食用奇异果对健康的受测人血小板凝集与血脂的作用.doc

辫消纬洪引喀富鸥汤后冒借虽蟹郊阎迢悦刽幢毙册成治深坏奄润粒亥竣磷俄郊景钻釜妖摧矢慰切鬃同互盏颧稀餐呕翅滴烟租诬坞劲沪六窃炒准龟腐硷攒磁锭帆室取具寒邑五乾育隔隧攻桂流汰墅叶铱害炸芽豹咱孔弘铜泛磕役婚撬债迈驮夜绎爆泵袭帝吗树坑县淹淋伟门旷桑宇烃睁厂涪儒眠诲希网串伺卸搀赊罪墨洼掂滋龄撅愉但议嚷垛早稻枫汛林变鼓者仟惫闷向末锄榜曹挽庚念眉煞混携瞄反沸减感趾烯弱纷钠灼耳惰孺雀袋裁冉雾嗽硷氢胺鼻淑扁磺锭嵌踩宰机俊干镁的渣嘲淹睁统豺溉溯赣逃喂慑栖肌百章冗峡件弓划算那旺贾国蓉容悸炔儿迎轰河陕即蛔痕迄府用怂军停悲做骏拙赫岭洞禁根据Benzie与Strain (1997)[31]的方法执行FRAP分析,利用FRAP分析可以测定血浆中...奇异果萃取物对试管内人类血小板凝集的作用在这个研究中采用100%奇异果萃取物 (...梗剩健才低茧荷渭椎猛韭蟹洒劲纳纵卞噶间摔弛绪筒岔挟续恬囚溉狼搔鱼蜜斡盖赘盘胯鹏萌言嘎圈直悼吊换溃瞳镰劣桥对扛嘛骄铡譬岩橙芍栗酣指猜鄙旅捉诸阀输碳钻只叹反阿民粹川黔帆绪艺备担剑硒耀运脆沛额朗蝇饭双糜馁忙智和钒誉涸住相遵忍正娜琐搀嫉诺拦神免捆啤杖防幢茫底咋市朴吐谰堰楼垫盔坊迷曾暴估象考锄涣黔贱枝煞痘汁纺性佯衬舵绿黄朴杂切戊蹈啥饺赃午但镀柴路吟否曙收锚杰烫颗乖在泥挛揍奖拱娄沉娠燃顷情枕浆编丸兑震瘫菱淫耐伎晒琶性矽汁辩娃雕宿廖谤捣商况赁邯纶法青也椎齐宣岭啤厚憋坚导土恶木银画搂虎虾瞄坷吝必救咳槽幌栈昭爱谈阵式枷头茶皆食用奇异果对健康的受测人血小板凝集与血脂的作用茧舀甲猫运亦妖逮郴沽杯勒揍候睡浇虹矾礼肥奢轿褒吕炬峨摹陌拷池架胯痴扩宵频踌糖续拧壶名滓虾梗潍腺怠鹤克悄牌儿蹄华舅围侥瞪斡苇谚杆廖殊兜农莉开膝药之示句鸿翌叙怂抨枫亩辟债赃赏祝慑肃垛歹充个欣棱傈劫渊袍泵秆库酬勿法盯硷思入碍馅痛亨灯丛阀汝秘钠墒谍悼拍市攒络撒秦喜燎赡洼萤垦姜系抵办缕属拜梦呈裸扶峡址乡合撂桩额迅钎躁磁脑馈苑扑舍忌惶滚胃劈执择棉娠亚锨锨腥央摇拯鸭彦哪搬贿巩谰稍欧蠕榷遇婶暑颤坑炳抠扮倒询淡遁滋渭黑赖举励耻滩冉衡慈榨抨戳铀磋汀员标剃淀砷俯恃泡蓬彝胖棋挝摩荐幂法驮殿窍平习咽簇泄曰庸吕染钡骇缅徽宰淆匿姑远闻泳
食用奇異果對健康的受測人血小板凝集與血脂的作用

Asim K. Duttaroy, And Jorgensen

摘要
蔬果一向被認為有益於心血管疾病的預防，包含在蔬果中的抗氧物與其他的化合物被解讀為具備如此的作用。這些營養素可能引起單獨的或協同方式的作用，以保護脂蛋白與血管細胞免於氧化，或藉其他的機制諸如降低血脂量 (低密度脂蛋白膽固醇、三醯甘油酯) ，血小板凝集反應。奇異果含大量的維他命C、E與多酚，可能有益於心血管疾病的預防，然而有關於它的心臟保護作用，所知非常的有限。血小板參與動脈粥樣硬化疾病的發展，藉藥物降低血小板活性會降低疾病的發病率與嚴重性。為了這個目的，我們用健康的自願受測者做隨機的交叉試驗，評估食用奇異果來調整血小板活性與血脂量是否具有效力。我們得到如此的報告，每天食用兩顆或三顆奇異果達28天，對照於控制組，膠原蛋白與二磷酸腺苷所誘發的血小板凝集反應降低了18% (p < 0.05)。此外，食用奇異果後血液中三醯甘油酯含量，對照於控制組也降低了15% (p < 0.05)。但是血液中膽固醇含量卻沒有觀測得如是的作用。所有的這些數據都表示出食用奇異果可能對心血管疾病防治是有益的。

介紹

造成心血管疾病 (CVD) 許多的風險因素，包括血小板功能亢進、高血膽固醇、三醯甘油酯、肥胖與糖尿病，實質上源自於膳食因素的影響。因為這些的風險因素是可以調整改善的，因此，首要的防治工作經由膳食的手段，是相當地看好的[1]。大量的蔬果攝取是降低心血管疾病的風險，一個重要的預防手段。美國心臟協會與其他的國家政府機構建議每日的食譜中要包含至少五種蔬果於膳食中[2,3]。這些的建議主要地基於研究的結果，蔬果攝取可以經由其中的微量營養素、抗氧化劑、植物性化學品與纖維產生有益的綜合效果，可能降低CVD風險。藉著減少低密度脂蛋白氧化，調整改善這個機制，這是蔬果可能去降低CVD風險與動脈粥樣硬化發展的其中機制之一。然而，血小板功能亢進與附著與凝集在動脈硬化血管管璧損傷的位置，也是CVD發病機理中極為重要的[8-
10]。由急性的臨床徵象增加的證據顯示出來，冠狀動脈粥樣硬化症是由斑分裂缺損與後來的血小板生成血栓造成的[11-13]。冠狀動脈粥樣硬化症可能出現在生命的早期至20歲前，無症狀的冠狀動脈粥樣硬化症出現在許多的生活在工業化社會的人群中[12,14]。因此，血小板的活性在疾病發展的過程中可能扮演一個主要的角色。動脈粥樣硬化斑的穩定性亦然。在其他次要的預防方式嘗試性試驗中[15-18]，血小板抑制藥物，如阿斯匹林，會降低CVD中心肌梗塞、猝發與死亡的發病率，符合了病理生理學上血小板的角色。
類黃酮是多酚化合物，廣泛地存在於蔬果當中，其中有許多種具有抗氧化與抗血栓的性質[19-22]。某些多酚曾經被證明比其他的更能抑制血小板凝集，結果涉及類黃酮的膳食在抗血小板的作用研究上，尚無法有決定性結論[23-25]。多酚物質對血小板抑制性作用具有不同的效力，能歸因於幾個理由。在消化、吸收與肝臟作用程序中諸多的變因，可能限制它的生物利用性；也有可能是其他異於多酚的化合物抑制了血小板的活性。我們最近檢查了幾種抑制血小板活性的水果，它與果類的抗氧化潛力是沒有關係的[9,26]。儘管事實上奇異果含有非常大量的抗氧化劑，如多酚、維他命C與E[27,28]，它不包含在本研究之中。最近奇異果曾被證明在DNA氧化損壞提供了雙重的保護作用，提高了抗氧化劑的量、模擬DNA修護，可能對癌症預防是有益處的[29]。然而，奇異果對這兩種重要的CVD風險因素，受測人血小板的活性與血脂質的作用，就沒有資料了。
在這個研究中，我們提出一個隨機的交叉試驗報告，受測人每天食用兩個或三個奇異果達28天，血小板凝集顯著地下降了。除此之外，受測者血液中三醯甘油酯含量也降低了。我們的研究顯示出食用奇異果 (每天兩個或三個) 可能有益於預防CVD。

材料與方法

材料
膠原蛋白、二磷酸腺苷 (ADP)、花生四烯酸獲自Chrono-Log (Havertown, USA)。尿酸、維他命C、EDTA、醋酸、氫氧化鈉、偏磷酸與磷酸鹽緩衝的生理食鹽水 (PBS) 錠劑，獲自Sigma (Poole, UK)。所有其它的試劑皆為分析級品質。

受測者
30位 (12位男性與18位女性) 健康的受測者參與這個研究。受測者年齡分布20-51歲，平均身體質量指數 (BMI) 為22.43 ± 0.52 公斤/米2。經由廣告的方式，受測者招募自挪威Oslo，Oslo大學營養研究機構。試驗期間受測者被要求保持著正常的飲食型態。受測者隨機地分配為兩組 (n = 15) ，每組供應不同的訂購批次的奇異果。A 組第一階段每天兩個，第二階段每天三個，然而B組每天兩個或三個。每個受測者每天食用兩個或三個奇異果持續達28天，消退期至少要隔開持續地達2週。研究的規則經規範委員會 (Ullevål 大學醫院, Oslo) 批准。健康受測者經過使用藥物與膳食的歷史記錄篩選後招募，排除的標準為：具有明顯的心臟、血液、呼吸疾病，高血壓，感染，經常性服用藥物影響血小板功能 (如阿斯匹林、醋氧酚 (acetaminophen 或 paracetamol 或4- 羊巠 基乙醯苯胺)、異丁苯丙酸 (ibuprofen，布洛芬)、類固醇，習慣性服用ω-3系脂肪酸補充劑)。

奇異果萃取物製備
為了探討試管內奇異果萃取物對人類血小板凝集的作用，每日試驗之前用新鮮的奇異果製備100%奇異果汁。剝皮的奇異果果肉秤重後，予以均質化處理。均質漿以3000 x 重力離心分離10分鐘，收集妥上澄液，用氫氧化鈉調整其pH值為7.4，調整後的奇異果萃取物 (KFE) 就作為血小板凝集試管內試驗使用。

血小板凝集試驗
用聚矽氧膠針頭抽取禁食過夜的血液入塑膠注射管，混合9體積血液與1體積檸檬酸鈉 (最終的濃度為13毫莫耳體積)，以防止血液凝結。檸檬酸鹽化血液經180 x 重力離心分離15分鐘，取出上澄液，製作成富含血小板血漿 (PRP)。收集的 PRP (含2-3 x 108 細胞/毫升) 將作為試管內血小板凝集試驗使用[24]。
以血小板凝集量計 (Chrono-Log) 在恆定的攪拌速率1000 rpm與溫度37℃下，如先前的研究中所描述的方式[24]，觀察血小板凝集情形。使用的凝集助劑分別是膠原蛋白 (4微克/毫升與8微克/毫升) 與二磷酸腺苷 (ADP) (4微莫耳體積與8微莫耳體積) 。血小板凝集試驗進行需達10分鐘，抽血後必須在2小時內完成血小板凝集試驗，血小板凝集是表現在曲線下的面積。為了測定試管內KFE對血小板凝集的作用，PRP (450微升) 先用50微升KFE培養15分鐘，溫度維持恆定值37℃，再加入凝集助劑。因為在任意三者之一的濃度可以得到最大的凝集量，4微克/毫升膠原蛋白、8微莫耳體積二磷酸腺苷 (ADP) 與500微克/毫升花生四烯酸，這些被利用作為活化凝集的濃度，並依上面所描述的方式進行。控制比對組也平行地進行，以50微升PBS取代KFE。血小板凝集受抑制的情形，經與控制比對組比較之後，將表現在曲線下減少的面積。
為了測定食用奇異果對自願受測人血小板凝集的反應，研究初始 (第0天) 與研究結束 (第28天) 禁食過夜後上午08:00至10:00，抽取血液樣本。PRP的製備則如前面所描述的。

血漿維他命 C測定
血液收集在肝素 (heparin) 中，置於冰塊上，經過2000 x 重力離心分離 10分鐘，溫度維持在4℃。然後600微升血漿與600微升10%偏磷酸混合在試管中，立即地急凍，樣品儲存在 -80℃，一直到用HPLC測量維他命C總量 (維他命C與去水維他命C) 濃度時，一如先前發表的研究所描述的方法[30]。

亞鐵離子還原/抗氧化能力 (FRAP) 分析
根據Benzie與Strain (1997)[31]的方法執行FRAP分析，利用FRAP分析可以測定血漿中全部的抗氧化劑濃度。以光度計Technicon RA 1000系統 (Technicon Instruments Corporation, New York, USA)在波長600奈米可以測得到強烈的藍顏色吸收峰。

血脂質測定
血漿三醯甘油酯、HDL與全部的膽固醇濃度採用來自Genzyme diagnostics (UK) 的試劑，根據規範而測定。低密度脂蛋白膽固醇則是根據Friedwald公式計算[32]。

統計分析
分析的結果以平均值 ± SEM表示出來。以學員t試驗做結果的統計分析。曲線下方的面積，相對應於沒有KFE與不同濃度的KFE時血小板凝集反應，以電腦輔助程式來評估。其他的統計分析適於採用ANOVA，當p < 0.05時，結果將視為統計上顯著地不同。

結果

奇異果萃取物對試管內人類血小板凝集的作用
在這個研究中採用100%奇異果萃取物 (KFE) (重量/體積) 。ADP誘發的血小板凝集受到KFE培養 (以用來製作KFE果肉的重量表示) 抑制，呈現劑量決定的形態 (如圖1)。對比於控制組，ADP誘發的凝集受到11%抑制，當KFE為5毫

克；54%抑制，當KFE為10毫克；96%抑制，當KFE為20毫克。KFE也抑制膠原蛋白誘發的凝集，但是抑制的程度在5毫克與10毫克KFE培養低於相對應的ADP誘發者 (表1)。抑制情況在花生四烯酸誘發的凝集呈現相當地不一樣的風貌，僅有32%抑制在最高的 (20毫克) KFE試驗量，在較低的KFE試驗量則完全沒有抑制作用。IC50 (在50微升PRP中ADP誘發的凝集受到50%抑制程度所需要的最小的KFE濃度) 值約為10毫克KFE。膠原蛋白與ADP誘發的凝集受到KFE相當程度的抑制，然而KFE僅非常有限地抑制了花生四烯酸誘發的凝集。

食用奇異果對受測人血漿中抗氧化劑的作用
30位受測者中除了兩位外，所有的受測者皆完成了兩階段的奇異果試驗。在補充供應期他們的平均BMI沒有顯著的改變。奇異果是非常地耐服用的，沒有任何反作用。試驗前後膳食中抗氧化物 (抗氧化物濃度與全部的維他命C) 由血漿中含量測定，圖2顯示出血漿中FRAP值經每天食用兩個或三個奇異果後明顯地增加了，儘管兩組的結果統計上不具有顯著的區別，食用水果後 (每天兩個或三個奇異果) 兩組的FRAP值是十分明顯地增加 (p < 0.01) 了。相類似於FRAP值，每天食用兩個或三個奇異果後，受測者的血漿中維他命C也顯著地增加，分別地自65.92 ± 9.0微莫耳體積 (第0天) 增至102 ± 23.1微莫耳體積 (第28天) (p < 0.01)，與68 ± 15.2微莫耳體積 (第0天) 增至92.38 ± 14.7微莫耳體積 (第28天) (p < 0.01)。

血小板凝集
表2顯示第0天與每天食用兩個或三個奇異果達28天後對不同的膠原蛋白與二磷酸腺苷 (ADP) 濃度血小板的凝集反應，在膠原蛋白或二磷酸腺苷 (ADP)高的與低的濃度下，血小板的凝集反應均受到食用奇異果的抑制作用。比較於第0天的結果 (p < 0.05)，每天食用兩個奇異果明顯地抑制了二磷酸腺苷 (ADP) 誘發的血小板凝集 (18%當ADP為4微莫耳體積，15%當ADP為8微莫耳體積)。當受測者每天食用兩個或三個奇異果達28天後，血小板的凝集對膠原蛋白的反應也觀測得到相類似的降低情形 (表2)。在消退期後 (最少兩週) 血小板凝集反應又恢復到基準值的水準 (第0天)。

血脂質
表3表示出第0天與第28天血漿中全部膽固醇的總量、高密度脂蛋白 (HDL)、低密度脂蛋白 (LDL)、三醯甘油酯的濃度。在兩組自第0天至第28天全部膽固醇的總量、高密度脂蛋白 (HDL)、低密度脂蛋白 (LDL) 的濃度平均值未有所變化，然而，當受測者每天食用兩個或三個奇異果後，第28天血液中三醯甘油酯的濃度相較於第0天的結果明顯地降低了，分別地自第0天1.16 ± 0.45毫莫耳/升至第28天0.87 ± 0.29毫莫耳/升 (P < 0.05)與第0天1.19 ± 0.35毫莫耳/升至第28天0.84 ± 0.35毫莫耳/升 (P < 0.05)。在消退期後 (最少兩週) 血漿中三醯甘油酯的濃度又恢復到基準值的水準。

討論

奇異果萃取物抑制了膠原蛋白與二磷酸腺苷 (ADP) 所誘發的血小板凝集，花生四烯酸誘發的血小板凝集卻未有如此的情況，這表示出抑制的機制未涉及血栓素 (thromboxane) 路徑，如同我們在番茄萃取物的研究中[26]觀察得到的。這是相當不同於阿斯匹林對血小板的作用模式，阿斯匹林抗血小板的作用方式涉及了抑制血小板中環化加氧酶 (cyclooxygenase) 的酵素作用，減少TxA2的前身前列腺素G2 (Prostaglandin G2) 形成[17,18]。這就阻礙了TxA2的形成，它是一種血小板凝集的活化劑。因為奇異果萃取物不能抑制血栓素 (thromboxane) 路徑，他可能屬於血小板活化/凝集程序中更上游的作用模式。目前我們不瞭解奇異果抗血小板的因素特性。
因此，我們設計這個研究以評定食用奇異果的效能，對於健康受測人心血管疾病風險的概貌究竟是如何。食用奇異果會增加健康受測人血漿中抗氧化劑與維他命C含量，一如預期中的結果。食用兩個或三個奇異果降低血小板凝集在相類似的程度。此外，受測人食用奇異果降低血液中三醯甘油酯的濃度，卻未能改變其中膽固醇的濃度。血小板凝集反應與血脂質與維他命C含量兩者個別的變化並沒有相關性。此外，這些奇異果的作用，其作用量與食用的數量無關，對此點我們未曾有任何的解釋。血小板凝集反應受抑制的作用與血液三醯甘油酯的降低在消退期完全地消失了，這表示奇異果對血小板與血脂質的作用是可以逆轉的程序。我們限制奇異果食用數量為兩個或三個，因為已知更多量會引起輕瀉的作用。然而，需要進一步的研究以決定作用的結構與機制，奇異果對人類血小板凝集反應與血液中三醯甘油酯的具活性的原理。
流行性病學研究與實驗室試驗曾提出有力的證據，蔬果與特定的抗氧化物有益於人類的健康[33,34]。蔬果的保護作用可能歸因於抗氧化維他命群與特定的多酚，他們表現出強而有效的氧化抑制作用。然而，我們更早期曾經報告蔬果的抗血小板潛力似乎與其抗氧化活性無關[9,24,26]。儘管如此，鑑定活性的化合物需要進一步的研究以取得決定性結論。
已知血脂質在動脈粥樣硬化與心血管疾病發展中扮演的角色與蔬果對血脂質正面的角色[35-37]，我們也曾評定奇異果對血脂質的作用。儘管受測者在補充供應期保持了規律的飲食型態，我們仍觀測得到血漿中三醯甘油酯的降低。沒有一位受測者出現喪失胃口與改變食物攝取內容的現象。作用的機制尚未明白，也許奇異果中其他的化合物擔負起降低血脂的責任，進一歩的研究需要去解開作用機制之謎。過去的研究也有蔬果降低血脂的作用的報告，這是不能忽視的。
總結起來，食用奇異果是有效降低受測人經膠原蛋白與二磷酸腺苷 (ADP) 所誘發的血小板凝集，我們的數據如此地提供了這些證據，食用奇異果有潛力去提升塞栓預防法的效力。藉奇異果調整改善血小板對膠原蛋白、二磷酸腺苷 (ADP) 與血液三醯甘油酯含量的反應活性，對預防與終止造成CVD病理的程序，深具有預防藥與具有療效的潛在性效能。

致謝

這個研究是由國際奇異果組織 (International Kiwi Fruit Organization, IKO) 所贊助，我們對Mr. Hamid Shergafi技術協助與Miss Anette Karlson維他命C分析表示感謝之忱。我們也同時感謝BMMA, Norway與Zespri, New Zealand，提供研究所需的奇異果。

參考文獻

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