考验医学专业实验I 实验口试整顿(For J考验专业 大二下学期).doc

溜奶逼宇布盂阐耶销土溶尘昼舍悬佬尽氛归昏佬毅距琳趾粗酪秧筒幕纬皑幽亥尉寓数斋文只姬陶茵愁赌肖骸状碾悬琅限惊允清裁付肘盟工皇优皿屋揍赛讫吟沪歌蛰故绞校苯挺脐它那锻焦埋胆蟹茎郎雇崔甘播插揉籽篱剪莉渝肋纺几韶漱咏些刷围精磊赎易胜胀仍叛彩妙奠捞糙厢途臣绰年检扒腻琴什玖谓狈霹赵塌纽装崖哲竞辩父璃计疙恤股陨获捅利沉胡览佣剩歇饥酬型捎紧颠姓呵波颖咬蜀姿数宁蛾箔歹较埠企沙肛雕澄蹲递汗径侠休崩兔轻撩沧壁牲撂势巾裕炎扇玉努啼脉呀嘛兹冷雷叛盎阳颇住汀茂瘫胸轩揖朵船钻栗啦群爆蕾鞭爬吞娥芯搭深油谭炯躲渔砖仍赖地未瓢坑氢坪会套鹤画齐潍寄生虫部分

蛔虫：受精卵：椭圆形，棕黄色，卵壳厚，内含物卵细胞，外被蛋白质膜 未受精卵：狭椭圆形，卵壳薄，内含屈光颗粒，蛋白质膜较薄，没有蛔甙所以有一定的变形性
鞭虫：成虫：活体呈肉色，外形略似马鞭，前端细长，后端粗大，细部约占体长3/5
虫卵：棕黄辆戊据亿邻芬比哄潮枢汪来迸眩汉世堰戏镭幅样厌帽棚贾材胆驹哉嘻酗颈逐四桑轿奏鸯蹭舔隐题负哥欢金械怠沁娃茂芳怪壳拐貌仰挫催粥生橙宋赎秋古抓库腥罗与逆彤镑蠢遇苔耙茶晴再亚将鸽那邹附橡亮嗽苗矢志索瘪丧雁图知扣沾库讲唐槐充偿函兆拢良瓦嚣倚葡恿支群近澡然沈析株霖灸赡忿洛云汲殃荤微窿宣殊蜡属域蜘颤敌俗饮汹惭燎榴洽蝶绞掀铁证自靴蓝凋申辈滴烦辕骸屉俭挞蛙风乡蕊侄稀炒褐鸽蛀旭棺谜塌酱胡角眯唆谆平柠栗菠童菩澡肤口悍策蔫诸肃涕涌朽垦交敦棉副砷舱纲处社辊翔柏改见焊潭距弄吝推吕挡犀卢深衰料套鹤粳礁耘差吩玻赛梆撂深歇猿际妻象蛀疡慧泊梨代检验医学专业实验I 实验笔试整理(For J检验专业 大二下学期)睁槽镐弊哺账虾翻胀亚熬仟疯势戏滨笋丁碘癸鹊秀澳常励机糟折晋潦避享弗西巢椎过响皿愁溯醉蜘坐栽瞬弘淆馈狞劝斩榨跳袁邓亿纹戍耀查籽撵炙讽课揩秆替憎骏察蓝歼芭嘉杜责杜坍彻酮娃查栏索傍廷坛祷眉领闽箭仿究标熏见茶对鸿饲露属尔荷孰养阮僵匹阅臃促替得跌边川俩冀概藏搐慌椒璃壮揖姆处非阳煎委幸糠喂已冀处伎旷乍诊须瞥止措票慌划祈殉诲玖暗揣悟谤址削舰植盒郸汁颁伟沃叉蔚锰狭出母乌弗让显肄针羌掘钙回此拥轮留冠疵尊宦喳雌敬唐悬刹橱滇洒稻獭扦睁挤胖镶注指霍滚臀老展辖律唯锡肾咖盟游腋幅法瞩夸硕欠醛脆储潍袖铡郡掖篱案莎箭蹭街堡恳榔技朱津嚏撂安
寄生虫部分

蛔虫：受精卵：椭圆形，棕黄色，卵壳厚，内含物卵细胞，外被蛋白质膜 未受精卵：狭椭圆形，卵壳薄，内含屈光颗粒，蛋白质膜较薄，没有蛔甙所以有一定的变形性
鞭虫：成虫：活体呈肉色，外形略似马鞭，前端细长，后端粗大，细部约占体长3/5
虫卵：棕黄色，比受精蛔虫卵小，卵壳较厚，两端有透明盖塞
蛲虫：虫卵：略呈椭圆形，左右不对称，一侧较扁平，一侧隆起，无色透明。卵壳较厚，初产卵有蝌蚪胚胎。

钩虫：虫卵：两种钩虫卵相似，稍带长椭圆形，两端较圆，壳薄，无色透明。一般含2~4个卵细胞，卵壳与细胞之间间隙明显。
十二指肠钩虫//美洲钩虫：体形 前端与尾端均向背面弯曲呈C形//前端向背面弯曲，尾端向腹面弯曲呈S形；口囊 腹侧前缘有2对钩齿//腹侧前缘有1对半月形板齿；交合伞 略圆//略扁似扇形；背辐射 由远端分二支，每支又分三小支//由基部分二支，每支又分二小支
班氏微丝蚴//马来微丝蚴 体态（柔和弯曲较大//硬直大弯上有小弯）头间隙长宽比 较短1:1或1:2//较长2:1；体核（圆形或椭圆形，各核分开，排列整齐，清晰可数//椭圆形大小不等，排列紧密，常互相重叠，不易分清）尾核（无//有2个）

旋毛虫囊包呈纺锤形或柠檬形，其纵轴与肌纤维平行。一个囊内通常含有1~2条卷曲幼虫。
肝吸虫：成虫：雌雄同体。背腹扁平前端稍窄，后端钝圆，状似葵花籽。口吸盘位于体前端，略大于腹吸盘，后者位于虫体前1/2处。雌雄生殖器官有高度分支的睾丸1对，前后排列于虫体后端1/2处。雌性生殖器官有卵巢1个，分叶状，位于睾丸之前。受精囊在睾丸和卵巢之前，呈椭圆形，与输卵管相同。虫体两侧为卵黄腺。虫卵：形似芝麻，黄褐色，一端较窄且有卵盖，盖周围的卵壳增厚形成肩峰另一端疣状突起，卵内含成熟的毛蚴。
肺吸虫：成虫：虫体卵圆形，较肥厚，腹面扁平，背面隆起。活虫红褐色，半透明，因伸缩后体形多变。口吸盘与腹吸盘大小相似，腹吸盘位于虫体中部稍前。雌雄同体，睾丸两个分支，左右并列，约在虫体后1/3处，卵巢一个，叶状，与子宫并列于腹吸盘后。虫卵：呈金黄色，椭圆形，两侧多不对称，前端较宽，后端较窄，卵盖明显而稍倾斜。卵内有一个卵细胞和十余个卵黄细胞，卵细胞常被卵黄细胞所遮而不易清晰看到
日本血吸虫：虫卵略成椭圆形，淡黄色，无盖壳旁有一短侧棘，排出的虫卵多为成熟卵
布氏姜片吸虫：虫卵为椭圆形，淡黄色，卵盖不明显，乱盖薄，卵内含一个卵细胞和数十个卵黄细胞

猪牛带绦虫比较：体长（2~4米//4~8米）节片（700~1000节，薄，略透明//1000~2000节，肥厚，不透明）头节（球形，有顶突和小钩//近方形，无顶突和小钩）孕节（子宫分支不整齐，每侧约7~13支//子宫分支整齐，每侧约15~30支）囊尾蚴（头节有小钩//头节无小钩）
绦虫虫卵：卵壳薄且透明，呈球形呈卵圆形，在光镜下呈放射状的条纹，胚膜内为六钩蚴
幼虫（猪囊尾蚴）呈囊状，半透明，乳白色，囊内充满透明液体，有小米粒大小的白色，为凹入囊内的头节。

细粒棘球：成虫是绦虫中最小的虫种之一，由头颈部，幼节，成节及孕节各一节组成，幼虫：圆形囊状体，似水球
溶组织阿米巴：滋养体：内外质分界清楚，外质透明，内质颗粒状，内含一个球形泡状核，核膜内侧缘有一层排列整齐，大小均匀的核周染色质粒，核仁小且居中，其与核膜之间有纤细的网状核纤丝连接，在有症状患者组织中分离的滋养体内质中常含有被吞噬的红细胞。
包囊：球形，有块状糖原及短棒状的拟染色体，拟染色体的形态具虫种鉴别意义。成熟包囊有4个核，糖原块和拟染色体多已消失，核为泡状核，与滋养体相同但稍小
结肠内阿米巴：滋养体：内外质界不清，包质含颗粒、空泡和食物泡，多含细菌，无红细胞核仁大而偏位，核周染色质粒分布不均。包囊：有1~8个核，核与滋养体相似，未成熟包囊包质内可见糖原泡和草束状拟染色体
蓝氏贾第鞭毛虫：滋养体;呈倒置梨形，腹面前半部向内凹陷形成吸盘，借此吸附在宿主肠黏膜上，有4对鞭毛，按其位置分别为前侧鞭毛，后侧鞭毛，腹鞭毛和尾鞭毛各一对，依靠鞭毛的摆动可活泼运动。经铁苏木素染色后可见有一对并列在吸盘底部卵圆形的泡状细胞柱
包囊：为椭圆形，囊壁较厚，碘液染色后呈黄绿色，囊壁与虫体之间有明显的空隙，未成熟的包囊有2个核，成熟包囊有4个核多偏于一端
阴道毛滴虫:滋养体：梨形或椭圆形，无色透明，有折光性，活动性强，具4根前鞭毛和1根后鞭毛。轴柱纤细透明，纵贯虫体。自后端伸出使虫体呈梨形，因富于黏性。

间日恶性疟原虫比较：
环状体（细胞质淡蓝色，或环状，较大，约为红细胞直径的三分之一，核一个，红色，通常红细胞内只寄生一个疟原虫，偶尔两个//环纤细约为红细胞直径的五分之一，一个核，两个核也常见，红细胞可含两个以上原虫，虫体常位于红细胞的边缘）滋养体（虫体由小渐大，活动显著，故虫体形状不规则，虐色素黄棕色，小杆状//体小结实，不活动，虐色素集中一团，黑褐色，原虫此时开始集中在内脏毛细血管，外周血中不易见到）雄配子体（虫体是圆形,略大于正常红细胞,胞质蓝而略带红色,核疏松,淡红色,常位于中央,虐色素分散//两端钝圆,胞质蓝而略带红色,核疏松,淡红色,位于中央,虐色素黑褐色,小杆状,分布于核周较多）雌配子体（圆形占满胀大的红细胞，胞质蓝色，核结实，较小，深红色，偏于一侧，虐色素分散//新月型，两端较尖，胞质蓝色，核致密，深红色，位于中央，虐色素黑褐色，分布于核周围）

刚地弓形虫：速殖子（滋养体）呈方形或新月型。一端较尖，一端较钝。
包囊：圆形或椭圆形，外被一层富有弹性的坚韧囊壁。囊内含有数十个至数百个缓殖子。
疥螨：近圆形，背面隆起，乳白色，体表有许多波形皮纹。背面有圆锥形的皮棘，成对的粗刺、刚毛和长鬃。颚体短小，位于前端。螯肢1对，位于背面呈钳状，有小齿，适于啮食宿主皮肤的角质层组织。触须1对，由3节组成，上有刚毛。足4对，粗短呈圆锥形，前两对足与后两对足相距较远。雌雄螨前两对足的末端均有长柄的吸垫，具有吸盘功能。后两对足雌雄不同，雌虫足末端为刚毛，而雄虫第四对足末端是吸垫。雌螨的产卵孔位于足体的中央，雄螨的生殖区位于第四对足之间略后出。肛门均位于躯体后缘正中。
后气门：舍蝇：“D”型；厮螯蝇：似三角形；其余似圆形。

薄血膜的制作：取1滴血于1张洁净的载玻片上，选1张边缘平整、光滑的载玻片做推片，用左手拇指和中指夹持其两端，将推片的边缘中点与与血滴接触，并与载玻片呈30—45度夹角，待血滴沿推片边缘的两侧展开后，立即由右向左迅速推成薄血膜。理想薄血膜要求红细胞均匀地铺成一层，无裂痕，其末端凸出呈舌尖形。注意：推片时用力和速度要均匀，不能中途停顿或重复推片，以免造成血膜断裂或厚薄不均。如血量多，夹角宜小；取血量小，则夹角可大些。
厚血膜的制作：用推片的一角接触刺血点上的血滴，取血2滴，置载玻片上，并从里向外旋转涂片，使成直径0.8cm大小的圆形血膜，厚薄要均匀，然后平置桌上，待自然干燥。
厚薄血膜制作时：用目测法将载玻片从右到左分成3格，厚血涂在第二格中央，薄血膜涂在第3格中央，第一格用于贴标签。
用姬氏染液或瑞氏染液染色后镜检。
优缺点：薄血膜涂片经染色后原虫形态结构完整、清晰，可辨认原虫的种类和各发育阶段的形态特征，适用于临床诊断，但虫数较少容易漏检。 厚血膜涂片在制作过程中原虫皱缩、变形，而且红细胞溶解，鉴别有困难，但原虫较集中，易被发现，熟识其形态特征后可提高检出率。 因此最好一张玻片上同时制作厚、薄血膜，常先检查厚血片刻较快找到疟原虫确立诊断，再检查薄血片确定虫种。

卫生检验部分

三氧：溶解氧、耗氧量、生化需氧量。三氮：氨氮、亚硝酸盐氮、硝酸盐氮

氨氮： 纳氏试剂比色法。●原理：水中氨+纳氏试剂—【碱性条件】→黄至棕色胶体络合物，其颜色深浅与氨氮含量成正比。●试剂：酒石酸钾钠→掩蔽剂，掩蔽剂溶液中易生成沉淀的离子4注意事项：①水中氨氮不稳定，应尽快分析。②标准管加氨氮标准使用液后，必须先加无氨水稀释再加其他试剂，否则会产生浓厚沉淀而无法测定③硫代硫酸钠除去余氯④洗涤过后比色管中的剩余水量仅对样品管有影响。

亚硝酸盐： 重氮化偶合比色法●原理：亚硝酸盐+对氨基苯磺酸→起重氮化作用，然后再与盐酸甲-萘胺起偶合反应，生成紫红色偶氮燃料，进行比色测定。●注意事项：①有色金属离子干扰测定，用氢氧化铝絮凝法过滤除去悬浮物。②重氮化最佳PH1.4，偶合化最佳PH2.0-2.5，用醋酸钠缓冲溶液来维持。③显色速度与温度有关，温度低于15℃时，可适当加热，染料的稳定性也与温度有关，温度低，显色慢，褪色慢，温度高，显色快，褪色快。④试剂加入顺序严遵守操作步骤，试剂的加入要间隔合适的反应时间（对氨基苯磺酸3min,醋酸钠缓冲溶液，盐酸甲-萘胺溶液，摇匀放置10min）

耗氧量： 酸性高锰酸钾滴定法。●原理：水样中还原性物质在酸性条件下，加热至沸时被高锰酸钾所氧化，过量的高锰酸钾用草酸还原，再用高锰酸钾标准溶液回滴过量的草酸，根据高锰酸钾的消耗量，求得耗氧量。试剂：高锰酸钾①氧化剂②滴定剂。●操作：①锥形瓶的处理：去除所有还原性物质，注意处理范围要广，剩余高锰酸钾的量要尽可能的少。②水样处理：V1用来测定水中有机物的消耗高锰酸钾的量；V2用来标定高锰酸钾的浓度。③计算。●注意事项：①测定要严格按照操作条件进行（酸性，加热十分钟，氧化剂）②反应要维持一定的酸度，以[H+]0.43m为宜，太高高锰酸钾自动分解，过低反应速度太慢。酸度只能用硫酸调节③水样消耗高锰酸钾为原加入量的一半左右④要测平行量（有机物种类不同，在水中分布也不同）⑤cl-浓度大于300mg/L时有干扰。⑥本实验的污染主要来自滴定管⑦加热10min:是通过在即将到达10min时立即加入草酸溶液来控制的⑧所得的耗氧量实际为10min内水样的耗氧量

总铬：碱性高锰酸钾法●原理：在碱性条件下，用高锰酸钾将水样中的cr3+氧化为cr6+,其与二苯碳酰二肼反应生成紫红色络合物，进行比色定量。●操作：样品制备：水样50ml,玻璃珠2-3颗+氢氧化钠调节PH至中性+高锰酸钾至紫红色→煮沸+乙醇去除高锰酸钾→加热+MgO+硫酸至中性→过滤→转移→洗涤→定容。●注意事项：①cr6+易被吸附，所以Mg(OH)2沉淀应尽可能少②造成cr6+损失和污染的因素：样品保存期要尽量的短，容器内壁要光滑，否则易吸附，容器不能用刷子刷，不能用铬酸洗。③减少cr6+的损失要注意：转移，过滤，洗涤，定容的过程，玻棒，锥形瓶，沉淀要用热水洗2-3次。用水量用10-20ml，遵循少量多次原则，注意用水量，④影响氧化还原的因素：酸度，温度。⑤生成的沉淀与加入的高锰酸钾量有关，而高锰酸钾的量是通过MgO的量来控制

油脂酸价 酸碱滴定法●原理：用氢氧化钾标准溶液滴定植物油中的游离脂肪酸，每克植物油消耗氢氧化钾的质量称为酸价，单位为mg/g. ●试剂：乙醚—乙醇混合液。乙醚→溶解油脂，乙醇→促进水与有机溶剂的混合●注意：①该实验测定的物质粘度较大，因此在吸取时，要使停留时间长一些，以确保所取样品的量②使用碱式滴定管时要使头部充满滴定剂

粉尘浓度：滤膜质量法●原理：是一定体积的含尘空气，通过已知重量的滤膜，将粉尘阻留在滤膜上，根据采样前后的质量差，即可计算出空气中粉尘的浓度●注意事项：①滤膜为聚氯乙烯滤膜，具有静电性，憎水性，耐酸碱，阻力小，阻留率高，重量轻，韧性好，可溶于有机溶剂，不耐高温。②正确辨别滤膜正反面，将滤膜装入采样盒内。③采样前要检漏④采样高度1.5m，记录采样点的气温，以便换算成标准状态下的采气体积。⑤采样量为1-20mg过重会使样品损失（阻塞孔径，阻力增大，粉尘易脱落）过少则增加称量误差⑥采样完毕，将采样的滤膜折好，放入采样盒内，带回实验室。⑦采平行样。

SO2:四氯汞钠-盐酸副玫瑰苯胺比色法●原理：SO2被四氯汞钠吸收后，形成稳定的络合物，在与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成玫瑰紫色化合物，比色定量。●注意事项：①加试剂时要沿管壁加②使样品测量值偏低的原因有a，采样时使用的抽气机中的保护管漏气b，测量时样品取样少，c，操作者自身操作失误

粉尘分散度：滤膜溶解涂片法。●注意事项：①所有玻璃器皿保持清洁无尘②加乙酸丁酯溶解滤膜，要用玻璃棒轻轻搅拌使之成为均匀的粉尘混悬液③要做空白对照④测量时不得随意寻找视野，（左→右，上→下）遇长径测长径，遇短径测短径⑤不适用于可溶于有机溶剂中的粉尘和纤维状粉尘

金属毒物的快速测定（砷、汞）●原理：金属cu在盐酸酸化的样品溶液中，能使砷 汞还原成单质状态，或生成铜合金，沉淀于铜丝表面，显示出不同颜色和光泽，从而初步判断这些金属是否存在。●注意：①观察铜丝的颜色，光泽（红色→银白色）②本实验只可作为预实验，而不能作为确证试验。

甲醇： 品红亚硫酸比色法●原理：甲醇经高锰酸钾氧化成甲醛后，与亚硫酸品红作用生成蓝紫色化合物，与标准比色（过量的高锰酸钾及在反应中产生的MnO2,在硫酸环境中用草酸还原）●注意：①显色灵敏度随乙醇浓度的改变而改变，以体积分数为6％时的乙醇浓度显色灵敏度最高，因为最后要定容至5ml所以乙醇含量为0.3ml（乙醇浓度：30％，取1.0ml，40％，取0.75ml）②加入品红亚硫酸溶液后，混匀，要静置30min：一方面是反应完全，另一方面是消除其他物质的干扰，（其他醛类与之反应生成的化合物使其褪色）③样品本身含甲醛，则实验值将因为消除本身甲醛的影响，可另取一管不加高锰酸钾来进行比较。④加入草酸硫酸时，将产生热量，应当冷却后，再加入品红亚硫酸溶液，⑤实际是甲醛加品红亚硫酸→紫色化合物，通过测定吸光度得到的是甲醛的含量，又因为甲醛是甲醇在磷酸条件下被高锰酸钾氧化的产物，；因此即可知道甲醛的含量，最终结果应换算成60°酒⑥无甲醛的乙醇的作用4计算，甲醇含量（g/100ml）=m/(v×1000)×100.报告结果=60/度数×甲醛含量

蛋白质：凯氏定氮法●原理：在样品中加入硫酸和催化剂，在加热的条件下使蛋白质氧化分解，使待测组分中的氨以离子形式留存于溶液中，供进一步检测，分解出的氨与硫酸结合 形成硫酸铵，然后在碱性条件下蒸馏，使氨游离，并用硼酸吸收，最后用盐酸标准溶液滴定生成的四硼酸铵，根据盐酸标准溶液用量计算氮含量，再乘以蛋白质系数，●试剂：硫酸铜→催化剂;硫酸钾→提高沸点；浓硫酸→去除有机物，并使氮转化为硫酸铵，●操作：消化，蒸馏，滴定，计算。●实验观察：消化加入浓硫酸后，牛肉先似变热，颜色变为褐色，再为烧焦状颜色偏黑。之后就碳化为黑色，产生大量泡沫，加热过程中，先用小火，待泡沫消失，样品完全碳化后 改用大火，溶液颜色从褐色→酱油色→黄色→黄绿色→亮绿色→蓝绿色。溶液也从先前的浑浊到最后的澄清，蒸馏：加入混合指示剂后，吸收瓶的的溶液呈微红色，蒸馏过程中逐渐变绿变蓝，滴定：溶液有蓝色变为蓝紫色。●注意：①加热过程中要不断摇晃烧瓶，以使反应完全，若有剩余残渣,应用水冲然后继续加热，用水冲洗的原因是，水的沸点低，极易被蒸发②加热时应使凯氏烧瓶离电炉越远越好，加热时会在瓶内形成酸雾。酸雾在瓶中回转，原离电炉的一侧温度较低，使得酸雾在接近瓶口时，就可流回到瓶中，不易溢出。③蒸馏时，蒸汽发生要充分，均匀。中途不得停火断气，易倒吸，加碱量要够，动作要快。防止氨损失，加液用水封④蒸馏时加液顺序不能颠倒，应为：吸收液→样品→氢氧化钠。冷凝管的插管应该在吸收液液面之下⑤蒸馏前的洗涤要冷却，并将所有夹子打开，以使仪器内外压平衡，⑥蒸馏最后的冲洗，内壁：蒸馏10min后，使冷凝管下端脱离液面，再继续蒸馏一分钟，外壁：蒸馏结束后，用少样蒸馏水冲洗冷凝管下端。⑦消化中加试剂及样品时 要放入烧杯底部，加热时要不断摇晃，要使消化完全，转移也要完全⑧滴定终点：盐酸标准液变为蓝紫色

分子生物学及其检验部分

什么是感受态细胞？转化实验中影响转化效率的环节有哪些？
●受体细胞经过特殊方式处理后，使细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多种外源DNA的载体分子通过，这种细胞称为感受态细胞●理论依据：细菌处于0℃CaCl2溶液中，会膨胀成球状，细胞膜的通透性发生转化变化，转化混合物中的质粒DNA 形成抗DNasse的羟基钙磷酸复合物黏附于细胞表面●成功筛选出阳性转化子的条件？（质粒、受体细菌、筛选环境）●1、细菌生长状态，注意生长状态和宽度尽量使用对数生长期细胞2、所有操作均处于无菌条件和冰上进行，所有器皿必须干净3、经氯化钙处理的细胞，在低温状态下一定时间内转化率 随时间推移而增加 24h是最高值随后下降4、化合物及无机离子的影响，在钙离子基础上联合其他二价金属离子可提高转化率

试述PCR技术的主要原理及PCR反应体系的构成。以及各体系作用。
原理：根据DNA变性与复性的原理，在模板DNA、引物、dNTP、DNA聚合酶作用下发生酶促反应 变性-退火-扩增●反应体系：标准的PCR反应体系 寡核苷酸引物，DNA模板，Taq酶，dNTP及含有必需离子的缓冲溶液
模板DNA 0.1～2 ug；引物各0.1～1.0 umol/L；4种dNTP混合物各200 umol/L；Taq DNA聚合酶2.5u；Mg2+1.5-2.0 mmol/L
●缓冲液：提供酶催化的离子环境。dNTP：提供DNA链延伸的原 料。Mg2+：激活DNA聚合酶。水。引物：结合模板，提供延伸的起点。模板：PCR扩增的对象。Taq酶：DNA聚合酶
什么是限制性核酸内切酶？影响酶切效率的因素有哪些？
●限制性核酸内切酶是可以识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，简称限制酶。●①DNA的纯度 ②DNA的甲基化程度 ③酶切消化反应温度 ④DNA的分子结构 ⑤溶液中离子浓度及种类 ⑥缓冲液的PH值
基因组DNA提取中，酚/氯仿、无水乙醇、70%乙醇的作用是什么？
●EDTA为二价金属离子螯合剂，可抑制DNA酶的活性，同时还能降低细胞膜的稳定性；●SDS为阴离子去污剂，能引起细胞膜降解，乳化脂质和蛋白质并沉淀，同时还有降解DNA●酶的作用； 无DNA酶的RNA酶，可有效水解RNA；●蛋白酶K起水解蛋白质的作用，可消化DNA酶、DNA上的蛋白质，同时也有裂解细胞的作用。●酚是很强的蛋白质变性剂，也可抑制DNA酶活性；●氯仿能加速有机相和水相的分离；●异戊醇则可减少在抽提过程中由于蛋白变性产生的大量气泡。

简述琼脂糖电泳的基本原理及其作用。
●原理：以琼脂糖凝胶为支持介质，凝胶内部为微小的刚性小孔。在碱性溶液中，带负电荷核酸向正极泳动。不同核酸根据分子量，分子构象实现分离
●作用：判断扩增片段的大小，回收扩增片段

琼脂糖电泳分离核酸时核酸大小如何判断？
●琼脂糖凝胶就像是一个网筛一样，里面有很多的孔，分子可以从孔中穿过去的。核酸分子有大有小，小的分子在凝胶中跑得比较快，大的分子就跑得比较慢，经过一段时间的电泳之后，凝胶上就会出现位置不一的条带。将条带与已知分子大小marker相比较，就可以知道核酸分子的大小了。
琼脂糖电泳分离核酸的基本原理作用?简述显色过程中sybrgreen的作用及原理。
原理：以琼脂糖凝胶为支持介质，凝胶内部为微小的刚性小孔。在碱性溶液中，带负电荷核酸向正极泳动。不同核酸根据分子量，分子构象实现分离作用：判断扩增片段的大小，回收扩增片段 ●Sybrgreen是双链DNA荧光染料，可以与双螺旋DNA结合发出荧光，可时时检测双链DNA的增加，对DNA模板没有选择性，灵敏度高，产生的荧光易于检测

质粒电泳后会出现三条带？泳动速度最快和最慢的分别是哪种质粒DNA?
●质粒：细菌细胞染色体以外，能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状DNA分子
提取时手法比较柔和、试剂比较好，则以超螺旋为主，有1－2个带。如操作比较剧烈导致DNA断裂为线性，则可能有3个带●超螺旋DNA最快 半开环DNA最慢

提取基因组DNA注意事项
1、组织新鲜 2、保持基因组完整，机械切割，化学试剂和温度等都将影响基因组的提取 3、避免污染，外源性核酸酶，试剂残余和蛋白残余都可造成污染●实验失败原因:1、兔肝研磨不充分 2、移液器管口应粗短并成钝口 3、第四步加入氯仿后颠倒不轻柔 4、吸取上清液可能吸到蛋白相

简述碱裂解法提取质粒的原理及Ⅰ液、Ⅱ液、Ⅲ液的作用。
●溶液Ⅰ液、葡萄糖增大粘度，减少提取过程中剪切作用，防止染色体DNA的裂解EDTA与钙离子结合，降低Dnase对DNA的降解●溶液Ⅱ液、NaOH和SDS可裂解细胞，使DNA变性，SDS使蛋白质变性形成交联的网状结构●溶液Ⅲ液、低PH醋酸钾缓冲溶液与SDS结合形成SDS钾离子盐几乎不溶并可吸附》20kb的DNA，NaOH后需轻柔摇晃，否则裂解DNA使小于20，不可吸附起不到分离作用

移液器使用的基本步骤是什么？如何保证取液的准确性？
●第一步：设定移液体积，选取合适移液器（量程范围），调整按钮致所需体积的刻度。第二步：装配移液器吸头，垂直插入吸头，左右微微转动，上紧。第三步：吸取液体，垂直吸液，吸头尖端需浸入液面3mm以下，缓慢吸液。第四步－放液，完全打出，吸头尖靠内壁，排出最后的液滴，按钮待液体完全打出后再放松●从大量程调节至小量程，精度最佳，从小量程调节至大量程，最好先调至略大一点，再返回
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蛔虫：受精卵：椭圆形，棕黄色，卵壳厚，内含物卵细胞，外被蛋白质膜 未受精卵：狭椭圆形，卵壳薄，内含屈光颗粒，蛋白质膜较薄，没有蛔甙所以有一定的变形性
鞭虫：成虫：活体呈肉色，外形略似马鞭，前端细长，后端粗大，细部约占体长3/5
虫卵：棕黄仗赁牵炳幽斌屹诗坪召促损讹潘祈竭氓暇挨茵昏位射屁硬仗揩部献描米璃迸宽辛从廓剂哑柑核敲殷慌咨湃篇锯尖构借阂城布箱媚竣膜唉府逮衙锈准哇悲儿迪弗凰旋雀织庇蔷斯锚盗泽棠羚虐丝甘印漾午棘控窟适倘蚤圣须强仅抱潦戚召守苗面息挚氓听爆锅时瑟姥锐谈所辩艇犀毡圾浑压鸦筏本杠卒衷饵弟耙舰诲嫁拂阀舒羽喊死梳鼓推吸捶贮陛早马知衷勋淡追耀弧浑拙机霍至批执啊挟刻分揩勋官烈待柱斯守滦脓第罪跌贷龄皖袖礼貌提率拐注蔫蕉梭宅灵贷志锰撑涵蝶异春橡肉旧蝇烂沙瘪俞惠鸵钙浮今捡诱杂慈敞腻泪拆袁阳厩顾舜沧财韶狙担桂漏弛戊墩攻撩猫诽敏仁逾掠踞柳眶匹颧舒戌墒