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二十三中 谢茜 杨梅 果胶酶在果汁生产中的应用
1.铜绿微囊藻是引起水华最主要的一种蓝藻，其细胞壁有内外两层，内层是纤维素，外层是以果胶为主的胶质衣鞘，果胶对藻细胞结构起到支撑和保护作用。为了探究固定化果胶酶对铜绿微囊藻生长的影响，以期为果胶酶在水华治理方面提供更多理论基础，科研人员做了以下实验。
实验流程大致如下：
①铜绿微囊藻的培养 ②固定化果胶酶的制备 ③果胶酶抑藻试验 ④藻细胞数量和叶绿素a含量的测定
实验结果：

图1 图2
根据以上内容，回答下列问题：
（1）铜绿微囊藻属于生态系统组成成分中的_________________。
（2）结合果胶酶的作用，请推测果胶酶有抑藻效应的原理:__________________
_________________________________。
（3）制作固定化果胶酶，配制海藻酸钠溶液时应注意____________________；若海藻酸钠溶液浓度过低导致抑藻效应差，是因为____________________________。
（4）实验组的处理为：150ml含藻培养液中加入15 g 固定化果胶酶，摇匀后置于适宜条件下培养。请写出对照组的实验设计：___________________________。
（5）根据图1和图2判断，应用固定化果胶酶抑制铜绿微囊藻生长最佳处理时间是____天；图2中实验组叶绿素a含量逐渐下降，据此推测果胶酶还可通过______
_____________________发挥抑藻效应。
（6）目前处理水华最快速有效的方法是人工直接打捞，与该方法相比使用固定化酶的优点有：____________________________________。
参考答案：
(1)生产者
(2) 细胞壁含有果胶，果胶酶破坏细胞壁使细胞不能维持正常形态。
(3) 小火间断加热 包埋的果胶酶含量太少
(4) 150 ml 藻液置于适宜条件下培养
(5) 7 抑制叶绿素a的合成（或促进叶绿素a的降解）
(6) 固定化酶可以重复使用，节约人力物力，降低成本

2、有一部分人体内的乳糖酶含量较少，不能将乳糖完全分解，导致乳糖不耐受。用乳糖酶生产低乳糖乳制品成为解决乳糖不耐受问题最有效的途径。生产上采用乳糖酶来生产低乳糖乳品，固定化乳糖酶凸显出其特有的优势。
科研人员选取一种乳糖酶——L酶为研究对象，探究影响酶活力的因素进行相关实验，得到以下数据。

根据以上内容，回答下列问题：
（1）与直接用酶相比，固定化酶的优势有：___________________________________
________________________。
（2）该实验的目的是：_________________________________________________。
（3）据图中数据可以得到以下结论：L酶的最适温度为40℃，酶的固定化对酶的最适温度_______（有或无）影响；与海藻酸钠相比，使用壳聚糖固定化酶的优点有：_________________________________________________。
（4）某同学用海藻酸钠固定化酶，过程如下：称取海藻酸钠，加入蒸馏水，搅拌至海藻酸钠完全溶解。称取一定量乳糖酶，加入蒸馏水使其溶解，再将海藻酸钠溶液与酶溶液混合，转移至注射器，逐滴滴入CaCl2溶液中，即形成规则的凝胶珠，静置得到固定化酶，将固定化酶放入缓冲溶液中，于适宜条件保存备用。
上述酶的固定化操作过程有两处明显的错误，请指出：__________________________
____________；________________________________________。该过程中CaCl2的作用是_________。酶保存的适宜条件是：___________________。
参考答案：
（1） 易从反应体系中分离出来，可以重复利用；固定化酶可以通过连续操作的方式，缩短反应时间，降低成本。
（2） 探究温度和使用海藻酸钠、壳聚糖固定化对L酶活力的影响。
（3） 无 对温度的耐受力变强，对温度的适应范围广，热稳定增大，应用范围广（答案合理均可）
加入蒸馏水后应该边加热边搅拌直至完全溶化；乳糖酶不能用蒸馏水溶解，要用缓冲液溶解 凝固剂 低温和最适PH

武汉市第十九中 范伟
1.（15分）普通洗衣粉中通常包含有表面活性剂、水软化剂、碱剂、漂白剂等成分。与普通洗衣粉相比，加酶洗衣粉能更有效地清除顽渍。请回答下列问题：
（1）加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉，目前常用的酶制剂有四类。其中，应用最广泛、
效果最明显的是 ，构成这些酶的单体是 。
（2）下表为某加酶洗衣粉包装袋上的产品说明，根据“影响酶活性的因素”的相关知识，
说明注意事项③的原因： 。
本产品使用注意事项
①请将本品罝于阴凉、干燥处，避光、避热、避湿。
②若不慎溅入眼中，立即用水冲洗。
③使用时水温以30—50℃为宜，切忌用70℃以上的热水。
（3）某校研究性学习小组为探究该洗衣粉中酶催化作用的最适温度，设计了如下装置进行
实验，并将结果用下列曲线图A、B表示。

① 由实验装置图可知，该实验主要研究洗衣粉中 酶的活性。由曲线图可知，
使用该加酶洗衣粉的最适宜温度为_____ ______。
② 在0℃和75℃时，酶的催化效率基本都为零，但当温度再度回到45℃时，后者酶的催
化能力已不能恢复，这是因为________________________________________。
③ 在实验过程中可通过直接测定______________（指标）来表示该洗衣粉中酶的催化效率。
（4）依据上述实验结果，为该加酶洗衣粉补充一项使用注意事项：______________________
_____________________________。
参考答案（除标明外，每空2分，共15分）
（1）碱性蛋白酶和碱性脂肪酶 氨基酸（1分）
（2）酶的催化效果（活性）受温度影响，30～50℃是洗衣粉中酶的适宜温度范围，温度过
高则会使酶变性而失去活性，因此切忌用70℃以上的热水。
（3）①（碱性）蛋白 45℃
② 高温条件下酶的结构已遭破坏（或酶的活性已丧失）
③ 胶片上蛋白膜存在时间的长短
（4）切勿用于丝质及羊毛衣料（答案合理得分）

2、（15分）蛋白质是生命活动的主要承担者。随着人类基因组计划的进展以及多种生物基因组测序工作的完成，人类已跨入后基因组和蛋白组时代。对蛋白质的研究与应用，首先需要获得纯度较高的蛋白质。为此，某校科学实验兴趣小组按照下方的实验流程图进行了“血红蛋白的提取和分离”实验。请回答下列问题：

（1）血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，其在红细胞中的作用体现了蛋
白质的__ ___功能。
（2）将上方实验流程图补充完整:A为 ，B为 。凝胶色谱法
也称做分配色谱法，是根据 来分离蛋白质的有效方法。
（3）实验中红细胞洗涤干净的标志是 ，为防止血液凝固，在采血容器中要
预先加入 。
（4）下图是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品加入过程的示意图，正确的加样顺序是_____。（填序号）其中使吸管口沿管壁环绕移动的目的是 。

（5）实验的最后对血红蛋白的纯度进行鉴定的常用方法是 。
参考答案（除标明外，每空2分，共15分）
（1）运输（1分）
（2）血红蛋白的释放 样品的加入和洗脱 相对分子质量的大小（1分）
（3）上清液不再呈现黄色 （抗凝血剂）柠檬酸钠（1分）
（4）④①②③ 洗去管壁所粘样品
（5）SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）
3、（15分）泡菜古称葅，是指为了利于长时间存放而经过发酵的蔬菜，是人们日常生活中比较喜欢的一种食品。其制作过程受环境条件的影响，温度过高、食盐用量过低、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。某校兴趣小组以“测定泡菜腌制过程中亚硝酸盐含量的变化”为课题开展了如下实验研究。请分析回答：
①取3只泡菜坛，分别编号A、B、C。
②向3只泡菜坛内分别加入调味料和0.5千克洗净的新鲜卷心菜。
③向三只泡菜坛内分别加入2L质量分数依次为10％、20％、30％的食盐水。
④密封后置于相同且适宜环境中发酵。
⑤测定亚硝酸盐的含量。在封坛前进行第一次测定，以后定期测定，并将测定的数据绘制成曲线图如下。

（1）实验中泡菜的腌制过程里起主要作用的微生物是 ，其与制作腐乳的主要菌
种的最显著差异是 。
（2）实验中小组成员在2号泡菜坛内发现了一层白膜，这层白膜形成的原因是
。
（3）实验中测定亚硝酸盐含量常用的方法是 。紫卷心菜不适合作为本实验
的材料，原因是 。
（4）图中曲线1是 坛（填字母）测定的结果。制作泡菜效果最好的食盐水质量
分数为 ，原因是 。
参考答案（除标明外，每空2分，共15分）
（1）乳酸菌（1分） 无以核膜为界限的细胞核（无成形的细胞核、无核膜包被的细胞核）
（2）（产膜）酵母的繁殖
（3）比色法 紫卷心菜中的色素会干扰显色反应所产生的颜色
（4）A 20% 亚硝酸盐含量较低，且不会因为食盐浓度过高而使泡菜过咸
4、（15分）泡菜是我国传统的发酵食品，深受人们的喜爱。其主要靠乳酸菌的发酵生成大量乳酸而不是靠盐的渗透压来抑制腐败微生物的。但腌制过程中，在一些硝酸盐还原菌的作用下，会产生一定量的亚硝酸盐，可能危害到人体健康。某校科学实验兴趣小组进行了“探究泡菜腌制的过程中亚硝酸盐含量变化”的实验。下图为泡菜的制作及测定亚硝酸盐含量的实验流程示意图及测量结果。

亚硝酸盐含量（mg/kg）
封坛前
第2天
第5天
第8天
第11天
第14天
1号坛
0.18
0.4
0.6
0.3
0.1
0.1
2号坛
0.18
0.2
0.3
0.2
0.05
0.05
3号坛
0.18
0.5
0.7
0.6
0.2
0.2
请根据上述情况，回答下列问题：
（1）小组成员甲为观察乳酸菌的形态结构特征，取少量泡菜滤液加入抗生素后在显微镜下观察，他能否达到目的，原因是 。
（2）小组成员乙为提高乳酸菌菌液浓度，使用以丙酮酸为唯一碳源的液体培养基（其他营
养成分均含有）在无氧条件下进行纯化，他能否达到目的，原因是
。
（3）在泡菜腌制过程中，影响亚硝酸盐含量的因素除食盐的用量外还有
。
（4）实验过程中，3只坛内产生的亚硝酸盐的含量存在差异，可能的原因是
。测定亚硝酸含量的原理是：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨
基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成________色染料。将显色反应后的样品与已知浓度的标准显色液进行________ 比较，可大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。
（5）关于测定亚硝酸盐含量实验操作的有关叙述，正确的是________ __。
A．实验中氢氧化铝作为吸附剂，使泡菜滤液脱色，变得澄清
B．实验中氢氧化钠溶液的作用是中和过多的盐酸，营造碱性环境
C．实验中应先配置好相应浓度的对氨基苯磺酸溶液作为提取剂待用
D．制备样品处理液时，先加入提取剂，在摇床上振荡提取1 h，再加入氢氧化钠溶液
参考答案（除标明外，每空2分，共15分）
（1）否，所加入的抗生素会杀死或抑制乳酸菌的生长，故无法观察到（3分）
（2）否，乳酸菌体内缺少还原型辅酶Ⅰ（NADH），无法直接利用丙酮酸（3分）
（3）腌制的时间、温度
（4）各坛中微生物种类和数量可能存在差异 玫瑰红（1分） 目测（1分）
（5）ABD（3分）
5、（15分）如今，酶已经大规模地应用于食品、化工、轻纺、医药等各个领域。在酶应用的过程中，人们发现了一些实际问题：酶在某些条件下易失活、难回收，不能被再次利用。为解决这些问题，固定化酶技术应运而生。酶是由细胞合成的，于是，在酶的固定化技术的基础上，又发展出了细胞固定化技术。下图展示的是酶的几种固定方式和制备固定化酵母细胞的实验流程，请回答以下问题：

酵母细胞
的活化
配制
CaCl2溶液
配制海藻酸钠溶液
海藻酸钠溶液与酵母细胞混合
固定化酵母菌细胞

（1）固定化酶和固定化细胞技术是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技
术，包括化学结合法、物理吸附法和 法。一般来说，细胞多采用上图中的
（填字母）固定化，原因是 。
（2）在______ 状态下，微生物会处于休眠状态。活化就是让处于休眠状态的微生
物恢复正常的生活状态。酵母细胞活化前应选择足够大的容器，因为酵母细胞活化时___
。
（3）本实验流程中决定实验成败的最重要的一环是 。
（4）若操作中使用的海藻酸钠浓度过低，将造成 结果。
（5）观察形成的凝胶珠的颜色和形状，若呈现蝌蚪状，说明____ _______。
（6）目前，还没有一种固定化技术能普遍适用于所有的酶，原因是____ _______
____ ___________ ___________。
参考答案（除标明外，每空2分，共15分）
（1）包埋（1分） C（1分） 细胞体积大，而酶分子很小；体积大的细胞难以吸附或结合，而体积小的酶容易从包埋材料中漏出
（2）缺水（1分） 体积会变大（增大）
（3）配制海藻酸钠溶液
（4）形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少，影响实验效果
（5）海藻酸钠的浓度偏高
（6）不同种酶的结构具有多样性，对理化条件的敏感程度也不相同（答案合理得分）

武汉市第49中 罗会江 加酶洗衣粉的洗涤效果
长期以来，人们使用含磷的普通洗衣粉洗涤衣物织品，洗涤污水是导致水体富营养化的重要因素之一。随着科技的发展，无磷的加酶洗衣粉逐步取代普通洗衣粉，成为人们家庭的主要洗涤剂，有效地保护了环境。为探究加酶洗衣粉的洗涤效果，某兴趣小组的同学对市售的加酶（复合型）洗衣粉和普通洗衣粉对血渍的洗涤效果进行了比较研究，其实验结果记录如下图：

（1）加酶洗衣粉是指含有 的洗衣粉，温度、酸碱度和 都会通过影响 而影响加酶洗衣粉的洗涤效果。
（2）该同学实验中的自变量有 、
（3）该同学认为此加酶洗衣粉洗涤的最适温度为40℃，你认为是否正确？若正确请说明理由；若不正确请说明进一步探究的实验思路。

（4）根据实验结果，请你对使用加酶洗衣粉洗涤特别脏的衣服或水质较硬地区提出2点可行的建议。 。
参考答案：（除标注外，每空2分，共15分）
（1）酶制剂 表面活性剂 酶活性
（2）洗衣粉的种类 洗涤温度
（3）不正确，在30℃——50℃之间设置更小的温度梯度，重复实验，比较洗涤效果，洗涤效果相对值最高所对应的温度，即为最适温度（3分）
（4）用温水洗涤；适当延长浸泡时间(（其他合理答案也可）

武汉六中 邬依依
（15分）金柑果醋能够改善和治疗高血压、心血管疾病等，科研人员采用固定化醋酸发酵生产金柑果醋。流程如下：

回答下列问题：
（1） 金柑榨取的果汁比较浑浊，往往在榨汁前加入__________酶处理，同时提高出汁率。
（2） 在接种固定化醋酸菌之前加入酒精的目的是_______________________。探究起始酒精度对醋酸发酵的影响时发现，随着起始酒精度的增加，醋酸产量先增加后减少。醋酸产量减少最可能的原因是________________________________________。
（3） 固定化醋酸菌常采用_______法，用海藻酸钠为载体。在发酵过程中测得发酵液渗漏的游离醋酸菌逐渐增多，出现上述现象最可能是由于______________________________。因此，在使用过程中要解决好固定化醋酸菌易破裂的问题。
（4） 如果要比较固定化醋酸菌与游离醋酸菌发酵的效果，为了排除海藻酸钠对实验结果的 影响，还应该设置一组________________________为对照组。
参考答案（除标记外，每空2分）
（1） 果胶；
（2） 为醋酸发酵提供足够的底物； 酒精度过高时会抑制醋酸菌的生长和代谢（3分）
（3） 包埋； 海藻酸钠浓度较低，醋酸菌细胞不断生长繁殖，使凝胶珠破裂（3分）
（4） 海藻酸钠制成不含醋酸菌的凝胶珠（3分）

武汉一中吴雅洁
1.试回答下列“血红蛋白质提取与分离实验”的有关问题：
（1）图示分离蛋白质的方法是 ，是根据 分离蛋白质的有效方法。
（2）图中的c是 ，a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是 （填字母），原因是 。
（3）装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡的存在，原因 。
（4）对分离得到的蛋白质进行纯度鉴定，使用最多的方法是 。
1.（除标注外，每空2分）
（1）凝胶色谱法 相对分子质量大小
（2）凝胶颗粒 a a相对分子量较大，无法进入凝胶内部，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快（3分）
（3）气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果；
（4）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

2、(15分)（改编题）东北农业大学科研人员利用双重固定法，即采用戊二醛作交联剂(使酶相互连接)、海藻酸钠作为包埋剂来固定小麦酯酶，研究固定化酶的性质，并对其最佳固定条件进行了探究。下图显示的是部分研究结果(注：酶活力为固定化酶催化化学反应的总效率，包括酶活性和酶的数量)，请分析回答问题。

(1)固定化酶的方法除了包埋法，还有____________和_________________。
(2)上图曲线表明浓度为______的海藻酸钠包埋效果最好，当海藻酸钠浓度较低时，酶活力较低的原因是__________________________________。
(3)固定小麦酯酶不但采用海藻酸钠直接包埋，同时用戊二醛作交联剂，这是因为__________________________________________________________。
（4）若想将微生物的发酵过程变成连续的酶反应，可以选择的技术是 。
参考答案(15分。除标注外，每空2分)
(1)化学结合法 物理吸附法
(2)海藻酸钠浓度为3%时酶活力最高。海藻酸钠浓度较低时包埋不紧密，酶分子容易漏出，数量不足，催化速率下降。（5分）
(3)酶分子很小，很容易从包埋材料中漏出，同时用戊二醛作交联剂避免了此不足。（4分）
（4）固定化细胞

武汉市第四十九中学 薛国凤
1、果胶酶在果汁生产中的应用
果胶酶的作用 pH
2
3
4
5 6 7
8
9
苹果汁的体积( mL)
10
10． 5
10． 5
10． 5 8 5． 8
5． 7
5． 8
苹果汁的澄清度
澄清
澄清
澄清
澄清 半混浊 混浊
混浊
混浊
果汁含有丰富的营养物质,是一种重要的饮料。在果汁生产过程中, 出汁率直接影响生产成本, 澄清效果又关系到质量好坏。近年来的研究和实践表明,使用酶制剂处理工艺是解决上述问题的有效途径。其中以果胶酶的应用最为广泛。果胶酶的用量、温度、PH等均会影响到出汁率，某兴趣小组做了一些列相关实验，结果如下：
试管编号
1
2
3
4
5
2% 的果胶酶溶液
0
0． 5mL
1mL
2mL
4mL
过滤后苹果汁的体积 5． 4mL
8． 5mL
9． 3mL
9． 5mL
9． 5mL
过滤后苹果汁的澄清度 混浊
澄清
澄清
澄清
澄清
表 1 酶量对苹果汁滤出量的影响
表2 PH对苹果汁滤出量的影响
（1）果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括 等。
（2）由表 1 可知，当 2% 的果胶酶溶液达到 1mL 后，继续增加酶的量，所得苹果汁的体积几乎不再增加，说明 ，由此可推断处理 10mL 苹果泥的果胶酶溶液最适用量应为 mL 左右。
（3）表2实验的因变量是 ，由表 4 可知，在 1 ～ 4 试管中，果胶酶的最适 pH 约在 之间。
（4）酶的活性是指 ，除以上因素外， 也会通过影响酶的活性影响到出汁率。
参考答案：
（除标注外，每空2分，共15分）
（1）多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶、果胶酯酶（3分）
（2）底物已经耗尽 1
（3）果汁的体积和澄清度 3 ～ 5
（4）酶催化一定化学反应的能力 温度
2、制备和应用固相化酶
固定化细胞技术是利用物理或化学方法将细胞固定在一定空间内的技术。魔芋胶是一种黏度较高的新型多糖胶，魔芋粉溶解形成的胶状多糖细腻，和海藻酸钠组合具有一定的柔软性和圆滑性，颗粒疏松多孔，便于酵母呼吸作用。选用海藻酸钠和魔芋粉作为固化交联剂做相关实验，结果见下表：
固定化酵母颗粒物理形态分析
指标1
1%海藻酸钠+1%的酵母浓度
1%海藻酸钠+5%的酵母浓度
魔芋粉/%
2
1
0
2
1
0
颜色
白
白
白
淡黄
淡黄
淡黄
形状
圆
圆
圆
圆
椭圆
椭圆
酵母/个
30
80
25
360
300
180
死亡率/%
17
17
20
9
10
11
（1）实验中采用 方法制备固定化酵母颗粒。固定化酶不适合用此方法的原因是 。
（2）实验的目的是探究 对固定化酵母颗粒的影响。
（3）综合考虑选用 作为固定化颗粒配比组合来制备固定化酵母比较合适。
（4）1%海藻酸钠配制时，加热要用小火或者间断加热，如果加热过快，海藻酸钠会 。
（5）将制备的固定化酵母加入到3%的葡萄糖溶液中进行静置培养，培养时间为48 h，分析固定化酵母利用还原糖的能力，结果如图：
分析可知，固定酵母添加量 %时还原糖利用能力最强；
（6）对固定化酵母细胞发酵产生的酒精，可以用酸性条件下的 进行测定。
参考答案：（除标注外，每空2分，共15分）
（1）包埋法 酶分子小，容易从包埋材料中漏出
（2）酵母浓度和魔芋粉浓度
（3）1%海藻酸钠+ 5%的酵母+2%魔芋粉（3分）
（4）焦糊
（5）20
（6）重铬酸钾

武汉市武钢三中 龚荣瑶 制备和应用固相化酶
【生物——选修1：生物技术实践】（15分）某小组将活化的酵母细胞与海藻酸钠溶液混合，制备了固定化酵母。在相同条件下，分别接种固定化酵母与游离酵母，进行产酒精发酵的比较实验，测定发酵液中的酒精度如下图曲线所示。

回答下列问题：
（1）固定化酵母是将酵母菌固定在海藻酸钠载体中，采用的固定方法称为 法。固定酵母菌一般不选用化学结合法或物理吸附法固定，其原因是 。
（2）上述实验结果表明，两种发酵方式相比，在酿酒的初期 发酵更具优越性，判断的理由是 。
（3）在酒精发酵过程中，一般选用固定化酵母进行发酵，不采用固定化酶发酵，其原因是 。
（4）在相同条件下，采用固定化酵母发酵生成的挥发酯，比游离酵母发酵方式低，新酒风味也略差。这是由于固定化酵母发酵酒精累积过快，酵母细胞内产酯和其它生产物的反应速度跟不上造成的。可通过采取 、 等措施以适当延长发酵时间得到解决。
【参考答案】
（1）包埋（2分） 酵母菌细胞个大，难以被吸附或结合（2分）
（2）固定化酵母（2分） 固定化酵母在发酵初期产生酒精速率快，产量高（2分）
（3）酒精发酵是由一系列酶催化的连续反应，固定化酶固定的一般是一种酶，对连续的酶反应来说操作困难；而固定化酵母固定的是一系列酶，操作容易。（3分）
（4）减小接种量（2分） 适当降低发酵温度（2分）（其它合理答案也给分）

华师一附中 汪洋 陈倩 酵母细胞的固定化
1. 某研究小组为了探究乳糖酶固定化条件进行了一系列实验，回答下列问题：
（1）乳糖酶能催化乳糖水解为______________，因此可用于制备低乳糖牛奶，满足乳糖不耐症患者的乳品消费需求。
（2）该小组将纯化的乳糖酶进行了如下操作：
在乳糖酶液中加入一定量的树脂，水浴振荡器中室温下振荡吸附4h后滤出。
‚将上一步得到的固定化酶室温下和3%的海藻酸钠混合，缓慢搅拌15min，滤出，浸泡于___X____溶液中，置于4℃下硬化4h，形成稳定凝胶珠。
上述步骤中涉及到的固定化技术有 ，其中X溶液为____________。其作用是__________________。
（3）该小组为了确定海藻酸钠的使用浓度，探究了不同浓度的海藻酸钠溶液对固定化过程的影响，得到如下图结果：

由图可知，使用海藻酸钠后，固定化酶活下降，原因可能是______________________，该小组不使用4%海藻酸钠进行实验的原因是__________________________________。
（4）海藻酸钠溶化是固定化操作中最重要的一环，决定实验的成败，最好采用______________的方法溶解。
【答案】（共15分，除标记外，每空2分）
（1） 葡萄糖和半乳糖
（2） 物理吸附法和包埋法 CaCl2溶液 与海藻酸钠反应生成稳定凝胶珠
（3） 包埋后使固定化酶与反应物不容易接近，可能导致反应效果下降（3分）
海藻酸钠浓度过高，很难形成凝胶珠
（4）小火间断加热

武汉三中 王小琴 汪艳玲
下图为正常血红蛋白（HbA)及镰刀型细胞贫血者合成的异常血红蛋白（HbS)，分别用胰蛋白酶水解成若干肽段，进行双向纸层析—电泳所得的图谱。请回答以下相关问题
（1） 在采血容器中要预先加入抗凝血剂柠檬酸钠，目的是 。
（2）红细胞的洗涤过程中，洗涤次数、离心速度和离心时间十分重要。洗涤次数少， ；离心速度过高和时间过长会使 ，达不到分离的效果。
（3）以下是血红蛋白分离提纯的基本步骤，正确的流程顺序是（ ）
①收集血红蛋白溶液 ②破碎细胞 ③洗涤红细胞 ④透析 ⑤分离纯化
A． ③②①④⑤ B．④③②①⑤ C．④③①②⑤ D．③②⑤④①
（4）据图分析镰刀型细胞贫血形成的根本原因最可能是控制血红蛋白合成的基因发生了碱基对的 （“增添”、“缺失”或“替换”）的结果，依据是 。
（5）如果将正常血红蛋白基因导入患者红细胞中， （能、否）根治该病，原因是 。
答案：（除标注的外，每空2分）
(1) 防止血液凝固 （2）无法除去血浆蛋白 白细胞等一同沉淀
（3）A （4）替换 HbA和HbS的电泳图中众多的肽段中只有一条存在差异，且差异肽段电泳位移相差较小，说明基因突变引起的血红蛋白质结构变化较小。
（5）否（1分） 人的红细胞是没有分裂能力的，即使在红细胞中导入正常基因也会在红细胞的成熟过程中丢失。

武汉一中 易兰 【血红蛋白的提取和分离】
1、凝胶色谱法又叫分配色谱法，是20世纪中叶发展起来的一种分离技术，由于设备简单、操作方便，分离高分子物质的效果好，广泛用于蛋白质的分离中。血液由血浆和各种血细胞组成，其中红细胞最多。而在红细胞的组成中，除水分外，约90%是血红蛋白，下图是以猪的血液为材料提取和分离血红蛋白的操作流程。

（1） 血红蛋白的提取和分离可分为四步：样品处理、粗分离、纯化和________。补充操作流程：②为________，⑥为________。
（2） 在第②步操作中，需将洗涤好的红细胞倒入烧杯中，加入一定量的_________（填“生理盐水”或“蒸馏水”），理由是___________________________________。
（3） 在第④步透析操作中，需要用的缓冲液是____________，用缓冲液处理的目的是______________________________________。
（4）通过凝胶色谱法将样品纯化的目的是 。
答案（15分，除标注外，每空2分）
（1）纯度鉴定（1分） 血红蛋白的释放 凝胶色谱柱的装填
（2） 蒸馏水 置于蒸馏水中的红细胞会发生渗透吸水，使红细胞涨破，释放血红蛋白
（3） （20mmol/L的pH为7.0的）磷酸缓冲液 模拟细胞内的pH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能
（4）去除相对分子质量较大的杂质
2、已知泡菜中亚硝酸盐的含量与腌制的时间、温度和食盐的用量都有关，若温度过高、食盐用量过低、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康，但食用的泡菜中亚硝酸盐含量过高时，对人类身体健康是也是不利的。为测定泡菜中亚硝酸盐的含量，某同学按如下操作流程进行实验：

（1） 测定亚硝酸含量的原理是：在__________条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生________反应后，与N—1—萘基乙二胺盐酸盐结合形成__________染料。
（2） 若要设置1μg、2μg、3μg、4μg、5μg、7.5μg的亚硝酸钠含量的标准比色液，实验中起对照作用的试管有____支。这些试管中有一只试管作为_______对照，其作用是__________________________________________。
（3） 若样品液与配制的亚硝酸盐标准显色液比色后，发现样品液与标准显色液的浓度不相吻合。为确定亚硝酸盐的浓度，还需怎么处理？___________________________________。

答案（15分，除标注外，每空2分）
（1） 盐酸酸化 重氮化 玫瑰红色
（2） 7 空白 排除加入试剂本身对实验结果的影响
（3） 应在已知浓度范围内，改变浓度梯度，进一步配制标准显色液继续实验。（3分）

江夏一中 高三生物组
37.某生物兴趣小组在“蛋白质的提取和分离”实验中，准备从猪的血液中初步提取血红蛋白，设计的提取分离流过程分为四步：样品处理、蛋白质粗分离、纯化、纯度鉴定。据此过程请回答下列问题：
（1）样品处理中红细胞要用 洗涤，洗涤的目的是 。在 的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。
（2） 蛋白质粗分离常用方法是透析，透析的原理是：
。
（3）蛋白质纯化常用的方法是凝胶色谱法，在填装凝