质粒DNA提取试剂盒的使用说明及步骤.doc

质粒ＤＮＡ提取试剂盒
一、 试剂盒组成 　
产品序列号及组成
K2303-50 (50次)
KarrotenTM  Mini Column
50
2ml Collection Tube
50
Buffer KBL1 (Lysis solution)
30 ml
Buffer KB  (Column balance solution)
15 ml
Buffer KW1 (Wash solution 1)
30 ml
Buffer KW2 (Wash  solution 2)
使用前加入70% 乙醇40 ml
Buffer KE  (Elution  solution)
5 ml
 二、用户需自备的试剂材料和准备工作
   请事先准备好70%乙醇、1.5 ml, 2 ml 离心管。  
  三、操作步骤：
请将40 ml 70% 的乙醇加入到KW2 试剂瓶中。 
1. 取一KarrotenTM Mini Column 柱裝在一个2 ml 收集试管上(已备)。加入300 μl Buffer KB平衡液至柱子內，室温下13,000 rpm 离心1 min，使平衡液完全流过柱子。弃去收集管中的平衡液. （保留空的收集管，继续往下使用）。特别注意：柱子不平衡，将导致DNA产率和纯度的减少。 
2. 按250 μl全血（适合各种抗凝剂，EDTA较好）加入500 μl KBL1 的比例加入裂解缓冲液，混匀，静置3min （时间超过3 min 也不影响DNA 抽提。人血以100 μl-300 μl，小鼠以50 μl-100 μl为最佳，当全血体积小于250 μl时，KBL1体积不能小于500 μl）。如果样品是无细胞的血清等，应按比例增加体积. 
3．将混合液转移至已平衡的吸附柱內，室温下13,000 rpm 离心30s，使裂解液完全流过柱子。保留柱，弃去收集管中的过滤液，将柱重新放入收集管。（如混合液体积过大，可以分成数次上柱，每次上样量不要超过700 μl)  
4. 把柱装入2ml 收集管中，加入500 μl Buffer KW1，室温下13,000 rpm 离心30s，弃去收集管中的过滤液， 保留柱。
5．把柱装入2ml 收集管中，加入700 μl Buffer KW2，室温下13,000 rpm 离心30s，弃去收集管中的过滤液， 保留柱。注意： Buffer KW2在使用之前必须加入40 ml 70%乙醇，并置于室温下。 
6.（可选）重复用700 μl 70%乙醇 （室温）洗涤柱子。室温下12,000 rpm离心1min。 
7. 弃收集管中的滤液，将空柱子套回2ml收集管内收集管。室温下,最高转速或13,000 rpm离心2 min以甩干柱子基质残余的液体。 （注意：省去这一步将导致残留乙醇于ＤＮＡ中）  
8. 把柱子装在一个干凈的1.5 ml 离心管上，加入50 μl的KE (或者用灭菌的TE 10 mM tris-HCl, pH 8.0或纯水代替，纯水可能影响DNA洗脱效率)，65℃放置5-10 min, 13,000 rpm离心1min以洗脱DNA。 
附录：1. 主要流程图

  裂解全血，KBL1
　　　　　　　   ,
  通过平衡过的吸附柱, KB

                 漂洗吸附柱，KW1 

             漂洗吸附柱，KW2

  洗脱DNA, KE

　　　　　　　      保存DNA