正偏态分布，大多在,200mg/L,以下，平均数在,120,180 mg/L,，中位数约,100mg/L,。,Lp(a),水平高于医学决定水平（,300mg/L,），冠心病危险性显著增高。,【,参考值,】,【,临床意义,】,血清,Lp(a),水平是动脉粥样硬化性疾病独立危险原因,与动脉粥样硬化成正相关。,生化血脂专题知识培训,第58页,五、血清载脂蛋白测定,免疫化学法：,单向免疫扩散（,RID,）,电免疫分析（如火箭电泳法）,放射免疫分析（,RIA,）,酶联免疫吸附分析（,ELISA,）等,早期,当前：,当前比较适合于临床试验室是,免疫浊度法,，包含,免疫散射比浊法（,INA,）和免疫透射比浊法（,ITA,）。,生化血脂专题知识培训,第59页,