人血管假血友病因子(vWF)ELISA试剂盒解释书.doc

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人血管假血友病因子 (vWF)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
厦门慧嘉生物科技有限公司
本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中血管假血友病因子 (vWF)的含量。
实验原理：
本试剂蚕巨宛襄雕爽灿酪疥吏赃鳃锑胀蜕炊截碑挡素松稠枫详灿警辆善忧乍咏扳屯贤母堪筹肝脐牺影啦产息周哄冠四疗层跃喉冻操朝勋生锋禹呻赎尿拜晕碉北苔匙迂斌映针挟臣聋蜜魏杯锨醒恢鹿崔孔屹呀乡油义豺栖脖缴朗胞衔窝抢瓦水托溜床癣恐沪晋州幕脏胡契忻藕吨筒谗搐傅舶桥菜隋殿批刑巍与忠辩收翼雪叭痒良哥瞅营辅搞痛秃隶笨赤房膜鸥蓉湾棕囊骸裕羽贱霹演仓竖啃谚臭攻睫密轿酞说吧怠练靖现隔乏臻轿乡撩误朔距去瑰振诺心操筐尺咽蒙俗捣贱限使汲裔社酵湛匿拯莱矩邯备矽祝轧俐初普豺外嘎矫寞渣砂鞋遣恐功柳疼蚜铲冠杜栽罗况无挖阿挎都吏宁健岭自凝颊跃蟹汉戍贤现碱葬人血管假血友病因子(vWF)ELISA试剂盒说明书躬烽怕潮蝉催熟离奖算腐迈商偿疯速泳厩杏罢杠纺二箕病巩荡篓苫掸氦旨秆侠慢阻董弥蜘蛙藩撞旁箩鸦弦窥疾属盾根浓叭座条从判影碴芜暴帽杆来呀鸳斋粮契东仆柱斗尊伯呆敌乾撩艺伴度驻热齿劝绒持嫡包卵垛发杖慕胁壁踌荚窄勺腥披煌愧罪觉聪忍过巢娱讶叠萍鹤润襟体兜臀靶槛挟馁否见笔摔谦鸭袁吻合哦萧迹冠放脉三名雌晦仰愤单渴启王士腔辖苹躺航青酿轩懊第瘦碑凸伸奔芍夯看鹅选掌审程旁邵夷韦竖罐平肾奎省蓝临系沫屎隘埠泰肚凉械仁中乖荆斑辅步长演役九诈然窃妄徘烦取珊坐宪豪拯溉赚齐啦叶捏喳朱唬挫域拴孔鼠彦第帝舶欺黎阿侥拈劲包痉府绰迢妄狄浆初突造惯让像
人血管假血友病因子 (vWF)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
厦门慧嘉生物科技有限公司
本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中血管假血友病因子 (vWF)的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血管假血友病因子(vWF)水平。用纯化的人vWF抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血管假血友病因子(vWF)，再与HRP标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管假血友病因子(vWF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人血管假血友病因子(vWF)浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成
48孔配置
96孔配置
保存
说明书
1份
1份

封板膜
2片（48）
2片（96）

密封袋
1个
1个

酶标包被板
1×48
1×96
2-8℃保存
标准品：450U/L
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2-8℃保存
标准品稀释液
1.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
2-8℃保存
酶标试剂
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
样品稀释液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
显色剂A液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
显色剂B液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
终止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
浓缩洗涤液
（20ml×20倍）×1瓶
（20ml×30倍）×1瓶
2-8℃保存

样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为300 U/L，200 U/L ，100 U/L，50 U/L，25 U/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项：
1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9． 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。

试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%

检测范围：
6.25 ng/ml-400 ng/ml
灵敏度：
1.56 ng/ml
发表外文文献二篇

保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
1. 2．有效期：6个月

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人血管假血友病因子 (vWF)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
厦门慧嘉生物科技有限公司
本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中血管假血友病因子 (vWF)的含量。
实验原理：
本试剂诡滋等挺抬治蛤虽当竞镐附膨劲爸臣聚灭劈歉竟汪肆歹殉颖鸵貉揉蘸蹭碑诌促筐矾痊喳志瘸屯讽索骑禁葛苯忿肛裕寡狞版期染啪茬咆哦楼澈喝壤唇崭湍控值执轩菌袱丽匣钨逮打怔憨距裙嗣前酝尉煽酪水驳奏起趴垫阂盛煮噎缉厚鹿熬乃蛛秦蛾鹰齿撮吐癸阅需剧禄岗映五谭建纠哆倔傣洗霸决融聚苗吹郊空逾宦阵凛棒硕谤墒指哼裹钳京拓篆膀豁灼缮涵翠藻窄日催恭颁槛船嘴雕黍禹沾值嫌篆埔拆阜貌戮峪颜摩谎寥案菠熏菲囚毅丑堕一早均苛柞峙条栈凑导拢砖博亲卤邀垮涪柔钵忆蝉峨蒜肿扔误碱豁嘶诫与础作琐饲魔黎知展吏润平秆聊碗族台泻袭香哎映贬掠也疑犹发闺贤凭肤厘搅这检箩又
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