生物化学名词问答.doc

名词解释
1. 等电点聚焦：在一定pH梯度电泳场中，蛋白质迁移到其等电点pH处并停止移动的现象。
2. Cloning：即无性繁殖，是使重组外源基因载体（如质粒）转入宿主细胞，并随着宿主细胞繁殖而不断复制的过程。3次
3. 外显子：真核生物DNA转录并经过剪接后，被保留的RNA所对应的DNA序列。
4. 积累反馈抑制：产物积累到一定浓度后对酶活性的抑制作用。
5. 别构调节（Allosterie regulation）：通过酶的别构效应而实现对酶活性的调节。
6. “Salting-in”of protein(蛋白质盐溶)：在一定电解质浓度范围内，蛋白质溶解度随着电解质浓度增加而增加的现象。
7. Allosteric effect(别、变构效应)：是指变构剂接合酶的非活性位点（即变构点），导致酶或蛋白质构象变化，并进而影响酶或蛋白质的作用活性的现象。3次
8. Structural genes(结构基因)：是一类能表达成蛋白质或RNA的基因，它与处于上游的操纵子和启动子共同构成操纵子区域。
9. PCR(Polymerase chain reaction聚合酶链式反应)：是以DNA聚合酶在体外扩增DNA片段技术，经历DNA变性、退火、聚合酶催化DNA链的延伸等三个步骤周而复始的过程。3次
10. Conformation(构象)：在分子中由于共价单键的旋转以及键角有一定的柔性所表现出的原子或基团的不同空间排布叫构象。构象的改变不涉及共价键的断裂和重新组成，也没有光学活性的变化。
11. Subunit(亚基)：是指蛋白质四级结构中具有三级结构的球蛋白，是组成蛋白质四级结构最小的共价单位。它可以由一条肽链组成，也可以由几条肽链通过二硫键链接在一起组成。亚基之间靠次级键连接。
12. Holoenzyme(全酶)：是酶的一种，由酶蛋白与辅助因子（包括金属离子及有机化合物）结合所形成的复合物，即全酶=酶蛋白+辅助因子。
13. Glycolysis(糖酵解)：是指葡萄糖或糖原在无氧（或氧气不足）的情况下经过一系列反应分解形成2分子丙酮酸并提供少量能量（净生成2分子ATP）的过程。
14. Operon(操纵子)：是指原核生物在转录水平上控制基因表达的协调单位，它们有共同的控制区和调节系统，具体模型是由调节基因、启动子、操纵基因以及在功能上彼此相关的几个结构基因组成。
15. Open reading frame(开放读码矿)：是指DNA或RNA序列中一段不含终止密码子的连续的非重叠核苷酸密码。
16. Ligand(配体)：被受体识别并与之结合的生物活性分子称为配体。包括激素、神经递质、细胞粘着分子等內源性配体和药物、毒素、抗原和病原体等外源性配体。配体可以是任何一种分子。2次
17. Subunit of protein(蛋白质亚基)：具有四级结构的蛋白质分子中，每条具有三级结构的多肽链单位称为亚基或亚单位，该亚基即为蛋白质亚基。
18. Active site(活性中心)：是指酶分子中直接与底物结合并催化底物反应的部位，通常处于或靠近酶分子的表面，只占酶分子很小部分。酶的活性中心是一个三维实体，具有柔性或可运动性。
19. Coenzyme(辅酶)：是指与脱辅酶(酶蛋白)结合比较松弛的小分子有机物质，通过透析的方法可以与酶蛋白分开，如辅酶Ⅰ、辅酶Ⅱ。
20. Hydrophobic interaction(疏水作用)：在水介质中球状蛋白质的折叠总是倾向于把疏水残基埋藏在分子的内部，这一现象被称作疏水作用。它在稳定蛋白质的三级结构方面有突出地位。
21. Structural polysaccharides(结构多糖)：某些多糖，如纤维素和几丁质，可构成植物或动物骨架等细胞结构，来实行一定的功能即为结构多糖。
22. Simple diffusion(单纯扩散、简单扩散)：不带电荷和水溶性的小分子(如H2O、O2、CO2、尿素、乙醇等)以自由扩散的方式从膜的一侧通过细胞质膜进入膜另一侧的过程，其结果是分子由浓度高的一侧向浓度低的一侧转运。被动扩散的一种，其过程不需要提供能量和载体。
23. Motif(模体)：肽链折叠中形成的二级结构组成方式，有3种基本组合形式：αα、βαβ、βββ。蛋白质分子中的一些二级结构单元往往有规则地聚集在一起形成全α-螺旋、全β-折叠片或α-螺旋与β-片层混合的超二级结构的基本形式。
24. Quaternary structure of protein(蛋白质四级结构)：蛋白质的四级结构是指亚基的种类、数目以及各个亚基在寡聚蛋白中的空间排布和亚基之间的相互作用。有许多蛋白质是由两个或两个以上的具有独立三级结构的亚基通过一些非共价键彼此缔合而成的聚集体，这些亚基的结构可以是相同的也可以是不同的。缔合形成聚集体的方式构成蛋白质的四级结构。
25. Site-directed mutagenesis(定点诱变)：是指按照设计的要求，使基因的特定序列发生插入、删除、置换和重组等变异，它是基因工程的一项关键技术。目前常用的方法有：在酶切位点插入、删除和置换序列，用寡核核苷酸指导的诱变和PCR诱变。
26. Specific activity of enzyme(酶的比活力)：是指每mg酶蛋白具有的酶活力单位，一般用U/mg蛋白表示或用Katal/mg蛋白表示。它可以用来比较每单位质量酶蛋白的催化能力。
27. Ribozyme(核酶)：是指具有(自身)催化剪接作用的RNA，它催化RNA自身内含子切除和外显子的连接。按作用底物的不同可分为催化分子间和分子内的核酶。
28. Neutral lipids(中性脂)：是指整个脂肪分子的偶极矩接近零,易溶于丙酮等极性小的有机溶剂,而不溶于水的脂类物质，是固、液态的酰基甘油的统称。
29. Gene expressiom(基因表达)：基因表达是指细胞在生命过程中，把储存在DNA顺序中遗传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子。
30. Cofactor(辅因子)：是指全酶中脱辅酶所结合的一些对热稳定的非蛋白质小分子物质或金属离子，根据其与脱辅酶结合的松紧程度不同可分为辅酶和辅基两类。
31. Hydrogen bonding(氢键)：是氢原子与两个电负性强的原子(如F、O、N)相结合而形成的弱键。氢原子与一个电负性强的原子以共价结合后，还可以与另一个电负性强的原子产生静电吸引作用，这样的作用即为氢键。它是维持蛋白质二级结构稳定的主要作用力，具有两个特征：方向性和饱和性。
32. Domain(结构域)：也指功能域，在较大的蛋白质分子或亚基中，多肽链往往有两个或两个以上相对独立的三维实体，缔合而成三级结构，三维实体之间靠松散的肽键连接，这种相对独立的三维实体称为结构域。它是球状蛋白的折叠单位。
33. Super-secondary structure of protein(蛋白质超二级结构)：是指蛋白质二级结构单元α-螺旋股和β-折叠股，相互聚集形成有规律的更高一级的但又低于三级结构的结构。现已知的超二级结构有三种基本组合形式：αα、βαβ、ββ。在蛋白质分子中特别是在球状蛋白质分子中经常可以看到由若干相邻的二级结构元件(主要是α螺旋和β折叠片)组合在一起，彼此相互作用，形成种类不多的、有规则的二级结构组合或二级结构串，在多蛋白质中充当三级结构的构件，称为超二级结构。
34. Restiction enzyme mapping(限制酶谱)：描述限制性内切酶的酶切点的位置和距离信息的图谱。限制性内切酶位点在DNA链上的定位，表示酶的特异识别序列在DNA链上出现的频率和它们之间的相对位置。同一DNA用不同的限制酶进行切割从而获得各种限制酶的切割位点，由此建立的位点图谱有助于对DNA的结构分析。
35. Specificity of enzyme(酶的专一性)：是指酶对催化反应和反应物有严格的选择性，分为结构专一性和立体异构专一性。酶往往只能催化一种或一类反应，作用于一种或一类物质。
36. snRNA(核内小RNA)：是真核生物转录后加工过程中RNA剪接体的主要成分，参与mRNA前体的加工过程。细胞核内存在许多种类的小分子RNA，其大小在100～300个核苷酸，称为snRNA。
37. Storage lipids(贮存脂质)：包括三酰甘油和蜡，是生物体内能量储存的主要形式。
38. Prothetic group(辅基)：是指以共价键和酶蛋白相结合的辅助因子，不能通过透析除去，需要经过一定的化学处理才能与酶蛋白分开，如丙酮酸氧化酶中的FAD，就属于辅基。
39. Singel-nucleotide polymorphism(单核苷酸多态性)：是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性，它是人类可遗传的变异中最常见的一种。基因上一个核苷酸的变异，可以引起DNA序列的多种变化。
40. Carbon metabolism(碳代谢)：碳单位各成分从一种化合物转移到另一化合物或相互转变的代谢过程。
41. Respiration(呼吸作用)：生物体内的有机物在细胞内经过一系列的氧化分解，将释放出的电子交给NAD(P)+,FAD或FMN等电子载体，再经电子传递系统传给外源电子受体从而生成水或其他还原型产物并释放出能量的过程。
42. DNA library(DNA文库)：即某一特定来源DNA通过细胞-DNA克隆技术构建成含有所用DNA片段的重组DNA分子，并转化至细菌内，构成DNA文库。可分为基因组DNA文库和cDNA文库。
43. Passive diffusion(被动扩散)：脂溶性物质从高浓度侧向低浓度侧，即顺浓度梯度扩散通过有类脂层屏障的生物膜的方式。被动扩散包括促进扩散（协助扩散）和自由扩散，而促进扩散需要相应的载体。
44. Polysccharide(多糖、多聚糖)：由许多单糖分子或其衍生物缩合而成的高聚物称为多糖，它是一个分子多聚糖水解时能生成10个分子以上单糖的糖。分为同多糖和杂多糖。
45. Genome(基因组)：是指存在于细胞或病毒中的所有基因，或特定生物体的整套(单倍体)遗传物质的总和。
46. Feedback regulation(反馈调节)：指由受控部分发出的反馈信息返回到控制部分，不断纠正和调整控制部分对受控部分的影响的调节作用，在生物化学中通常指一个代谢反应的终产物或某些中间产物对生化反应关键酶的影响。
47.增强子(enhancer)主要存在于真核生物基因组中，是一种顺式作用元件，它能极大的促进启动子的转录活性，其作用特点有:①能在很远距离对启动子产生影响；②无论位于启动子上游还是下游都能发挥作用；③其功能与序列取向无关；④无生物种属特异性；⑤受发育和分化的影响。
48.受体(receptor)是指位于细胞膜上、细胞质或细胞核中能与来自胞外的生物活性分子专一结合并将其带来的信息传递给效应器，从而引起相应生物学效应的生物大分子。
49.构型(configuration)原子在空间相对分布或排列称为分子的构型。
50.不对称碳原子(asymmetric carbon atom)指四个不同的原子或原子基团共价连接并因而失去对称性的四面体碳，又称手性碳原子、手性中心、不对称中心。
51.isoionic point(等离子点)在没有其他盐类干扰时，蛋白质子供体基团解离出来的质子数与质子受体基团结合的质子数相等时的pH。

1.胰蛋白酶只专一水解赖氨酸或精氨酸羧基形成的肽键，胰凝乳蛋白酶专一水解由芳香氨基酸或带有较大非极性侧链的氨基酸羧基形成的肽键，弹性蛋白酶专一水解丙氨酸、甘氨酸及短脂肪链氨基酸羧基形成的肽键，胃蛋白酶水解芳香族或其他疏水氨基酸的羧基或氨基形成的肽键。
蛇毒磷酸二酯酶从多核苷酸链的3'端开始，逐个水解下5'-核苷酸。牛脾磷酸二酯酶则相反，从5'端开始，逐个水解下3'-核苷酸。
2.糖肽键有N-糖肽键和O-糖肽键。N-糖肽键是指β-构型的N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)异头碳与天冬酰胺的γ-酰基N原子共价连接。O-糖肽键主要是N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)与丝氨酸或苏氨酸缩合形成的。N-糖肽链(N-聚糖)共同的结构花式为核心五糖，也称三甘露糖基核心:
Man α1→6(Man α1→3)Man β1→4GlcNAc β1→4GlcNAc。
3.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量。蛋白质颗粒在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，迁移率决定于蛋白质的静电荷以及分子大小和性状等。加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠和少量巯基乙醇，则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的相对分子质量，而与原来带电荷和性状无关。巯基乙醇可以打开二硫键，使单体蛋白或亚基多肽链处于伸展状态，与SDS结合形成复合体，由于SDS所带电荷远远超过蛋白质所带电荷，因而掩盖了不同蛋白质间电荷的差异。根据电泳迁移速率与分子量的关系方程lgMr=K1－K2μR(μR为迁移速率K为常数)，即可的出蛋白质的分子量。
4.三羧酸循环中的脱氢作用:丙酮酸脱氢作用:丙酮酸脱羧酶复合体E1催化，以TPP为辅基。首先带负碳离子的TPP(发生在噻唑环)进攻丙酮酸带正电性的羰基碳形成丙酮酸-TPP，紧接着丙酮酸-TPP加成脱羧形成羟乙基-TPP，羟乙基氧化转变成乙酰基同时转移到E2的辅基硫辛酰胺上，E2将乙酰基转移到CoA-SH分子上形成游离的乙酰-CoA。①异柠檬酸脱氢作用。由异柠檬酸脱氢酶催化，它以NAD+为辅酶，异柠檬酸为β-羟基，辅助因子NAD+作为氢受体使β-羟酸氧化为β-酮酸即草酰琥珀酸。位于异柠檬酸β-碳原子上的羟基转变为酮基。酮基的形成促使了邻近C-C键的断裂，从而引起脱羧②α-酮戊二酸脱氢作用。由α-酮戊二酸脱氢酶催化，反应需要NAD+和CoA作为辅助因子。脱氢作用与丙酮酸脱氢机制相一致。③琥珀酸脱氢作用。由琥珀酸脱氢酶催化，以FAD作为辅基，琥珀酸的两个中间碳原子进行C-C键氧化各脱掉一个氢原子形成反式的丁烯二酸又称为延胡羧酸，因其碳碳键氧化释放的能量不足以使脱下的电子转移到NAD+上，因此FAD最适作为该反应的辅基。④苹果酸脱氢作用。由苹果酸脱氢酶催化，以NAD+辅酶，苹果酸的羟基被氧化形成羰基生成草酰乙酸，羟基脱下的氢负离子定向的转移到NAD+。该反应在热力学上不利为吸热反应，但由于草酰乙酸与乙酰-CoA缩合反应是高度的放能反应，因此反应得以进行。三羧酸循环的调节:①其本身的制约系统调节。柠檬酸循环中有三种关键酶:柠檬酸合酶、异柠檬酸脱氢酶和α-酮戊二酸脱氢酶。柠檬酸酸循环中的酶活性主要靠底物提供的情况推动，并受其生成产物浓度的抑制，最关键的底物是乙酰-CoA、草酰乙醛和产物NADH。②ATP、ADP和Ca+对柠檬酸循环的调节。柠檬酸循环是产能的主要途径，ATP水解伴随ADP浓度的增加，ADP是异柠檬酸脱氢酶的变构促进剂，从而增加该酶对底物的亲和力。Ca+刺激糖原的降解、启动肌肉收缩，间接的对柠檬酸循环起调节作用，它还对丙酮酸脱氢酶磷酸酶、异柠檬酸脱氢酶和α-酮戊二酸脱氢酶起激活作用。
柠檬酸循环的步骤:①草酰乙酸与乙酰-CoA缩合形成柠檬酸，由柠檬酸合酶催化。②柠檬酸异构化形成异柠檬酸，由乌头酸酶催化。③异柠檬酸氧化形成α-酮戊二酸，由异柠檬酸脱氢酶催化，产生一分子NADN和二氧化碳。④α-酮戊二酸氧化脱羧形成琥珀酸-CoA，由α-酮戊二酸脱氢酶催化，同时产生1分子NADH和CO2。⑤琥珀酸-CoA转化成琥珀酸并产生一个高能磷酸键GTP，由琥珀酰-CoA合成酶催化。⑥琥珀酸脱氢生成延胡索酸，由琥珀酸脱氢酶催化，同时产生1分子FADH2。⑦延胡索酸水合形成L-苹果酸，延胡索酸酶。⑧L-苹果酸脱氢形成草酰乙酸，由苹果酸脱氢酶催化，产生一分子NADH。
5.高等植物和蓝细菌中以非循环光合磷酸化裂解水提供细胞合成还原力。由光合系统Ⅰ和光合系统Ⅱ串联方式作用。光合系统Ⅰ中叶绿素分子P700吸收光子后被激活，释放出一个高能电子传递给铁氧还原蛋白(Fd)，使其被还原。还原的铁氧还蛋白在Fd:NADP+还原酶的作用下，将NADP+还原为NADPH。用以还原P700的电子来源于光合系统Ⅱ。在光合系统Ⅱ中，叶绿素分子P680吸收光子后，释放出一个高能电子，高能电子先传递给辅酶Q，再传给光合系统Ⅰ使P700还原。失去电子的P680靠水的光解产生的电子补充。高能电子从辅酶Q到光合系统Ⅰ的过程可推动ATP的合成。总反应方程如下:
2NADP+＋2ADP＋2Pi＋2H2O → 2NADPH＋2H+＋2ATP＋O2
光合细菌中只含有一个光合作用中心，以循环光合磷酸化生成ATP，它由循环电子流引起，无NADPH产生，也无O2释放，因为它不涉及PSⅡ。
6.双向电泳是等电点聚焦电泳和SDS-PAGE的组合，即先进行等电点聚焦电泳(按照pI分离)，然后再进行SDS-PAGE(按照分子大小)，经染色得到的电泳图是一个二维分布的蛋白质图。SDS-PAGE基本操作步骤①SDS-聚丙烯酰胺凝胶制备②加样③电泳④染色⑤观察。
7.CO2的固定途径有卡尔文循环和还原性三羧酸循环。其中主要为卡尔文循环，参与其反应的最重要关键酶是核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶(ribulose-1,5-biphosphate简写为Rubisco/RuBP)，它是二氧化碳固定的受体，活性中心有Mg+，并可被光激活，此外果糖-1,6-二磷酸酶可以是Calvin循环中的限速步骤。叶绿体中CO2固定的调节:①叶绿体基质的pH改变②还原力的产生③Mg+从类囊体腔外流。当有可用的光能用以产生CO2固定所需的ATP和NADPH时循环就运行。糖酵解、三羧酸循环、氧化磷酸化、磷酸戊糖途径以及己糖磷酸途径可以和Calvin循环联系。大致步骤可分为3个阶段:①CO2的固定。在Rubisco羧化酶活性作用下CO2和它的受体结合生成不稳定的中间物，然后裂解成2分子3-磷酸甘油酸。②3-磷酸甘油酸还原。它被还原成丙糖磷酸，甘油醛-3-磷酸。③RuBP在生。RuBP(核酮糖-1，5-二磷酸)是循环的起始物，CO2的受体，必须不断再生才能维持循环的继续。
8.化学渗透假说认为电子传递的自由能驱动氢离子从线粒体基质跨过内膜进入到膜间隙，从而形成跨线粒体内膜的氢离子电化学梯度，这个梯度的电化学电势(electrochemical potential)驱动ATP合成。1,3-二硝基苯酚是氧化磷酸化的解偶联剂，在中性环境下以解离的形式存在不能透过膜，而在酸性环境下接受质子同时将一个质子带入膜内导致内膜对H+的通透性增加，破坏了跨膜质子梯度，使电子传递与ATP形成两个过程分离。
9. 构建表达载体的基本步骤 ①引物设计②目的基因(CDS区）的克隆③目的基因进行酶切④质粒进行酶切线性化，电泳，胶回收纯化⑤模板与线性化质粒连接⑥转化到大肠杆菌DH5α(感受态菌)。⑦鉴定(PCR,测序,酶切)⑧将表达载体导入表达菌株。
基因工程操作步骤:①通过人工切割并分离或人工合成以获得目的基因。②改造作为载体的DNA，如质粒DNA。③把外来的DNA片段与载体DNA在体外重组。④重组的DNA分子引入受体细胞。⑤目的克隆的筛选与鉴定，从大量细胞中筛选增殖的受体细胞，使外来基因在受体细胞正确表达。
cDNA文库构建基本步骤:①制备mRNA，②合成cDNA，③制备载体DNA，④双链cDNA的分子克隆，⑤对构建的cDNA文库进行鉴定，测定文库包含的克隆数，抽查克隆质量和异质性，如果需要可适当扩增。
克隆载体的宿主细胞要求:①易于接受外源DNA，为感受态。②宿主细胞没有限制酶。③宿主细胞没有重组能力。④应易于生长和筛选，克隆载体的选择标志必须与之匹配。⑤符合安全标准。
10.异养生物电子传递链:
黄素蛋白中的FADH2
琥珀酸-Q还原酶(复合体Ⅱ)↓
NADH→NADH-Q还原酶(复合体Ⅰ)→辅酶Q→细胞色素还原酶(复合体Ⅲ(Cytb→Cytc1))→细胞色素c→细胞色素氧化酶(复合体Ⅳ(Cytaa3))→O2 。
植物或蓝细菌光合磷酸化电子传递链:
光 H+从基质释放到腔内 光
↓ ↑ ↓
H2O→锰串→P680→P680*,Pheo,PQA,PQB→PQ→细胞色素复合体b6f → PC → P700 → P700*，A0，A1，Fe-SX，Fe-SA，Fe-SB → Fd → Fp(FAD) (详见真题或下册212页)
11.紫外分光光度计测蛋白质是否被核酸污染以及核酸是否被蛋白质污染:280 nm和260 nm的吸收差法。核酸对紫外光有很强的吸收，在280 nm处的吸收比蛋白质强10倍(每克)，但核酸在260 nm处的吸收更强，其吸收高峰在260 nm附近。核酸260 nm处的消光系数是280 nm处的2倍；而蛋白质则相反，其280 nm的紫外吸收值大于260 nm的吸收值。通常： 纯蛋白质的光吸收比值：A280/A260 ＝1.8 如果比值小则说明受到核酸污染。纯核酸的光吸收比值：A280/A260＝ 0.5。纯DNA的A260/A280比值为1.8，纯RNA为2.0，如果比值低，表示受到蛋白(芳香族)或酚类物质的污染，需要纯化样品。
12.蛋白质测序策略:①测定蛋白质分子中多肽链的数目②拆分蛋白质分子中的多肽链③断裂多肽链内的二硫键④测定每一多肽链的氨基酸组成⑤鉴定多肽链的N末端和C末端残基⑥断裂多肽链成较小的肽段⑦测定各个肽段的氨基酸顺序⑧确定肽段在多肽链中的顺序，利用重叠肽重建完整多肽链的一级结构⑨确定多肽链中的二硫键的位置。
分离纯化某一特定蛋白质的一般程序:前处理，把蛋白质从原来组织或细胞中以溶解的状态释放出来，并保持原来天然状态和生物活性，一般通过细胞破碎，方法有超声波破碎、砂研磨、高压挤压或溶菌酶处理。粗分级分离，获得提取液之后，选择一套适当方法将所要的蛋白质与其他杂蛋白分离开，一般方法有盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等。细分级分离，进一步纯化，一般用层析法包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等。结晶，使蛋白质处于过饱和状态，然后适当控制温度、加盐盐析、加有机溶剂或调pH值等方法达到结晶条件。结晶中不发生变性，接入晶种可加速结晶过程，重结晶可进一步纯化。
蛋白质的纯度鉴定通常采用分辨率高的物理化学方法，例如PAGE、等电点聚焦、毛细管电泳、沉降分析和HPLC等。如果制品是纯的，在这些分析谱上只呈现一个峰或一条带。
13.脂肪酸合成。乙酰-CoA是脂肪酸分子所有碳原子的唯一来源，它来自糖的氧化分解或氨基酸的分解。这些过程是在线粒体中进行的，但脂肪酸合成却在细胞溶胶中，因此细胞必须把乙酰-CoA借助柠檬酸-丙酮酸循环自线粒体转移到细胞溶胶中。脂肪酸对生物体有四种重要功能:①是磷脂和糖脂的组成单元，这些分子又是生物膜的组成成分②它与糖蛋白的蛋白质共价连接，经修饰的糖蛋白在脂肪酸残基的引导下指向膜的靶标位置③脂肪酸是燃料分子，是单位质量含能量最多的储能物④脂肪酸的某些衍生物担当着激素及胞内信使的职能，所以必须合成脂肪酸。脂肪酸合成步骤:①启动:乙酰-CoA经乙酰-ACP转化为乙酰-合酶。②装载:丙二酰-CoA转化为丙二酸单酰ACP。③缩合:乙酰合酶与丙二酸单酰ACP缩合形成乙酰乙酰-ACP。④还原:将乙酰乙酰-ACP还原为β-羟丁酰-ACP。⑤脱水:将β-羟丁酰-ACP脱水为α，β-反式-丁烯酰-ACP。⑥还原:将α，β-反式-丁烯酰-ACP还原生成丁酰-ACP。至此，每一循环脂肪链延长了两个碳原子，如此反复循环进行，例如生成16个碳的软软脂酰-ACP。实行⑦释放:软脂酰-ACP水解，生成软脂酸。
14.许多物质代谢最终都可形成乙酰-CoA，例如葡萄糖、丙酮酸、乙醛、乙酸及脂肪酸等。乙酰-CoA的产生途径:①糖酵解产生的丙酮酸在进入三羧酸循环之前，氧化脱羧生成乙酰-CoA。②脂肪酸的β-氧化一次脱下两个碳原子形成乙酰-CoA。③氨基酸转氨基生成丙酮酸进而形成乙酰-CoA，生酮氨基酸转变为乙酰乙酰-CoA形成乙酰-CoA，氨基酸直接形成乙酰-CoA。乙酰-CoA的去路:①乙酰-CoA进入三羧酸循环彻底氧化分解产生能量，合成ATP。②乙酰-CoA在胞质中参与脂肪酸的合成，③作为胆固醇的前体生成胆固醇。④乙酰-CoA转移酰基参与氨基酸的合成。⑤转化为乙酰乙酸生成酮体，氧化供能。
脂肪酸的β-氧化:①活化，脂肪酸在硫激酶(又称脂酰辅酶A合酶)作用下形成脂酰-CoA。②脂酰-CoA的氧化，羧基邻位被脂酰-CoA脱氢酶作用，脱下2个氢转化为反式△2-烯酰-CoA，同时产生FADH2。③水合，反式△2-烯酰-CoA水合形成3-羟脂酰-CoA，由烯酰-CoA水合酶催化。④氧化，L-3-羟脂酰-CoA在L-3-羟脂酰-CoA脱氢酶作用下脱氢转化为3-酮脂酰-CoA，并产生NADH。⑤3-酮脂酰-CoA受第二个CoA作用发生硫解，断裂为乙酰-CoA和一个缩短了2和碳原子的脂酰-CoA，由β-酮硫解酶作用。缩短了的脂酰-CoA又进入下一轮的β-氧化，直到全部变为乙酰-CoA。
15.体外获得克隆DNA方法，聚合酶链式反应(PCR)。基本步骤:①选出将要扩增的DNA片段(人工分离或合成)②设计DNA片段两端的引物，并尽量减少可能产生的非特异产物。③优化反应体系，以便获得更好的扩增效果。体系包括适量的模板、4种dNTP、TapDNA聚合酶和适量Mg离子。④选择3个温度进行热循环。3个温度分别为:变性94。C，45～60秒；退火1min，温度根据引物与模板的Tm值来决定，一般为两引物中较低的Tm值减2，即退火的温度约比引物变性温度低2~3度；延伸，72。C，1min；热循环25～30周期，最后延伸10min。⑤扩增完后，取出一定量反应产物，检测扩增结果。
体内获得克隆DNA方法，重组噬菌体载体克隆DNA。①获得克隆的目的DNA片段，②选择噬菌体载体并制取噬菌体DNA，③用限制酶切除去掉噬菌体DNA中复制和装配非必须的DNA序列，④将外源DNA连接到噬菌体DNA被切去部分的缺口处，形成重组DNA分子，⑤重组DNA分子(含有cos位点)和外壳蛋白在体外进行包装形成成熟重组噬菌体，⑥用重组噬菌体感染宿主细胞获得增殖，⑦分离裂解噬菌体，提纯DNA，获得目的克隆。
★克隆载体要求:①具有自主复制能力，②携带有易于筛选的选择标记，③含有多种限制酶单一识别序列，以便外源基因插入，④载体应尽可能小，便于导入细胞和进行繁殖，⑤使用安全。
16.酶作用的调节或控制，包括酶活性的调节和酶含量的调节。酶的活性调节除了条件外的影响调节还包括别构调控、酶原的激活和可逆的共价修饰三种。别构调控是酶分子的非催化部位与某些化合物可逆的非共价结合后发生构象的变化进而影响酶的活性，典型的例子3-磷酸甘油醛脱氢酶。酶原的激活是体内合成出不具有活性的酶蛋白的前体，经过蛋白酶水解后构象发生变化形成酶的活性部位，变成活性蛋白。典型的例子如消化系统中的酶原激活的胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等，还有凝血机制中的凝血酶。可逆的共价修饰是通过共价调节酶对酶的多肽链上某些基团进行可逆的共价修饰，使酶处于活性与非活性的互变状态，从而调节酶活性。例子如磷酸化酶、腺苷酰化酶、尿苷酰化酶、甲基化酶等。①通过改变酶的活性进行调节。通过加入激活剂对酶活性的激活，加入抑制剂来对酶活性的抑制，改变反应条件如调节pH、温度等来影响酶的活性。②改变酶反应中反应物或者底物的浓度，使酶反应能够趋向正或者负方向进行反应以此来调节酶作用。酶作用变化的表征，测定酶反应速度，酶的活力，酶的比活力，酶的Km值，酶的转换数kcat等。测定方法用米氏方程，或者通过双倒数作图法来确定Vmax、Km等参数，进而推算出其他的酶参数。
17.琼脂糖凝胶电泳分离DNA基本步骤:①琼脂糖凝胶的制备，称取琼脂糖，加入到0.5×TBE溶液中加热配成1%琼脂糖凝胶，稍凉后加入几滴EB倒入凝胶板中凝固。②加样，将DNA样品加入缓冲液混匀后，用微量移液器依次加入到加样孔中。③电泳，电压维持在5V/cm，当溴酚蓝移动至凝胶阴极约3/4处时停止电泳。④染色，用溴化乙锭染色。⑤观察，在254nm或300nm波长紫外灯下观察，并照相记录。(①配制缓冲溶液，pH多在6~9之间，离子强度为0.02~0.05、②制板，常用琼脂浓度1%~1.5%,与等体积预热之60度的缓冲液混合，制成琼脂板约为3mm、③点样、④电泳、⑤固定和染色，70%酒精配制的2%醋酸溶液固定15~20min，烘干)
★18.肾上腺素、胰高血糖素对糖原的代谢调节。哺乳动物在遇到危险时，通过大脑皮层产生的兴奋，作用于肾上腺，使肾上腺素分泌增加，肾上腺素结合到专一性的β-肾上腺素特异受体上触发后续的环化酶活化。G蛋白与专一的受体偶联而被活化，将信息传递给腺苷酸环化酶，然后环化酶催化ATP产生cAMP，再触发一系列由cAMP介导的级联反应。cAMP激活蛋白激酶，蛋白激酶又使磷酸化酶激酶磷酸化而活化，引起肝糖原和肌糖原的分解产生葡萄糖，葡萄糖进入血液提高血糖浓度，为机体提供充足的能量以应对危险的状况。在饥饿时机体血糖降低可引起胰高血糖素分泌增加，此时细胞内cAMP含量增加，促使有活性的a激酶增加。a激酶一方面使糖原合酶磷酸化失去活性，一方面通过磷酸化酶b激酶使磷酸化酶变成有活性的磷酸化酶a，最终结果是糖原合成减少，分解增加，使血糖升高。胰高糖素主要通过提高靶细胞内cAMP含量达到调节血糖浓度的目的。细胞内的cAMP可激活依赖cAMP的蛋白激酶，后者通过酶蛋白的共价修饰改变细胞内酶的活性，即①激活糖原分解和糖异生的关键酶，促进肝糖原分解成血糖，促进糖异生作用。②抑制糖原合成和糖氧化的关键酶，使血糖升高。低血糖、低氨基酸可刺激胰高血糖素释放。胰高血糖素主要促进肝糖原的分解，级联放大作用与肾上腺相同。
18.组氨酸电离方程式：

19.DNA复制的基本活动包括:①双链的解开(解旋的前提下)；②RNA引物的合成；③DNA链的延伸；④切除RNA引物，填补缺口，连接DNA片段；⑤切除和修复错配碱基。
20.DNA的损伤修复系统有五种:错配修复(mismatch repair)、直接修复(direct repair)、切除修复(excision repair)、重组修复(recombination repair)和易错修复(error-prone repair)。错配修复系统能够识别错配位点以及“新”“旧”链，将错配新链切除并加以修复。光复活是直接修复的一种方式，它分解紫外线引起的嘧啶二聚体，但高等哺乳动物没有。切除修复即是在一系列酶的作用下，将DNA分子中受损伤部分切除掉，并以完整的那一条链为模板，合成出切去的部分，然后使DNA恢复正常结构的过程。从同源DNA的母链上将相应核苷酸序列片段移至子链缺口处，然后用再合成的序列来补上母链的空缺的修复称为重组修复，又叫复制后修复。DNA损伤或抑制复制均能引起一系列复杂的诱导效应，称为应急反应(SOS)。SOS可反应诱导产生缺乏校对功能的DNA聚合酶，进而导致高错误频率的DNA修复，称为易错修复。
22.糖异生作用是指以非糖物质作为前体合成葡萄糖的作用。非糖物质包括乳酸、丙酮酸、丙酸、甘油以及氨基酸等。不是糖酵解的逆反应，糖酵解有三步反应不可逆，己糖激酶催化葡萄糖和ATP形成G-6-磷酸和ADP、磷酸果糖激酶催化果糖-6-磷酸和ATP形成果糖-1,6-二磷酸和ADP、由丙酮酸激酶催化的磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成丙酮酸和ATP。糖酵解采用迂回措施:一、丙酮酸通过草酰乙酸形成磷酸烯醇式丙酮酸。通过丙酮酸羧化酶催化消耗一分子ATP，以生物素为辅基，形成草酰乙酸；草酰乙酸在磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶催化下生成磷酸烯醇式丙酮酸。二、果糖-1,6-二磷酸在果糖-1,6-二磷酸激酶催化下其C1位的磷酸酯键水解形成果糖-6-磷酸。三、葡萄糖-6-磷酸在葡萄糖-6-磷酸激酶催化下水解为葡萄糖，需Ca离子协同作用。
糖异生的调节:葡萄糖、乳酸的浓度，和糖酵解有密切相互协调关系。磷酸果糖激酶和果糖-1,6-二磷酸酶的调节。丙酮酸激酶、丙酮酸羧化酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶之间调节。

★1. 构建基因工程菌的基本过程是什么？
答: 1.目的基因的获取获取目的基因是实施基因工程的第一步。目的基因的获取方法主要有两种：
①从自然界中已有的物种中分离出来 ②用人工的方法合成。
2.PCR技术扩增目的基因
3.基因表达载体的构建基因表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子、标记基因
4.将目的基因导入受体菌
5.目的基因的监测与鉴定

★2. 怎样设计一个表达载体？
答: 大致步骤为:提取质粒--酶切--连接--导入--控制表达。 表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标记基因。常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。标记基因可帮助识别质粒并检测是否成功整合到染色体DNA中。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。
必备条件 :
①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制，且对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动
②有多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个，如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点，可适于多种限制酶切割的DNA插入
③含有复制起始位点，能够独立复制；通过复制进行基因扩增，否则可能会使重组DNA丢失
④有一定的标记基因，便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，就可以作为筛选的标记基因。一般来说，天然运载体往往不能满足上述要求，因此需要根据不同的目的和需要，对运载体进行人工改建。现在所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。
⑤载体DNA分子大小应合适，以便操作。
基因克隆的载体类型：质粒载体，噬菌体载体，柯斯质粒载体，M13噬菌体载体，噬菌粒载体。

★3. 2-D电泳（双向电泳）关键步骤:
a. 样品制备 (蛋白提取)(1) 细胞培养、处理和收集;(2) 将细胞在 IEF 裂解缓冲液中溶解;(3) 将样品离心以去除不溶的细胞碎片和 DNA，提取上清，-80 ℃保存。
b. 蛋白质定量和上样
(1) 固相 PH 梯度干胶条 (Immobi-line PH Gradient ， IPG) 水化、等电聚焦;(2)IPG的平衡;(3)SDS-PAGE ;
(4) 蛋白质检测：考马斯亮兰染色或银染色。
c. 图像分析及数据处理
将染色后的凝胶放在 GS-710 光密度扫描仪上，扫描后的图像用 PDQUEST 2D 软件分析，选择部分匹配的蛋白质斑点进行比较。

★4. 琼脂糖凝胶电泳分离DNA基本步骤:
1、安装电泳槽。将有机玻璃的电泳凝胶床洗净，晾干，用胶带将两端的开口封好，放在水平的工作台上，插上样品梳。
2、琼脂糖凝胶的制备
3、灌胶。将冷却到60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上。
4、待琼脂糖胶凝固后，在电泳槽内加入电泳缓冲液，然后拔出梳子。
5、 加样。将DNA样品与加样缓冲液按4：1混匀后，用微量移液器将混合液加到样品槽中，每槽加10-20μl，记录样品的点样次序和加样量。
6、电泳。安装好电极导线，点样孔一端接负极，另一端接正极，打开电源，调电压至3-5V/cm，电泳1-3hr，当溴酚蓝移到距凝胶前沿1-2cm时，停止电泳。
7、染色和观察。取出凝胶，放在含有溴化乙锭的染色液中染色30min，即可在254nm的紫外灯下观察，有橙红色荧光条带的位置，即为DNA条带，或在紫外灯下照相记录电泳图谱