人白细胞介素说明书.doc

人白细胞介素2（IL-2）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围: 96T
40pg/ml-1200pg/ml

使用目:
本试剂盒用于测定人血清、 血浆及相关液体样本中白细胞介素2（IL-2）含量。
试验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素2（IL-2）水平。用纯化人白细胞介素2（IL-2）抗体包被微孔板, 制成固相抗体, 往包被单抗微孔中依次加入白细胞介素2（IL-2）, 再与HRP标识白细胞介素2（IL-2）抗体结合, 形成抗体-抗原-酶标抗体复合物, 经过根本洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶催化下转化成蓝色, 并在酸作用下转化成最终黄色。颜色深浅和样品中白细胞介素2（IL-2）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值）, 经过标准曲线计算样品中人白细胞介素2（IL-2）浓度。
试剂盒组成
1
30倍浓缩洗涤液
20ml×1瓶
7
终止液
6ml×1瓶
2
酶标试剂
6ml×1瓶
8
标准品（2400pg/ml）
0.5ml×1瓶
3
酶标包被板
12孔×8条
9
标准品稀释液
1.5ml×1瓶
4
样品稀释液
6ml×1瓶
10
说明书
1份
5
显色剂A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2张
6
显色剂B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取, 提取按相关文件进行, 提取后应立刻进行试验。若不能立即进行试验, 可将标本放于-20℃保留, 但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3样品, 因NaN3抑制辣根过氧化物酶（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品稀释: 本试剂盒提供原倍标准品一支, 用户可根据下列图表在小试管中进行稀释。
1200pg/ml
5号标准品
150μl原倍标准品加入150μl标准品稀释液
600pg/ml
4号标准品
150μl5号标准品加入150μl标准品稀释液
300pg/ml
3号标准品
150μl4号标准品加入150μl标准品稀释液
150pg/ml
2号标准品
150μl3号标准品加入150μl标准品稀释液
75pg/ml
1号标准品
150μl2号标准品加入150μl标准品稀释液

2. 加样: 分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂, 其它各步操作相同）、 标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品正确加样50μl, 待测样品孔中先加样品稀释液40μl, 然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部, 尽可能不触及孔壁, 轻轻晃动混匀。
3. 温育: 用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液: 将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤: 小心揭掉封板膜, 弃去液体, 甩干, 每孔加满洗涤液, 静置30秒后弃去, 如此反复5次, 拍干。
6. 加酶: 每孔加入酶标试剂50μl, 空白孔除外。
7. 温育: 操作同3。
8. 洗涤: 操作同5。
9. 显色: 每孔先加入显色剂A50μl, 再加入显色剂B50μl, 轻轻震荡混匀, 37℃避光显色15分钟.
10. 终止: 每孔加终止液50μl, 终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定: 以空白空调零, 450nm波长依序测量各孔吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结:

计算
以标准物浓度为横坐标, OD值为纵坐标, 在坐标纸上绘出标准曲线, 依据样品OD值由标准曲线查出对应浓度; 再乘以稀释倍数; 或用标准物浓度与OD值计算出标准曲线直线回归方程式, 将样品OD值代入方程式, 计算出样品浓度, 再乘以稀释倍数, 即为样品实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用, 酶标包被板开封后如未用完, 板条应装入密封袋中保留。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出, 稀释时可在水浴中加温助溶, 洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器, 并常常校对其正确性, 以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内, 如标本数量多, 推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定同时做标准曲线, 最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔OD值）, 请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定, 计算时请最终乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用, 以避免交叉污染。
6．底物请避光保留。
7．严格根据说明书操作进行, 试验结果判定必需以酶标仪读数为准.
8．全部样品, 洗涤液和多种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不一样批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异, 以英文说明书为准。
保留条件及使用期
1．试剂盒保留: ; 2-8℃。
2．使用期: 6个月